鹿苓安肾颗粒大鼠急性毒性试验研究*

杨元凤 ，熊高才，黎豫川，罗玉玲，张敬杰

(1贵州中医药大学第二附属医院，贵州 贵阳 550003；2贵州省第三人民医院，贵州 贵阳 550000；3贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

据现有资料显示，肾病的种类较多，如慢性肾功能衰竭证、原发性肾病综合症、继发性肾病及糖尿病肾病等[1]，其中慢性肾功能衰竭是由多种因素引起的进行性、不可逆的功能性损害，据统计，慢性肾功能衰竭预后较差，不仅危及患者生命，而且给全球卫生保健带来沉重的负担[2]，因此寻找新的治疗策略尤为重要。近年来中药因其副作用小、疗效好在治疗慢性肾功能衰竭上被广泛应用[3-4]。鹿苓安肾颗粒为贵州中医药大学第二附属医院的协定处方，是根据慢性肾功能衰竭证属气阴亏虚型的证候拟方，主要由鹿血晶、茯苓、石斛、白术等药物组成。且已有相关研究证实鹿血晶、茯苓、石斛、白术等在治疗肾损伤或肾阴亏虚中均具有显著的疗效[5-10]。根据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》[11]，在鹿苓安肾颗粒药效研究的基础上，对鹿苓安肾颗粒进行急性毒性实验，观察动物在接受过量鹿苓安肾颗粒所产生的的急性中毒反应，为鹿苓安肾颗粒的后续毒性实验或临床使用剂量提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF清洁级的Wistar大鼠20只，7～9周龄，雌雄各一半，体重为170～200 g，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司(生产许可证号为：SCXK(京)2021-0011)。大鼠生长环境为：12 h/12 h明暗交替，室温为21～24℃，湿度为：40%～65%，分笼饲养，每笼1只大鼠。

1.2 实验方法

1.2.1 鹿苓安肾颗粒的制备

茯苓、石斛、白术三味药材，装入2层灭菌过滤袋，加8倍量的水(第一次加水10.5倍)，浸泡1小时，煎煮2次，每次45 min，合并煎液，滤过。滤液常压浓缩至相对密度为1.25～1.28(70℃)的浸膏，浸膏加入鹿血晶混匀后，与适量可溶性淀粉混合均匀，20目筛制粒，湿颗粒60 ℃干燥3 h，14目筛整粒，制成1000 g颗粒，即得。

1.2.2 急性毒性预实验

按照半数急性毒性实验要求先进行毒性实验预实验预测本品的致死量(LD50)。Wistar大鼠20只，标记，称重，按体质量随机分为鹿苓安肾颗粒组和空白对照组，每组雌、雄各半，禁食不禁水12 h后，给药组以本品可供灌胃的最大浓度(0.5 g/mL)，大鼠灌胃可承受的最大体积(20 mL/kg)，给药后自由进食和饮水，对照组给予等容积的蒸馏水，连续观察14 d。实验结束后根据每组动物死亡数量，查询霍恩氏表(Horn氏)求得大鼠的半数致死量(LD50)及其95%可信区间。

在实验过程中若大鼠未出现任何中毒症状或中毒症状不明显，因该剂量远大于中药无毒剂量标准(LD50>50 g/kg)，则初步说明鹿苓安肾颗粒无毒副作用或毒副作用不明显，此时可使用该剂量直接进行正式实验。若大鼠出现中毒症状则需根据具体结果，重新设定给药梯度。

1.2.3 急性毒性正式实验

Wistar 大鼠20 只适应性饲养7 d后，随机分为正常组与用药组，每组10只，雌雄各半。用药组每日间隔6 h分2次给予10 g/kg 鹿苓安肾颗粒灌胃，正常组给予等体积水灌胃，连续观察14 d。

1.2.4 观察指标

每天都对两组大鼠称重并记录，包括进食量以及饮水量。

大鼠14 d观察期结束后，摘除眼球取血，使用血常规分析仪对各组大鼠分别进行血常规白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)的检测。

1.2.5 统计方法

采用SPSS 22.3统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间数据比较采用单因素方差分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 急性毒性预实验结果

