芍药苷在不同时期芍药根中积累的测定

黄学文 贾 楠 李 杰 王明莹

（呼伦贝尔学院生命科学学院，内蒙古海拉尔 021008）

芍药（Paeonia lactifloraPall.）属芍药科芍药属多年生草本植物［1］，是观赏花卉兼中药材。芍药的品种繁多，但作为中药材的赤芍本源是野生芍药［2］，其根入药（药材名：赤芍），能清热凉血、活血散瘀，主要分布于我国东北、河北、山西、宁夏南部、陕西西南部、甘肃东南部，日本、朝鲜、蒙古国东部和北部、俄罗斯（西伯利亚地区、远东地区）［3］。芍药的主要药用成分是单萜类化合物—芍药苷［4］，经前人研究发现，芍药苷对动物的神经性疾病［5］、脑损伤疾病［6］有显著作用，还具有一定的免疫调节功能［7］。芍药作为中药材原料，市场需求量大；由于环境和人为等因素，野生芍药越来越少。芍药在我国栽培历史悠久，目前黑龙江省和内蒙古东部作为经济作物普遍栽植。呼伦贝尔市林缘和草甸草原是野生芍药的主要分布生境。笔者通过对芍药栽培试验，为当地道地药材仿野生种植示范和产业化，以及野生芍药迁地保护提供实践指导和数据支撑。

1 自然地理概况

试验地位于鄂温克旗巴彦托海镇苗圃。鄂温克旗巴彦托海镇属中温带半干旱大陆性草原气候，年平均气温为-1～2 ℃，1月（最冷月）平均低温为-30.83 ℃，7月（最热月）平均高温为25.84 ℃。年平均降水量为350～370 mm，1月平均降水量为3.79 mm，7月平均降水量为99.38 mm。年日照时数平均为2 800 h。无霜期平均100 d，5—9月月均低温大于0 ℃。土壤类型是栗钙土。

2 材料与方法

2.1 样品采集样品采集地位于鄂温克旗巴彦托海镇苗圃。样品采集时间：2016年6月至2017年5月。

2.2 材料准备确定芍药植株最佳采收器官：取3年果实成熟期芍药植株的根、茎、叶，去除泥沙，阴干，粉碎过60目筛，密封保存备用。确定芍药植株最佳采收年份：取采集地1、2、3、4年果实成熟期芍药植株的根，去除泥沙，阴干，粉碎过60目筛，密封保存备用。确定芍药植株最佳采收时期：取3年萌发期、展叶期、开花期、果实成熟期、枯萎后期芍药植株的根，去除泥沙，阴干，粉碎过60目筛，密封保存备用。

2.3 测定方法检测芍药苷常用方法有高效液相色谱法、薄层扫描法、毛细管电泳法［8］。根据《中国药典（2015版）》［9］采用高效液相色谱法测定芍药苷，

2.3.1 对照品溶液的制备 取在P2O5减压干燥器中干燥36 h的芍药苷标准品，精密称取，加甲醇制成1 mL含0.5 mg的溶液［10］。

2.3.2 供试品溶液的制备 精密称取芍药材料（过60目筛）0.5 g，置于塞盖的锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，浸泡4 h，超声处理20 min，冷却，再称定重量，不足用甲醇补足，摇匀，过滤，取滤液，即得供试品溶液［11］。

2.3.3 色谱条件 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾流动相（40∶60）柱温：40 ℃；波长：230 nm；流速：1 mL/min；时间：15 min；进样量：10 μL［12］。在此条件下芍药苷保留时间为10 min左右，绘出标准品与供试品的高效液相色谱图，如图1、2。

图1 芍药苷标准品高效液相色谱

图2 芍药苷供试品高效液相色谱

2.3.4 系统适用性检验

（1）色谱柱理论板数：用来评价色谱柱的分离效能。根据《中国药典》［13］，芍药苷标准品的理论板数是3 000。

（2）精密度：用相对标准偏差（RSD）表示。取各品种下的对照品各10 μL，进样5次，标准值2.0%。

（3）重复性：取果实成熟期的样品重复5次，测得平均含量。重复性指标为3.34%。

（4）标准曲线绘制精密称取芍药苷标准品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL用甲醇定容到1 mL，分别得到0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL，进样量为10 μL。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线如图3。

