卵巢癌组织中circKIF4A和miR-942-5p的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系

汤 明， 方春田， 王 燕， 张 仙， 喻 欣

(1.湖北省洪湖市人民医院， 湖北 洪湖 433200 2.湖北省妇幼保健院妇科， 湖北 武汉 430070)

卵巢癌(Ovarian cancer，OC)是女性中第七大最常见的癌症，全球每年约新增239,000病例。尽管随着手术治疗及化疗药物的发展使OC患者生存率得到了提高，但晚期OC患者的5年生存率依然较低[1]。因此，寻找更多的分子靶点以促进对OC患者的诊断及预后势在必行。据报道，微小RNA(miRNA)在多种癌症中异常表达可能通过参与多个步骤的调控，有望成为OC的治疗靶点[2]。Xie等[3]研究表明OC组织中miR-942水平显著降低。环状RNA(circRNA)是各种癌症生长和转移中许多生物学过程的重要介质。大量研究证实circRNA在OC中异常表达，在OC中具有诊断和预后价值[4]。Sheng等[5]研究表明circKIF4A在卵巢癌组织中高表达，敲低circKIF4A可以抑制卵巢癌中的细胞增殖和迁移。miR-942-5p、circKIF4A在卵巢癌中的表达均有报道，但二者与卵巢癌的临床病理特和预后尚处于研究中。基于此，本研究通过检测卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p和circKIF4A的表达情况，探讨二者与临床参数的关系以及对预后的影响。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2015年1月至2017年1月在本院进行手术的卵巢癌患者154例为研究对象，收集卵巢癌患者的癌组织及癌旁正常组织进行研究。纳入标准：①卵巢癌诊断参考中华医学会制定标准[6]，且经过手术病理确诊；②术前均没有接受过放疗或化疗；③患者及家属均知情同意。排除标准：①合并有卵巢、子宫手术史患者；②合并有重大疾病、凝血障碍及子宫肌瘤、内膜异位症等疾病；③临床资料不完整者。本研究经我院道德伦理委员会批准通过，样品采集均取得研究对象的知情和同意。

1.2方 法:qRT-PCR法检测组织中miR-942-5p、circKIF4A水平:使用Trizol试剂(货号R0016；Beyotime，上海)从组织中提取RNA。接下来，使用特定的逆转录试剂盒(Takara，大连)合成互补DNA(cDNA)。qRT-PCR在ABI 7900HT Systems(Applied Biosystems，美国)上使用miScript SYBR Green PCR Kit(Qiagen，Germany)在以下热循环条件下运行：95℃ 10min，然后是95℃ 5s、60℃ 10s和72℃ 10s，共设40个循环。miR-942-5p、circKIF4A的表达分别以U6、GAPDH为内参。使用2-ΔΔCt方法计算miR-942-5p、circKIF4A相对表达水平。

1.3随访:定期随访主要通过门诊或电话进行，询问并记录患者的生存时间和生存率，随访开始时间从出院起计算，截止时间为2022年1月，终点事件为患者死亡。

2 结 果

2.1卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p、circKIF4A的表达:卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p表达水平低于癌旁组织，circKIF4A在卵巢癌患者癌组织中表达较癌旁组织中高(P<0.05)，见表1。

表1 癌组织及癌旁组织中miR-942-5p circKIF4A表达水平比较

2.2卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p、circKIF4A表达的相关性:卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p、circKIF4A表达呈明显负相关，差异有统计学意义(r=-0.312，P<0.05)，见图1。

图1 癌组织中miR-942-5p、circKIF4A表达相关性分析

2.3miR-942-5p、circKIF4A表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系:circKIF4A、miR-942-5p的表达与卵巢癌患者的年龄、病理类型、WHO组织学分级、肿瘤直径、浸润程度无关，与TNM分期、分化程度、肿瘤分级、淋巴结转移、有无腹水有关(P<0.05)。见表2。

表2 癌组织中miR-942-5p circKIF4A的表达与临床病理参数的关系

2.4Kaplan-Meier生存分析:所有患者均进行随访，无失访病例，随访期间死亡97例，miR-942-5p、circKIF4A均以在癌组织中相对表达水平的中位数为临界值，超出该范围判定为高表达，低于该范围定义为低表达。其中miR-942-5p高表达者共80例，低表达者74例。circKIF4A高表达者共78例，低表达者76例。绘制5年生存曲线，Kaplan-Meier分析结果显示，circKIF4A高表达组患者5年累积生存率26.92%(21/78)显著低于低表达组47.37%(36/76)，差异有统计学意义(Log rank χ2=6.651，P=0.010)；miR-942-5p高表达组患者5年累积生存率46.25%(37/80)显著高于低表达组患者27.03%(20/74)，差异有统计学意义(Log rank χ2=9.978，P=0.000)，见图2。

