贵州产望江南子质量标准研究

谭 霖，龙 滢

(黔东南州食品药品检验检测中心，贵州 凯里 556000)

望江南子为豆科植物望江南CassiaoccidentalisL.的干燥成熟种子。秋季摘取果实，晒干，打下种子，除去杂质，是中医临床的用药之一。本品始载于《救荒本草》[1]，在我省为常用中药，1975年始在罗甸、望谟等气候较高地区发现野生。《贵州省中药材质量标准》1988年版收载为“望江南”，最近的《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003版收载“望江南子”。主要成分为蒽醌类及其苷类成分：含有大黄素甲醚，大黄酸，大黄酚，芦荟大黄素[4]；挥发性成分 ：水蒸气蒸馏法提取望江南子中的挥发性成分的实验中，共分离了101个化学成分，鉴别出86个化学成分，占挥发油总量的90.07%，其主要成分为香叶基丙酮、β-紫罗兰酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮、叶绿醇、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮、法尼基丙酮、正己醛、α-紫罗酮，含量最多的是香叶基丙酮[5]。现我省使用的望江南子以野生为主，无规模化种植，经过实地考察研究我省分布于罗甸、望谟、册享、安龙等地。

按贵州省药品监督管理局对《贵州省中药材、民族药材质量标准》换版要求，根据任务我组人员到安龙、册亨、罗甸实地采集样品，采集的腊叶标本由贵阳中医学院药学院生药实验室的孙庆文教授鉴定确认，样品来源见表1，原植物形态见图1。

表1 样品来源Tab.1 Sample sources

图1 原植物形态Fig.1 Original plant morphology

将野外采集的3个药材果实样品晒干，打下种子，除去杂质，按照《中药鉴定学》[2]和《药用植物学》[3]的性状鉴定方法，对药材样品的大小、形状、颜色、质地、断面等特征进行对比观察和描述。发现不同产地的药材除了在大小方面稍有差异，其他特征相对比较稳定。该药材的性状鉴别特征，呈扁卵形，直径3～4 mm，外表黄绿色、灰绿色或紫棕色，略有光泽，凹凸不平，两面中央均有一椭圆形平坦的疤痕，疤痕四周有白色网纹。先端有一短尖突起，形似鸟喙，其内侧有点状种脐。质坚硬，除去种皮后可见2片黄色或黄棕色的子叶。气微，味微苦，嚼之有豆腥味。外观见图2。

图2 药材外观Fig.2 Appearance of the medicinal material

1 显微鉴别

将3个样品分别粉碎，常规粉末制片。

1.1 仪器与试剂

莱卡DM2500显微镜和LAS V3.8显像系统，以及常规显微制片载玻片、盖玻片、镊子、水合氯醛、稀甘油、蒸馏水等。

1.2 方法

3个药材样品进行常规粉末制片，应用光学显微镜对其组织结构、细胞形态、后含物等进行观察、测量和描述，并对具有代表性的特征进行拍照和绘图。

归纳总结得粉末显微特征为：本品粉末黄棕色。种皮栅状细胞成片，无色至淡黄色，横面观细胞1列，狭长方形，壁较厚，光辉带1条位于细胞近1/2处；表面观呈类多角形，壁皱缩，细胞被较厚角质层。种皮支持细胞1列，断面观方形，三面增厚，长10～25 μm；表面观呈类圆形或多角形，直径20～50 μm，并可见上下两层同心圆圈。角质层碎片表面观可见多角形网脉样纹理。内胚乳细胞壁粘液质化，胞腔内物质为黄棕色至红棕色(图3)。由于本品横切面组织特征在鉴别上意义不大，故不予列出，列于此以供参考。

图3 粉末显微特征(10×40倍)Fig.3 Microscopic characteristics of the powder(10×40 times)

