炎性细胞因子、DBH基因多态性、烟酒习惯与帕金森病相关性

宋秋霞 张晓莺 刘燕 郭淼 王琳琳 王琳

(新疆生产建设兵团医院神经内科，新疆 乌鲁木齐 830002)

帕金病病(PD)是一种常见的神经退行性疾病，目前病因未明，神经炎症、基因遗传、环境因素等均有参与其中。目前，针对炎症-遗传、炎症-环境交互作用对PD影响的研究相对少见。本研究选择白细胞介素(IL)-6、IL-1β、CXCL5 3个炎性指标，并在同一研究对象中分析其DBH-5-TaqⅠ多态性和收集其烟酒习惯特点，以探讨神经炎症及神经炎症与DBH-5-TaqⅠ多态性或烟酒习惯联合作用对PD的影响。

1 对象与方法

1.1研究对象 病例组：2017年2月至2019年5月在新疆喀什地区农三师51团和53团、阿克苏4团、芳草湖农场、独山子地区流行病学调查过程中及新疆生产建设兵团医院确诊的PD患者，共94例。病例均符合英国脑库的诊断标准〔1〕。排除标准：(1)特发性震颤；(2)继发性帕金森叠加综合征；(3)严重痴呆、构音障碍影响情感表达；(4)同时患有其他精神疾患。对照组：同一时期收集的非脑部器质性疾病，无锥体外系疾病史，无神经系统变性病、精神疾患及家族史，在性别、年龄、文化上与PD组匹配的健康人，共110例。两组性别、年龄、受教育年限差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。该项研究的受检者均签署知情同意书。

表1 两组一般资料比较

1.2研究方法

1.2.1基本资料、烟酒习惯资料收集 采用统一的调查表，由一名研究生和副主任医师对研究对象进行面对面调查。内容主要包括一般资料(姓名、性别、年龄、民族、出生年月、职业、文化水平、受教育年限、家庭情况等)和烟酒习惯〔吸烟史：本人和(或)其配偶在3个月内抽烟量超过100支。饮酒史：连续3个月以上每周至少饮酒1次，每次至少>50 g〕。

1.2.2血清炎性细胞因子表达水平和DBH-5-TaqⅠ多态性测定 研究对象均在空腹状态下抽取静脉血3 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，静置30 min后进行离心处理(速度3 000 r/min，时间10 min)，离心后将标本分为血清和血细胞部分，均置于-80℃冰箱保存。(1)血清部分采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-6、IL-1β、CXCL5表达含量，操作均严格遵守标准操作程序进行。(2)血细胞部分使用天根生化科技公司血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。应用PCR-RFLP法完成DBH基因5 TaqⅠ多态性分析，可见3种基因型：T/T纯合子、C/C纯合子、T/C杂合子。

1.3统计学方法 应用SPSS17.0软件进行t检验、方差分析、χ2检验、非参数检验。

2 结 果

2.1炎性指标比较 病例组IL-6、IL-1β、CXCL5表达水平与对照组比较均无统计学差异(均P>0.05)。将研究对象按照性别分层：男性病例组IL-6表达水平较对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)；男性病例组IL-1β、CXCL5表达水平与对照组比较均无统计学差异(均P>0.05)。女性病例组IL-6、IL-1β、CXCL5表达水平与对照组比较均无统计学差异(均P>0.05)。将研究对象按照年龄分层：年龄>65岁病例组CXCL5表达水平较对照组降低，差异有统计学意义(P=0.024)；年龄>65岁病例组IL-6、IL-1β表达水平与对照组比较均无统计学意义(均P>0.05)。年龄≤65岁病例组IL-6、IL-1β、CXCL5表达水平与对照组比较均无统计学差异(均P>0.05)。见表2。

2.2两组烟酒习惯比较 病例组和对照组间吸烟史(61 vs 79例)、饮酒史(40 vs 41例)均无统计学差异(P=0.288、0.442)。

表2 血清样本中IL-6、IL-1β、CXCL5水平

2.3DBH-5-TaqⅠ多态性与PD的相关性 DBH-5-TaqⅠ 3种基因型的分布在病例组、对照组间无统计学意义(P>0.05)；DBH-5-TaqⅠ两种等位基因的分布在病例组、对照组间无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2.4炎性指标、烟酒习惯联合作用与PD的相关性分析 无吸烟史病例组IL-6表达水平较对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)；无吸烟史病例组IL-1β、CXCL5表达水平较对照组比较均无统计学意义(均P>0.05)。有吸烟史、有饮酒史、无饮酒史病例组IL-6、IL-1β、CXCL5表达水平较对照组比较均无统计学差异(均P>0.05)。见表4。

