两种不同条件对中药膏方制作质量的影响

吴声振 邬素珍 吴向维

（广东省佛山市佛山复星禅诚医院，广东 佛山 528000）

中药膏方又名煎膏剂、膏滋，是中药饮片经水浸泡、煎煮、浓缩，加饴糖、蜂蜜等辅料收膏制成的半流体剂型[1-3]。膏方具有浓度高，作用相对稳定、持久、缓和，适用性广，易保存，体积小，服用方便等诸多优点[4-6]，对于慢性、虚损性疾病，具有药效持久的优势[7-9]。随着大众对治未病及养生保健意识的加强，膏方被日益推广应用。因此，膏方产品的质量提升值得进一步探索和研究。目前，传统中药的浓缩是在常温常压下进行敞开式长时间进行[10]。敞开式的浓缩模式易造成挥发性成分的流失，而且药液长时间处于100 ℃，某些热敏性有效成分将被破坏，并增加了无效成分的含量[11-13]。基于上述弊端，我院自主研发并获国家专利的“并联式中药膏方浓缩制备系统”及“混合式真空冷却装置”，是通过低温负压技术降低冷凝器中二次蒸汽压力，增大传热温度差[14]，降低溶剂沸点，减少有效成分损失，提高药液浓缩效率。为验证自主研发设备的实用性，本研究以护肝利湿膏、卵巢护养膏、内异膏为代表方，从有效成分含量、成品稳定性的角度对负压与常压浓缩条件进行比较，探讨制作中药膏方最佳的浓缩条件。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BT25S型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；微压中药煎煮机（北京东华原医疗设备有限公司）；KQ2200E型超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（GZX-9023型，上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）；并联式中药膏方浓缩制备系统（自主研发，专利号：201620659405.0）；混合式真空冷却装置（自主研发，专利号：201620656314.1）。

1.2 试药 芍药苷对照品，批号：110736- 202044；淫羊藿苷对照品，批号：110737- 202017；丹酚酸B对照品，批号：111562-201917。上述对照品均来自中国食品药品检定研究院；水为重蒸水，其他试剂均为色谱纯。

1.3 药材 ①护肝利湿膏：白芍、黄柏、白术、佛手、山药等，本方由我院治疗非酒精性脂肪性肝病的常用汤剂化裁而来[15]，按组方配比称取饮片3批，每批30剂。②卵巢护养膏：仙茅、巴戟天、黄柏、淫羊藿等，本方由《妇产科学》中二仙汤化裁而来[16]，按组方配比称取饮片3批，每批30剂。③内异膏：丹参、红花、牛膝、续断、莪术等，本方由我院治疗子宫内膜异位症的汤剂处方化裁而来，按组方配比称取饮片3批，每批30剂。上述中药饮片从广州致信药业股份有限公司购进，并经佛山市中药研究会李满联副主任中药师鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 样品制备

2.1.1 提取液制备 按批分取护肝利湿膏、卵巢护养膏、内异膏膏方饮片，分别按照以下方法提取：①护肝利湿膏[15]：浸泡4 h，加8倍量水，煎煮2次，每次60 min。②卵巢护养膏[16]。③内异膏：浸泡4 h，加8倍量的水，煎煮3次，每次60 min。分别滤过上述提取液，得到护肝利湿膏提取液3批，每批提取液体积为32 000 mL；卵巢护养膏提取液3批，每批提取液体积为33 000 mL；内异膏提取液3批，每批提取液体积为35 000 mL。

2.1.2 浓缩液制备 分别取护肝利湿膏、卵巢护养膏、内异膏提取液各3批，平分为两组，常压组于常压条件浓缩，负压组接入自主研发的“并联式中药膏方浓缩制备系统”进行浓缩，两组药液浓缩至1 000 mL时停止加热，分别滤过后得到3种膏方在不同条件下的浓缩液，具体批号命名见表1。

表1 护肝利湿膏、卵巢护养膏、内异膏不同条件下的浓缩液批号

2.2 不同浓缩条件对膏方制作质量的影响

2.2.1 不溶物测定 取2.1.2项所得的浓缩液滤过后的滤渣，分别加热水200 mL，搅拌使之溶化，放置3 min后观察结果，负压组未发现不溶物，常压组的卵巢护养膏浓缩液中发现焦屑等不溶物。

2.2.2 含量测定

2.2.2.1 护肝利湿膏中芍药苷的含量测定

色谱条件：色谱柱：Amethyst C18-H（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）（14∶86）；进样量：10 μL。