2 薄层色谱

根据望江南子的主要成分，本次实验对望江南子贵州产3个地方样品进行了试验，该方法色谱斑点清晰，易于检出，重现性好。

供试品溶液制备：取药材粉末约0.5 g，加入盐酸-甲醇(1∶10)混合溶液25 mL，置水浴锅上加热回流30分钟，取下放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加入乙酸乙酯2 mL溶解即得。对照品溶液制备：精密称定大黄素甲醚对照品(中国食品药品检定研究院 批号：110758-200509 含量95.6%)，加乙酸乙酯溶解使浓度约为0.5 mg/mL。薄层板：青岛海洋化工有限公司制造硅胶H板(批号：20170811)。点样：对照品2 μL，供试品5 μL。展开剂：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶2∶0.5∶0.05)。显色及检视：置氨蒸汽中熏。结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(图4)。

图4 薄层色谱图Fig.4 TLC

2.1 薄层条件选择

2.1.1 提取溶剂的考察

望江南子中含有大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素等有效成分，这些蒽醌类有效成分大多都是游离型蒽醌，一般选用乙醇、甲醇作为提取溶剂，可以把不同类型、性质互异的蒽醌类成分提取出来，由于甲醇的溶解度大于乙醇，本次实验的提取溶剂为甲醇。

2.1.2 提取方法的考察

提取游离型蒽醌，可以用稀酸水解后，用有机溶剂提取。比较了加热回流和超声提取后，发现加热回流更适于本实验，层析后的斑点更清晰。

2.1.3 水解时间的考察

本实验对盐酸水解的时间在对比试验中分别设计了三个时间段。分别为30 min、60 min以及120 min，多次实验后发现这三个时间段所提取的有效成分在色谱图效果无明显差异，所以本次实验所取时间为30 min。

2.1.4 展开剂的选择

本试验对望江南子的展开剂进行了比较和研究[6]，文献报道的展开剂为石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)，因望江南子与决明子同为豆科植物又同为决明属，因此也参考了决明子的薄层鉴别的展开剂石油醚(30～60℃)-丙酮(2∶1)，经过多次反复研究，最终选用了正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶2∶0.5∶0.05)的比例作为望江南子薄层定性鉴别的展开剂。

2.1.5 薄层板的选择

比较了硅胶G薄板，H板，结果表明，鉴别望江南子中大黄素甲醚的薄层鉴别实验，使用硅胶H板作为吸附剂时，色谱图上的斑点清晰、集中、重现性好、所提供的信息量大。

2.1.6 检视条件

望江南子的主要成分是羟基蒽醌类，其在碱性条件下显色，故选择用氨蒸汽熏显色检视。

2.2 耐用性考察

2.2.1 不同薄层板的比较

青岛海洋化工有限公司制造硅胶H板(批号：20170811)与青岛胜海精细硅胶化工有限公司制造硅胶H板(批号：20150319)，分别按拟定的试验方法试验。结果表明，两种薄层板斑点均清晰且分离较好。

2.2.2 不同温度的比较

取点样于青岛海洋化工有限公司制造硅胶H板(批号：20170811)后的薄层板，分别在5℃和28℃的温度环境下进行展开。结果表明该方法对不同温度的适应性较好。

2.2.3 不同湿度的比较

取点样于青岛海洋化工有限公司制造硅胶H板(批号：20170811)后的薄层板，分别在28%和88%的湿度中展开。结果表明该方法对低湿环境的适应性较好。

经上述方法学验证试验，结果表明薄层板方面，青岛海洋化工有限公司制造硅胶H板与青岛胜海精细硅胶化工有限公司制造硅胶H板均可达到分离效果，且分离效果好、斑点集中；不同温度湿度变化可导致色谱效果略有不同，均能达到鉴别需要。验证及复核实验能够较好重现，因此本方法耐用性良好。

3 水分

依照《中国药典》2015版第四部通则0832水分测定法第二法，分别取三个地区的望江南子药材测定水分。其值得9.80%～10.5%，均值为10.2%(结果见表2)，根据药材测得的水分范围和浮动20%，建议将药材水分定为不得过13.0%。