图2 不同miR-942-5p、circKIF4A表达的Kaplan-Meier生存曲线

2.5影响卵巢癌患者生存状况的COX回归分析:以是否死亡为因变量，其淋巴结转移、分化程度、TNM分期、肿瘤分级、腹水、miR-942-5p、circKIF4A为自变量，其中淋巴结转移、分化程度、TNM分期、circKIF4A高表达、miR-942-5p低表达均是影响卵巢癌患者生存状况的危险因素(P<0.05)，见表3。

表3 影响卵巢癌患者生存状况的COX回归分析

3 讨 论

卵巢癌在妇科肿瘤中致死率最高，是女性癌症死亡的第五大原因[7]。由于OC患者在肿瘤发生早期通常不会出现明显症状，且到目前为止，还没有早期诊断和治疗OC的有效方法[8]。因此，大多数OC患者直到晚期才被诊断出患有卵巢癌，错过了最佳的治疗机会，且有超过70%的晚期OC患者会在手术后复发，导致其预后较差[9]。因此，急需选择更加有效可靠的指标评估卵巢癌患者病情及预后。

miRNAs是内源性和进化上保守的小型非编码RNA。最近的证据表明，miRNA在卵巢癌疾病发展中发挥重要作用[10]。研究显示miR-942-5p的异常表达在多种肿瘤中发挥调节作用。如长链非编码RNA的linc00675可通过调节miR-942抑制结肠癌细胞增殖和转移[11]。在肝细胞癌中，miR-942-5p表达异常升高，与临床特征和预后密切相关[12]。在本研究中，卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p表达较癌旁组织中降低，提示miR-942-5p水平降低可能参与调控卵巢癌的发生；进一步通过与患者临床病理特征比较分析，结果显示miR-942-5p表达与疾病的分化程度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分级、有无腹水密切相关，提示miR-942-5p表达异常与卵巢癌的临床分期密切相关，临床可通过判断患者miR-942-5p的表达情况为疾病的分期及诊断提供一定参考依据。生存分析结果显示miR-942-5p高表达组患者5年累积生存率显著高于低表达组患者，提示miR-942-5p低表达可能与卵巢癌的转移和复发相关，有可能成为评估卵巢癌患者预后不良的潜在指标之一。

circRNA是一类具有环状结构的新型内源性非编码RNA，与线性RNA相比，circRNA在哺乳动物组织中更丰富，且无帽尾[13]。circRNA曾经被认为是基因不正确转录的副产物，现在被认为是多种生物内过程的重要调控因子，包括癌症的发生和发展[13]。Huo等[14]发现神经胶质瘤中circKIF4A的表达显著增加，敲低circKIF4A基因降低了胶质瘤细胞的集落形成能力、迁移和侵袭能力，并减慢肿瘤生长速度。蒙秋等[15]研究表明circKIF4A在卵巢癌组织中表达升高，可能通过负向调控miR-384的表达从而促进卵巢癌的发生和发展。在本研究中，患者癌组织中circKIF4A表达与癌旁组织相比明显升高，提示circKIF4A可能在卵巢癌疾病中发挥了促癌基因的作用。circKIF4A表达也与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分级、有无腹水有关，提示circKIF4A与患者病情严重程度密切相关，可能通过增强肿瘤细胞的侵袭力以及附着力参与卵巢癌的发生发展过程；研究进一步得到miR-942-5p和circKIF4A的表达呈负相关，提示二者之间可能存在靶向关系，circKIF4A可能充当miR-942-5p的海绵分子，负向调控miR-942-5p的表达，从而促进卵巢癌的发展进程，其具体作用机制有待进一步深入研究。生存分析结果显示circKIF4A高表达组患者5年累积生存率显著低于低表达组，提示circKIF4A高水平表达与卵巢癌疾病恶化及预后不良密切相关。研究进一步发现分化程度、TNM分期、淋巴结转移、circKIF4A高表达、miR-942-5p低表达均是影响卵巢癌患者生存预后的独立危险因素，提示临床表现circKIF4A高表达、miR-942-5p低表达的患者，应该在术后给与更严密的随访观察，必要时给予辅助治疗，改善患者预后。

综上所述，卵巢癌患者癌组织中miR-942-5p呈低表达，circKIF4A呈高表达，二者表达，与卵巢癌疾病的发生、发展进程密切相关，联合检测二者对评估临床卵巢癌患者的生存预后具有重要意义，二者有可能作为卵巢癌分子治疗的新的潜在靶点。但本研究尚存在不足之处，circKIF4A、miR-942-5p在卵巢癌疾病中的具体作用机制有待进一步完善实验方案进行深入研究。