表3 两组DBH-5-TaqⅠ多态性分布比较〔n(%)〕

表4 炎性指标、烟酒习惯联合作用与PD相关性

2.5炎性指标、DBH-5-TaqⅠ多态性联合作用与PD的相关性 携带T/C基因型病例组CXCL5表达水平较对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)；携带T/C基因型病例组IL-6、IL-1β表达水平较对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。携带C/C基因型和T/T基因型病例组IL-6、IL-1β、CXCL5表达水平较对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。见表5。

2.6烟酒习惯、DBH-5-TaqⅠ多态性联合作用与PD的相关性 通过表3可以看到研究对象中T/T基因型携带者在病例组和对照组均偏少，故此处统计C/C基因型与C/T基因型之和为C基因携带者，计T/T基因型为非C基因携带者。结果显示，在有吸烟史、无吸烟史人群中，C基因携带率和非C 基因携带率的分布在病例组和对照组间均无统计学意义(P>0.05)；在有饮酒史、无饮酒史人群中，C基因携带率和非C 基因携带率的分布在病例组和对照组间均无统计学意义(P>0.05)；烟酒习惯和DBH-5-TaqⅠ多态性之间并不存在联合作用影响PD的发生。见表6。

表5 炎性指标、DBH-5-TaqⅠ多态性联合作用与PD相关性

表6 烟酒习惯、DBH-5-TaqⅠ多态性联合作用与PD的相关性〔n(%)〕

3 讨 论

一系列运动症状或非运动症状严重影响PD患者的生活质量，由此带来社会、家庭、经济及公共卫生问题越来越严重。在本课题组的前期研究〔2，3〕中发现环境因素、基因位点多态性、基因-环境之间存在交互作用均可影响新疆地区PD的发病。神经炎症也是PD发病的重要机制，为此，本研究选择部分炎性、环境、基因多态性指标，在同一研究对象中分析各自其分布特点，探讨其是否存在单独或者联合作用对PD的发生影响。

本文未发现PD患者血清IL-6表达水平与正常人之间存在差异性，这虽然与研究〔4〕的结论一致，却与众多发现PD患者血清IL-6水平高于正常人群的研究〔5～9〕结果不同；当进一步按照性别、年龄进行分组后发现男性PD患者血清IL-6表达水平明显低于正常男性人群水平，这与研究〔10〕的发现存在一定的相似性，提示性别对炎症细胞因子IL-6的释放可能存在影响，其在男性PD组的释放低于正常男性人群。本研究没有发现PD患者血清IL-1β表达水平与正常人之间存在差异性，即使按照性别、年龄进行了分组分析，也没有发现不同性别、年龄PD患者和正常人之间IL-1β的表达水平存在不同，这与发现PD患者血清IL-1β水平高于正常人群的研究〔6，8〕结论存在不一致性。中枢神经系统发生神经炎症的特点是小胶质细胞和星形胶质细胞的激活，产生大量的炎症因子、趋化因子对血脑屏障产生破坏作用、促进多巴胺能神经元的退行性变性和坏死，目前尚无针对趋化因子与PD相关性的研究。本研究以CXCL5作为测定目标时，未发现CXCL5的表达在新疆地区PD患者和正常健康人群间存在差异。进一步按照性别、年龄进行分组后提示年龄可能对CXCL5的释放存在影响，其在年龄>65岁PD患者的释放低于年龄>65岁的正常人群。在DBH多态性、烟酒习惯与PD的相关性分析中，未发现DBH-5-TaqⅠ多态性、吸烟史、饮酒史与PD的发病之间并不存在相关性，这与其他发现3者可能是PD保护因素或危险因素的研究〔11～15〕结果不同。

基因多态性-环境因素层面分析中，本文没有发现DBH多态性与烟酒习惯之间存在联合作用影响PD的发生，这与杨武军等〔13〕发现在恩施土家族人群中吸烟和DBH多态性存在协同作用影响PD发病的结论不同。在环境因素-炎症因子、基因多态性-炎症因子层面分析中，本研究结果提示不吸烟能减少炎症细胞因子IL-6的释放，二者之间的联合可能是PD的保护因素。本研究结果提示DBH T/C基因型能减少炎症细胞因子CXCL5的释放，二者之间的联合可能是PD的保护因素。不吸烟史与炎症因子IL-6之间、DBH T/C基因型与炎症因子CXCL5之间可能存在协同作用影响PD发生的结论目前在其他研究中未见到类似报道。

本研究局限在于纳入的样本量相对较少，并不能阐明结论产生的具体机制，因此还需要在大样本量的病例对照研究中进一步分析进行验证，同时需进行更深入的机制分析研究。