表2 水分、总灰分、浸出物检测数据Tab.2 Detection data of moisture，total ash and extract

望江南子为种子类药材，含有少量挥发性物质，因甲苯法适用于含有挥发性的物质，烘干法适用于不含或少含挥发性的物质，本次试验比较了四部通则0832水分测定法的第四法(甲苯法)和第二法(烘干法)测定望江南子的水分，结果发现，两种方法下测出来的水分含量差异不大(见表2)，又因甲苯法需要的甲苯较多且甲苯本身对人体的中枢神经伤害很大，烘干法简便，对人体无明显伤害，所以结合经济及健康情况考虑，本次实验的水分含量的测定方法选用了烘干法。

4 总灰分

依照《中国药典》2015版第四部通2302，分别取三个地方的望江南子药材测定总灰分。其值得3.5%～3.8%，均值为3.6%(结果见表2)，根据药材测得的总灰分范围和浮动20%，建议将药材总灰分定为不得过5.0%。

5 浸出物

依照《中国药典》2015版第四部通则2201中的醇性浸出物热浸法，以乙醇为溶剂，取三个地区的望江南子药材测定浸出物，以干燥品计算浸出量其值得8.1%～8.8%，均值为8.4%(结果见表2)。根据药材测得的范围和浮动20%，建议将药材浸出物定为不低于6.0%。

5.1 浸出物提取溶剂的考查

根据望江南子药材所含主要化学成分浸出物的测定，采用有机溶剂更具经济性、安全性和稳定性。实验比较了甲醇和乙醇这两种有机溶剂，结果发现，当提取溶剂为甲醇时，浸出物的含量要高于乙醇为溶剂的含量。但出于安全性方面考虑，甲醇具有毒性对人体易造成伤害，所以本次实验选用了乙醇作为提取溶剂。

5.2 浸出物提取方法的考察

实验比较了热浸出物和冷浸出物这两种方法，结果发现，热浸法更适于本实验，因为和冷浸法比较起来，热浸法提取的含量更高、更稳定。

6 挥发油

本品依照《中国药典》2015版第四部通则2204中的甲法对3个样品进行挥发油测定，结果挥发油含量均低于0.1%，其不适合用于作质量标准。

7 含量测定

试验试图建立望江南子药材所含化学成分较高的大黄素甲醚高效液相色谱法含量测定，但在实验过程中发现供试品溶液制备后其中大黄素甲醚成分不稳定，且回收率达不到要求，所以放弃建立高效液相色谱含量测定方法以建立浸出物测定方法代替。

8 结果和讨论

经过研究本品呈扁卵形，直径3～4 mm，外表黄绿色、灰绿色或紫棕色，略有光泽，凹凸不平，两面中央均有一椭圆形平坦的疤痕，疤痕四周有白色网纹；先端有一短尖突起，形似鸟喙，其内侧有点状种脐；质坚硬，除去种皮后可见2片黄色或黄棕色的子叶；气微，味微苦，嚼之有豆腥味。显微特征，本品粉末黄棕色，种皮栅状细胞成片，无色至淡黄色，横面观细胞1列，狭长方形，壁较厚，光辉带1条位于细胞近1/2处；表面观呈类多角形，壁皱缩，细胞被较厚角质层；种皮支持细胞1列，断面观方形，三面增厚，长10～25 μm；表面观呈类圆形或多角形，直径20～50 μm，并可见上下两层同心圆圈；角质层碎片表面观可见多角形网脉样纹理；胚乳细胞壁粘液质化，胞腔内物质为黄棕色至红棕色。薄层鉴别，取药材粉末0.5 g，加入盐酸-甲醇(1∶10)混合溶液25 mL加热回流30分钟，取下放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液；取大黄素甲醚对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作对照品溶液；吸取供试品溶液5 μL，对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶2∶0.5∶0.05)为展开剂，展开，取出，晾干；置氨蒸汽中熏，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，呈相同颜色的斑点。水分，不得超过13.0%。总灰分，不得超过5.0%。浸出物，照醇溶性浸出物测定法的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于6.0%。

因望江南的特殊生长习性要求，在贵州省野生分布范围较少，本次研究采集到的样品有限，但也能基本代表贵州产望江南子药材的质量。本次研究没有完成含量测定指标，需要在今后的研究中找到代表成分进一步完善。