大鼠灌胃给予鹿苓安肾颗粒后，观察到用药组和对照组大鼠活动均减少，30 min 内两组大鼠均迅速恢复正常，饮食饮水正常，观察期内无动物死亡，连续7 d 观察中均未见不良反应，其背毛、肤色、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常；未见任何中毒症状，无动物死亡，提示本品的安全范围较大。

2.2 鹿苓安肾颗粒对大鼠体质量的影响

如表1所示，雌性用药组与雌性对照组比较、雄性用药组与雄性对照组比较，不同时间的大鼠体质量差异均无统计学意义(P均>0.05)，说明给药后，鹿苓安肾颗粒对大鼠体质量无影响。

2.3 鹿苓安肾颗粒对大鼠进食量的影响

由表2可见，用药组与对照组比较，不同时间点雌、雄性大鼠体进食量均无明显差异(P均>0.05)，说明给药后，鹿苓安肾颗粒对大鼠进食量无影响。

2.4 鹿苓安肾颗粒对大鼠饮水量的影响

用药组与对照组比较，各时间点雌、雄性大鼠体饮水量差异无统计学意义(P均>0.05)，说明给药后，鹿苓安肾颗粒对大鼠饮水量无影响，见表3。

表1 鹿苓安肾颗粒急毒实验对大鼠体质量的影响(x±s，g)Tab.1 Effect of Luling Anshen granule on body weight of rats

表2 鹿苓安肾颗粒急毒实验对大鼠进食量的影响(x±s，m/g)Tab.2 Effect of Luling Anshen granule on food intake of rats

表3 鹿苓安肾颗粒急毒实验对大鼠饮水量的影响(x±s，V/mL)Tab.3 Effect of Luling Anshen granule on water intake of rats

2.5 鹿苓安肾颗粒对大鼠血常规指标的影响

用药组与对照组比较，雌、雄性大鼠体白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血红蛋白数(HGB)、血小板(PLT)以及淋巴细胞绝对值(LYM)差异无统计学意义(P均>0.05)，说明给药后，鹿苓安肾颗粒对大鼠的血常规指标无影响，详见表4。

表4 鹿苓安肾颗粒对大鼠血常规指标量的影响Tab.4 Effect of Luling Anshen granule on blood routine indexes of rats

3 讨论

鹿苓安肾颗粒主要由鹿血晶、茯苓、白术、石斛等中药组成，石斛又名仙斛兰韵、不死草、还魂草，其中流苏石斛是石斛的主要来源之一[8-9]，具益胃生津，滋阴清热之功。石斛得鹿血晶则津液精血生化有源，鹿血晶得石斛则咸热之性大减，养阴之力更强，为佐药。白术有运脾燥湿、燥湿利水、化浊之效[12-13]，得茯苓则健脾功效更著，茯苓得白术又增利水渗湿之效，亦为佐药，综观全方，彼此兼顾，互为辅助，相得益彰，共奏养阴生津、健脾益气之功。鹿血晶、茯苓、白术、石斛等中药具有广泛的药理作用，临床应用前景广阔，因此通过动物实验开展鹿苓安肾颗粒的体内急性毒性研究，有利于产品的开发，以期为临床鹿苓安肾颗粒的研究应用提供新的理论依据。

在本研究预实验中，灌胃给予大鼠最大浓度的鹿苓安肾颗粒，发现在观察期内各组大鼠均无死亡，且各组大鼠背毛、肤色、鼻、眼、口腔分泌物均未见明显异常，各组均未见不良反应和中毒症状，这提示鹿苓安肾颗粒的安全范围较大。接着在急性毒性正式实验中，我们连续两周每天对各组大鼠体质量、进食量、饮水量以及血常规相关指标进行检测，结果发现，用药组与对照组比较，雌、雄性大鼠的体质量、进食量、饮水量以及白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血红蛋白数(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞绝对值(LYM)均无明显差异，提示鹿苓安肾颗粒不影响大鼠体质量、进食量、饮水量以及血常规相关指标水平，表明鹿苓安肾颗粒无明显的急性毒性反应，临床使用的安全范围较大。