乙型肝炎性原发性肝癌患者乙肝病毒DNA载量与免疫功能的关系

王 丹

江苏省盐城市第二人民医院中西医结合肝病科 224000

原发性肝癌在临床上十分常见，恶性程度较高，危及患者生命[1]。该病病因主要为乙型肝炎，乙型肝炎发病率极高，且发病较为隐匿，重视度不足，为原发性肝癌发病率居高不下的重要性原因。报道显示，原发性肝癌发病期间肿瘤细胞会诱导免疫抑制，对Treg进行上调，肿瘤免疫逃逸，影响预后[2]。有研究发现，乙肝病毒DNA载量在评估乙型肝炎原发性肝癌疾病的发展中具有重要意义，且乙型肝炎原发性肝癌患者可能会诱导甚至加重细胞免疫功能紊乱，从而促使肿瘤细胞生长、转移，影响预后[3]。但目前，临床关于乙型肝炎性原发性肝癌患者乙肝病毒DNA载量与免疫功能的关系报道较少，且不深入。基于此，本文选择我院收治的乙型肝炎原发性肝癌患者与健康体检者进行对比分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月—2022年2月我院收治的乙型肝炎性原发性肝癌患者60例(观察组)，取同期健康体检人员60例(对照组)，对照组：男33例、女27例，年龄30～77岁，平均年龄(53.50±9.21)岁，体质量指数(BMI)18～23，平均BMI 20.50±1.12；观察组：男35例、女25例，年龄32～77岁，平均年龄(54.50±9.25)岁，BMI 19～22，平均BMI 20.50±1.10；两组患者临床资料具有同质性(P>0.05)。诊断标准：依据《肝病诊疗指南》[4]，经病理检查确诊为乙型肝炎性原发性肝癌。纳入标准：符合上述诊断标准者；年龄30～77岁；已签署同意书。排除标准：肝转移癌、其他恶性肿瘤者；合并心、脑、血管疾病；合并局部感染/全身性感染者；近期使用免疫调节剂者；免疫功能障碍者；临床资料不完整；依从性不佳者。

1.2 方法 获得受试者知情同意情况下，保证无菌抽取2ml的EDTA抗凝血，混匀吸取100μl全血，使其混合于CD3+、CD4+、CD8+检测试剂中，于37℃避光环境下，孵育15min。孵育后依次加入2ml溶血素，再次混匀、孵育，待液面清亮后应用1ml/管BD鞘液，以1 500r/min转速持续离心处理2遍，时间5min内，以400μl BD鞘液重悬细胞。采用流式细胞仪(厂家：美国Becton Dicknson，型号：FACSCalibur)，对两组研究对象CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群水平、调节性T细胞(Treg)含量进行检测，并计算CD4/CD8比值。以荧光定量PCR法，对两组研究对象的乙肝病毒DNA载量进行测定、对比。测定两组受试对象TNM分期情况。

2 结果

2.1 两组T淋巴细胞亚群及Treg细胞含量对比 与对照组比较，观察组CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值明显更低，CD8+%水平、Treg细胞含量明显更高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组T淋巴细胞亚群及Treg细胞含量对比

2.2 不同TNM分期患者乙肝病毒DNA载量、T细胞亚群免疫功能分析 60例乙型肝炎性原发性肝癌患者中TNM分期为Ⅱ期者28例、Ⅲ期者32例。相较于TNM分期为Ⅱ期的患者，Ⅲ期患者的乙肝病毒载量明显更高，CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值更低，CD8+%、Treg细胞含量明显更高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同TNM分期患者乙肝病毒DNA载量、T细胞亚群免疫功能分析

2.3 乙肝病毒DNA载量与T细胞亚群免疫功能相关性分析 经Spearman相关性分析，乙肝病毒DNA载量与CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值呈负相关关系(r=-0.789、-0.856、-0.812，P<0.05)，与CD8+%、Treg细胞呈正相关关系(r=0.889、0.882，P<0.05)。见表3。