对照品溶液制备：精密称定芍药苷标准品适量，加适量甲醇制成浓度为1.504 mg/mL的芍药苷对照品溶液。

供试品溶液制备：取2.2.1项所得护肝利湿膏浓缩液（FYHG01、FYHG02、FYHG03；CYHG01、CYHG02、CYHG03），每组各取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，取上清液，滤过，即得。

线性关系考察：取芍药苷对照品溶液，分别加甲醇稀释成0.0602、0.1504、0.3008、0.7520、1.504 mg/mL的溶液，注入HPLC分析，以对照品浓度与相应峰面积进行线性回归，得芍药苷的回归方程Y=3452X+1492.4（r=1.0），在0.0602～1.504 mg/mL范围内线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计算各峰面积。结果芍药苷的峰面积RSD为1.45%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液，按色谱条件，分别于0、2、6、8、10、12、24 h进样测定，记录芍药苷的峰面积，结果芍药苷的平均峰面积RSD为0.96%，表明护肝利湿膏供试品在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批护肝利湿膏浓缩液（FYHG01）6份，按供试品溶液制备方法制备供试品，再按色谱条件进样，测定芍药苷峰面积，并计算其含量。结果芍药苷的平均含量为14.83 mg/g，RSD为1.46%，表明方法重复性良好。

加样回收实验：取已知含量的护肝利湿膏浓缩液（FYHG01）6份，分别加入已知含量的对照品，按供试品溶液制备方法制备供试品，按色谱条件测定，记录峰面积，并计算各峰面积的RSD。芍药苷的平均加样回收率（n=6）为100.35%，RSD为2.26%。表明样品回收率良好，该方法准确率较高。

2.2.2.2 卵巢护养膏中淫羊藿苷的含量测定

色谱条件：色谱柱：Sepax Bio-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min；流动相：乙腈-水（30∶70）；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

对照品溶液制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为0.1520 mg/mL的淫羊藿苷对照品溶液，摇匀，即得。

供试品溶液制备：取2.2.1项所得卵巢护养膏浓缩液（FYLC01、CYLC01），每组各取10 mL，乙酸乙酯振摇提取3次，每次30 mL，分取乙酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

线性关系考察：取淫羊藿苷对照品溶液，分别加甲醇稀释成0.0060、0.0152、0.0304、0.0760、0.1520 mg/mL的溶液，注入HPLC分析，以对照品浓度与相应峰面积进行线性回归，得淫羊藿苷回归方程Y=21.024X+82.594，在0.0060～0.1520 mg/mL范围内线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计算各峰面积。结果淫羊藿苷的峰面积RSD为1.65%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液，按色谱条件，分别于0、2、6、8、10、12、24 h进样测定，记录淫羊藿苷的峰面积，结果淫羊藿苷的平均峰面积RSD为1.33%，表明卵巢护养膏供试品在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批卵巢护养膏浓缩液（FYLC01）6份，按供试品溶液制备方法制备供试品，再按色谱条件进样，测定淫羊藿苷峰面积，并计算其含量。结果淫羊藿苷的平均含量为1.32 mg/g，RSD为1.65%，表明方法重复性良好。

加样回收实验：取已知含量的卵巢护养膏浓缩液（FYLC01）6份，分别加入已知含量的对照品，按供试品溶液制备方法制备供试品，按色谱条件测定，记录峰面积，并计算各峰面积的RSD。淫羊藿苷的平均加样回收率（n=6）为101.67%，RSD为3.31%。表明样品回收率良好，该方法准确率较高。

2.2.2.3 内异膏中丹酚酸B的含量测定

色谱条件：色谱柱：Sepax Bio-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长：286 nm；流速：1.0 mL/min；流动相：以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按表2程序进行梯度洗脱；柱温：30 ℃，进样量10 μL。见表2。

表2 梯度洗脱程序

供试品溶液的制备：取2.2.1项所得内异膏浓缩液（FYNY01、CYNY01），每组各取10 mL，乙酸乙酯振摇提取3次，每次30 mL，分取乙酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成浓度为1.0 mg/mL的丹酚酸B对照品液。