图3 芍药苷标准品溶液标准曲线

3 结果及分析

3.1 系统适用性检验结果芍药苷供试品的色谱柱理论板数是6 400，数值远远大于《中国药典》标准3 000。说明芍药苷峰与其他峰能够很好地分离；精密度（RSD）为1.7%，小于标准2.0%，说明精密度良好；重复性所测峰面积RSD为2.2%，小于3.34%，说明重复性良好。标准曲线y=4 150.7x+59 962，R2=0.986 3，试验结果呈现良好的线性关系。

3.2 不同营养器官芍药苷含量的变化情况取同一年份、同一时期、不同器官的芍药，测定结果见表1，可以发现不同器官芍药苷的含量：根（2.65）>叶（1.23）>茎（0.74）。同时P值小于0.05，不同器官芍药苷的含量存在差异，具体见表1。

表1 不同器官芍药苷的含量 单位：%

3.3 不同年份芍药苷含量的变化情况取同一时期、不同年份的根进行芍药苷测定，经研究发现在不同年份中4年植株的芍药苷含量最大，为3.07%；同时F检测值大于1且大于其临界值，P值小于0.05，说明不同年份中所含芍药苷的比重存在差异，具体见表2。

表2 不同年份芍药根中芍药苷的含量 单位：%

3.4 不同时期芍药苷含量的变化情况取同一年份、不同时期的根测定芍药苷的含量，确定最佳的采收期。如图4所示，各个时期芍药苷含量均呈现高—低—高的趋势，其中枯萎后期的芍药苷含量最多，为3.34%。萌发期地上部分还没有生长，有效成分在根中积累，因此萌发期所含芍药苷较高；到展叶期时，茎、叶开始生长，根中有效成分转化为其他代谢产物，为茎叶提供能量；到枯萎后期地上部分枯萎，有效成分蓄藏于根中，此时根中的芍药苷含量最高。经单因素方差分析，同时F检测值大于1且大于其临界值，P值小于0.05，说明不同时期根中所含芍药苷的比重存在差异。

图4 不同时期芍药根中芍药苷含量变化

从不同时期的折干率方面分析可得，4月下旬是芍药的萌发期，5月上旬是展叶期，6月份是花期。7月份是果期，8月份到9月底是营养生长期，10月份以后是枯萎后期。7、8月份为海拉尔区雨季，降水较多，因此折干率略有降低，到枯萎后期，气候干燥折干率明显上升，具体见图5。

图5 芍药根不同时期折干率的变化情况

综上所述，芍药的最佳采收器官是根，最佳采收年份是4年，最佳采收时期是枯萎后期。且各时期平均含量为2.47%，大于2015《中国药典》中赤芍作为药材芍药苷的含量1.8%，因此鄂温克旗巴彦托海镇苗圃中的芍药符合标准，质量良好。

4 结论与讨论

4.1 结论该研究采用高效液相色谱法对芍药苷进行测定，经系统性检验，该方法分离度强，灵敏度及重复度均良好。标准曲线y=4 150.7x+59 962，R2=0.986 3，试验结果呈现良好的线性关系。该研究就鄂温克旗巴彦托海镇苗圃中芍药进行测定，通过对不同器官、不同年份及不同时期芍药苷的测定，研究表明芍药植株根中芍药苷含量最高，为2.65%；4年植株芍药苷含量最高，为3.07%；枯萎后期芍药苷含量最高，为3.34%。研究发现4年植株枯萎后期根中芍药苷的含量最高，说明此时地上茎叶已经枯萎，枯萎过程中芍药苷等有效成分由茎叶转移到根，主要积累在根中。且枯萎后期折干率为最高，水分含量最低，所以在海拉尔地区栽培芍药时，9月下旬到10月上旬是采收的最佳时期。

4.2 讨论研究也发现该地区各时期芍药苷平均含量（2.47%）高于《中国药典》的标准（1.8%），仅从此方面看，该地区芍药品质良好，适合作为中药材进行大面积种植，投入药材市场。若要对该芍药进行综合评价，需对其营养价值及药用价值进行综合考量。由于条件有限，仅有4个年份的芍药，芍药苷的积累是否与年份的增加一直成正比，有待进一步考察。