3 讨论

近年来，原发性肝癌疾病发病率呈逐渐上升趋势，该病的发生多与肝硬化、病毒性肝炎、化学致癌物质等有关，患者常见肝区疼痛、消瘦、食欲减退、全身及消化道症状、肝大等，严重威胁患者生命安全[5]。报道认为，原发性肝癌多是由于感染乙肝病毒后，若长期处于慢性肝炎的状态，则极易导致肝硬化，造成肝癌[6]。现阶段，乙型肝炎已经发展为一个世界性的公共卫生问题，且该疾病的发病率一直居高不下，大多数的情况下，乙型肝炎病毒并不会损害肝细胞，多经由肝表面乙型肝炎病毒行免疫应答，肝脏长时间为慢性炎症的状态。近年来，报道指出乙肝病毒患者的DNA载量与其术后康复效果具有直接关系，且与疾病进展、TNM分期具有一定相关性[7]。为进一步探讨乙型肝炎性原发性肝癌患者乙肝病毒DNA载量与免疫功能的关系，为临床诊断及治疗此病提供可靠的依据，本文选择我院乙型肝炎性原发性肝癌患者与健康体检者作为探讨对象，进行对比分析。

本文结果表明，与对照组比较，观察组CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值明显更低，CD8+%、Treg细胞含量明显更高。李富[8]在相关研究中发现，与对照组比较，观察组患者CD4+%明显更低，CD8+%、Treg细胞含量明显更高，与本文结果具有一致性。相较于健康群体，乙型肝炎性原发性肝癌患者CD3+%、CD4+%、CD8+%、CD4/CD8比值等T细胞亚群、Treg细胞具有明显的变化。分析原因可能为，肝癌微环境下的机体免疫状态与肝癌的发生及发展具有直接关系，免疫相关细胞、细胞因子在肝癌发展的整个过程中具有重要作用，对于肝癌患者具有不良的影响。

CD3+是一种成熟的T细胞共同分化抗原，表达于所有成熟的T细胞表面。基于表面分化抗原的不同，可以分为CD4+、CD8+两大种类，通过此两大种类细胞亚群的表达量，有助于反映患者的机体免疫情况。其中CD4+细胞亚群于免疫系统中具有辅助调节的作用，CD8+会诱导形成CTL，CTL结合于特异性靶抗原后，会释放穿孔素，破坏、诱导肝细胞凋亡，最终可发挥抗肿瘤及抗病毒的作用。Treg为一种免疫抑制T细胞，可分泌多种细胞因子，抑制细胞毒性T淋巴细胞的成熟，从而抑制机体对肿瘤细胞的杀伤作用。研究结果进一步提示，若乙肝患者感染HBV，淋巴细胞亚群的免疫功能会发生不同程度的受损情况，主要是由于乙肝病毒可经由自身树突状细胞的成熟致使乙肝病毒特异性T淋巴细胞生存明显减少，从而导致免疫功能显著降低。

许怡等[9]报道显示，乙肝患者病情进展为肝癌后，CD3+、CD4+T淋巴细胞的表达量会显著降低，提示乙肝肝癌患者细胞功能受损越严重，肿瘤细胞更易发生免疫逃逸，引发肝癌。本文结果显示，相较于TNM分期为Ⅱ期的患者，Ⅲ期患者的CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值更低，CD8+%水平、Treg细胞明显更高。这与许怡等报道具有一致性。但本文研究还发现，与Ⅱ期患者比较，Ⅲ期患者乙肝病毒DNA载量明显更高(P<0.05)。数据表明，随着患者病情的进一步进展，淋巴细胞免疫功能更易受损，TNM分期越高，乙肝病毒DNA载量亦越高。原因可能为，乙型肝炎性原发性肝癌发生发展期间，会产生大量的免疫抑制因子，此因子在降低外周血中CD3+、CD4+细胞含量方面具有重要作用，使CD8+细胞、Treg细胞含量明显提高，损伤T淋巴细胞免疫功能。由此可见，乙肝病毒DNA载量增高可作为患者预后不良的有效预测因素[10]。

综上所述，乙型肝炎性原发性肝癌患者乙肝病毒DNA含量与CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值呈负相关，与CD8+%、Treg细胞呈正相关，且TNM分期越高，乙肝病毒DNA载量越高，在对该病进行诊断及治疗中应重点检测其T细胞亚群免疫功能指标，从而控制肝癌的进展，延长患者生存期。