线性关系考察：取丹酚酸B对照品溶液，分别加甲醇稀释成0.04、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/mL的溶液，注入HPLC分析，以对照品浓度与相应峰面积进行线性回归，得丹酚酸B的回归方程Y=1682.1X -830.24（r=0.9999）。在0.04～1.0 mg/mL时，线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，并计算各峰面积的RSD，结果丹酚酸B峰面积RSD为1.06%，表示仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液，按色谱条件，分别于0、2、6、8、10、12、24 h进样测定，记录丹酚酸B的峰面积，结果丹酚酸B的平均峰面积RSD为1.27%，表明内异膏供试品在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批内异膏浓缩液（FYNY01）6份，按供试品溶液制备方法制备供试品，再按色谱条件进样测定丹酚酸B峰面积，并计算其含量。结果丹酚酸B的平均含量为1.79 mg/g，RSD为2.12%，表明方法重复性良好。

加样回收实验：取已知含量的内异膏浓缩液（FYNY01）6份，分别加入已知含量的对照品，按供试品溶液制备方法制备供试品，按色谱条件测定，记录峰面积，并计算各峰面积的RSD。丹酚酸B的平均加样回收率（n=6）为99.78%，RSD为1.57%。表明样品回收率良好，该方法准确率较高。

2.2.3 不同浓缩条件对膏方有效成分的影响 使用HPLC分别测定常压和负压浓缩后药液中各膏方有效成分的含量，计算转移率（F%）（F%=水提液中有效成分的量/饮片中有效成分的量×100%），转移率越高说明膏方有效成分的损失越少，质量越高。见表3。

表3 不同浓缩方法对膏方有效成分的影响

2.3 不同浓缩条件所得膏方的稳定性比较 分别取

2.2.1 项制得的护肝利湿膏（FYHG01、FYHG02、FYHG03；CYHG01、CYHG02、CYHG03）、卵巢护养膏（FYLC01、FYLC02、FYLC03；CYLC01、CYLC02、CYLC03）、内异膏（FYNY01、FYNY02、FYNY03；CYNY01、CYNY02、CYNY03）浓缩液，经收膏后制成膏方，在常温下存放120 d，分别于0、7、14、30、60、90、120 d观察成品外观，并按照非无菌产品微生物限度检查方法[17]取样检查。结果表明，负压和常压浓缩所得膏方120 d内外观无明显变化，微生物限度均符合要求。见表4。

表4 不同浓缩条件所得膏方霉菌及酵母菌检测结果

2.4 不同浓缩方法的成本比较 分别记录2.1.2项不同膏方在不同条件下浓缩所需时间，计算浓缩时间平均值。以3种膏方的平均浓缩时间为代表，得到每份膏方（30剂/份）在不同浓缩条件下的平均耗时，并计算相应成本。结果表明，每份膏方的制作耗时负压浓缩比常压浓缩短238 min，以常压和负压浓缩设备功率均为1 000 W，电费以1元/（kW·h）计算，每份膏方使用负压浓缩制作能节省3.97元，以我院每年膏方制作量1万份计算，每年可节约制作时间3.93万小时，节省电费3.97万元，即负压浓缩的成本约为常压浓缩的50%。见表5。

表5 不同条件下每份膏方的制作成本

3 讨论

常压浓缩时，某些膏方因含有大量黏性成分，随着药液逐渐变浓，溶液传热变慢[18]，加热面的热量不能及时转移，导致底部焦化，故浓缩过程需要经常搅拌，极其耗费人力。低温负压浓缩通过强化蒸发作用促进溶液传热[19]，避免局部过热，使劳动力得以解放，提高了生产效率和操作安全性。

质量稳定是评价膏方临床用药的安全性和有效性的重要指标之一，膏方中的有效成分是其发挥临床功效的物质基础，也是评价膏方质量的重要依据，而长时间高温加热会影响有效成分的稳定性。实验结果表明，负压环境下，3种膏方中的有效成分芍药苷、淫羊藿苷、丹酚酸B的转移率均高于常压浓缩，且负压浓缩时间为常压浓缩的1/2，在膏方制作中更具有优势。

根据文献报道[20-21]，煮沸灭菌法一般灭菌时间为30～60 min，低温负压浓缩技术溶液沸点较低，浓缩时间较短，为验证膏方浓缩过程已有效灭菌，故对膏方成品进行微生物限度检测，实验结果证明，该技术符合灭菌要求。

成本比较表明，常压浓缩能耗大，效率低，难以满足日益增长的膏方制作需求。负压浓缩能耗小、效率高，配合本院自发研制的“并联式中药膏方浓缩制备系统”，可兼顾大批量生产与个性膏方小批量制作，使制作成本缩减为常压浓缩的50%，更适合应用于膏方制作。目前该膏方浓缩制备系统仅在本院安装使用，存在一定局限性，更多优化方案需要在后续推广使用中获得。