肝细胞癌患者血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平及在预后判断中的意义*

齐 锐，王何斌，李 劲，杨茂辉，冯 燕，徐 杰

攀枝花学院附属医院肝胆科，四川攀枝花 617000

肝细胞癌作为我国最常见的原发性肝癌组织学类型，约占原发性肝癌的85%～90%，同时也是造成癌症相关死亡的第三大原因[1]。因此，为了降低病死率，早期诊断、早期预防至关重要。随着生命医学的发展和进步，外周血肿瘤相关抗原自身抗体与肿瘤发病的关系逐渐受到重视。凋亡抑制因子(BIRC5)作为凋亡抑制因子基因家族成员，具有促进癌细胞生长及抑制细胞凋亡等作用[2]；膜联蛋白A1(ANXA-1)是一种在细胞增殖和分化、凋亡细胞吞噬清除等过程中发挥重要作用的因子[3]。相关研究显示，BIRC5、ANXA-1在癌组织中异常表达可导致自身抗体产生[4-5]，而血液中自身抗体的检测能够为肿瘤早期诊断提供依据。有研究表明，肺癌患者的血液中能检测出BIRC5、ANXA-1抗体[6-7]，但这两种抗体表达与肝细胞癌预后的关系尚不清楚。因此，本研究主要探讨肝细胞癌患者血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平及在临床预后判断中的意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年5月至2019年5月在本院进行治疗的121例肝细胞癌患者作为患者组，男72例、女49例，年龄35～73岁、平均(56.69±6.45)岁，分期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分别31例、40例、30例、20例。纳入标准：(1)符合《原发性肝癌诊疗规范》中关于肝细胞癌诊断标准[8]，并经病理学检查确诊；(2)签署知情同意书；(3)意识清楚。排除标准：(1)伴重要脏器功能障碍者；(2)伴其他恶性肿瘤者；(3)既往进行放化疗或手术治疗者；(4)临床资料不完整或中途退出者。另外，选取同期健康体检者97例为对照组，男60例、女37例；年龄36～74岁，平均(56.88±6.74)岁。所有患者出院后通过电话、上门等方式进行3年随访，截止时间为2022年5月31日。本研究已获本院医学伦理委员会批准。

1.2血浆BIRC5、ANXA-1抗体检测 入院后采用枸橼酸钠抗凝管抽取纳入研究者清晨空腹外周静脉血5 mL，3 000 r/min离心10 min后取上层血浆，置于-60 ℃冰箱内保存。采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行BIRC5、ANXA-1 IgG抗体检测[试剂盒购自吉尔生化(上海)有限公司]。采用0.1% PBST溶液洗涤微孔板2次，将血浆标本用0.5%小牛血清清蛋白稀释100倍后每孔加样50 μL，室温孵育1.5 h，按1∶50 000稀释的过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体50 μL(艾柏森生物科技有限公司)，室温下孵育1 h，洗板3次后显色，并在室温下避光显色25 min，再加入25 μL终止液，15 min内采用自动酶标仪检测450 nm标准波长和620 nm参考波长处吸光度(A)。每板同时设阳性对照、阴性对照，各标本均设复孔，测定2次。以特异性结合指数(SBR)表示血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平,SBR=(A样品-A阴性对照)/(A阳性对照-A阴性对照)。

2 结 果

2.1患者组、对照组血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平比较 患者组血浆BIRC5a、ANXA-1抗体水平均明显高于对照组(P<0.05)，两组血浆BIRC5b抗体水平比较无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平比较

2.2血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平与肝细胞癌临床病理特征的关系 肝细胞癌患者血浆BIRC5a、ANXA-1抗体水平与年龄、性别、肿瘤最大径均无明显关系(P>0.05)，但与临床分期、远处淋巴结转移、门静脉侵犯有关(P<0.05)，而肝细胞癌患者血浆BIRC5b抗体水平与年龄、性别、肿瘤最大径、临床分期、远处淋巴结转移、门静脉侵犯均无明显关系(P>0.05)，见表2。

表2 血浆BIRC5、ANXA-1抗体与肝细胞癌临床病理特征的关系

2.3按截断值分组 经ROC曲线分析，确定用于诊断肝细胞癌患者的血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平截断值分别为1.23、1.01。分为BIRC5抗体高表达组(BIRC5抗体水平>1.23，42例)和BIRC5抗体低表达组(BIRC5抗体水平≤1.23，79例)与ANXA-1抗体高表达组(ANXA-1抗体>1.01，43例)、ANXA-1抗体低表达组(ANXA-1抗体水平≤1.01，78例)，见图1。

图1 血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平诊断肝细胞癌患者的ROC曲线

2.4肝细胞癌患者总体生存情况 肝细胞癌患者3年总生存率为42.98%(52/121)，其中BIRC5抗体高表达组、抗体低表达组3年生存率分别为69.05%(29/42)、29.11%(23/79)，ANXA-1抗体高表达组、抗体低表达组3年生存率分别为62.12%(28/43)、30.77%(24/78)。BIRC5、ANXA-1抗体高表达组3年生存率均明显高于BIRC5、ANXA-1抗体低表达组3年生存率(χ2=17.844、14.734，均P<0.001)。

2.5肝细胞癌患者预后的多因素Cox回归分析 多因素Cox回归分析结果显示，临床分期、远处转移、门静脉侵犯均能够作为影响肝细胞癌患者TACE治疗预后的危险因素(P<0.05)，而BIRC5抗体(HR=0.35,95%CI:0.17～0.72)、ANXA-1抗体(HR=0.29,95%CI:0.16～0.53)可作为肝细胞癌患者预后的独立保护因素(P<0.05)，见表3。

表3 肝细胞癌患者预后多因素Cox回归分析

3 讨 论

肝细胞癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一，根据统计发现，我国肝细胞癌发病率位居癌症的第4位，同时也是全世界第3大癌症死亡原因[9]。该疾病起病隐匿，多数患者早期临床症状不明显，因此一旦确诊多为疾病晚期，而晚期肝细胞癌术后5年内的复发率高达70%[10]。肝细胞癌发生、发展是一个复杂的过程。有研究发现，自身免疫功能在肝细胞癌发生、发展中发挥重要作用。肿瘤相关自身抗体(TAAb)是机体对肿瘤相关抗原进行体液免疫应答的产物，不仅具有肿瘤特异性，还与疾病的早期诊断及预后有关[11]。目前已有研究发现，癌组织中的外周血生物指标的异常表达可导致血浆中出现相应抗体，并且在无症状前即可被检测，可能有助于肿瘤的早期诊断和肿瘤进展的监测[12]。BIRC5是一种相对分子质量15×103、基因位于染色体17q25的Survivin蛋白，其表达与促进细胞增殖和抑制细胞凋亡有关，并且在许多恶性肿瘤中过表达[13-14]。ANXA-1是钙离子依赖性磷脂结合蛋白超家族成员中第一个被发现的成员，不仅具有抗炎活性，同时可通过抑制免疫细胞聚集、迁移及活性削弱机体免疫监视功能[15]。既往研究显示，ANXA-1在肿瘤中表达失调，并且与肿瘤的发生、转移、多重耐药密切相关[16]。

本研究结果显示，患者组血浆BIRC5a、ANXA-1抗体水平均明显高于对照组(P<0.05)，且与肝细胞癌患者临床分期、远处淋巴结转移、门静脉侵犯有关(P<0.05)，而两组血浆BIRC5b抗体水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，说明血浆BIRC5、ANXA-1抗体在肝细胞癌患者血浆中升高，并且可能参与疾病发展。其中BIRC5a、BIRC5b是根据BIRC5蛋白结构不同抗原表位设计并合成的抗原多肽，而本研究BIRC5a、BIRC5b抗体在患者血浆中水平的差异是由于不同抗原表位的免疫原性不同而激发机体产生的免疫应答的能力也不同。既往研究显示，胃癌患者血清ANXA1水平升高，与患者TNM分期、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移有一定联系[17]。有研究显示，BIRC5表达在肾透明细胞癌中呈现上升趋势，且可作为早期诊断及不良预后指标[18]。进一步经ROC曲线确定了诊断肝细胞癌的血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平截断值，并根据截断值分为高表达组与低表达组。对不同组别患者的预后比较发现，BIRC5、ANXA-1抗体高表达组3年生存率分别高于BIRC5、ANXA-1抗体低表达组(P<0.05)，说明血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平与肝细胞癌患者预后存在密切关系，推测其抗体过度表达可能抑制肿瘤发生、发展。可能是由于肝细胞癌的发展过程中能够导致血浆BIRC5、ANXA-1表达上调，但随着其水平逐渐增多可刺激机体免疫系统产生相应抗体。同时多因素Cox回归分析结果显示，BIRC5抗体、ANXA-1抗体均可作为肝细胞癌患者预后的独立保护因素，由此推测BIRC5、ANXA-1抗体参与肝细胞癌发生、发展，可作为评估肝细胞癌预后的有效指标。BIRC5、ANXA-1在肿瘤组织中过度表达可抑制肿瘤细胞凋亡，促进细胞增殖[19-20]，而BIRC5、ANXA-1抗体作为机体抗肿瘤体液免疫应答的产物，其表达升高说明是机体机体免疫系统对肿瘤的抵抗，因此BIRC5、ANXA-1抗体表达升高能够达到清除肝细胞癌患者机体中的BIRC5、ANXA-1蛋白，进而抑制BIRC5、ANXA-1蛋白促进肝细胞癌患者进展。

综上所述，血浆BIRC5、ANXA-1抗体水平在肝细胞癌患者中均升高，且二者抗体高水平的患者3年生存率更高，可作为预测肝细胞癌患者预后的有效生物标志物。但本研究仍需大规模前瞻性研究的进一步验证。