黔产太子参中多糖含量测定*

2023-01-17孙恒灿张丽艳马四补晋海军唐晓琴

贵州科学 2022年6期

孙恒灿，张丽艳，马四补，晋海军，唐晓琴，董贺，李军

(贵州中医药大学，贵州贵阳 550025)

0 引言

太子参是石竹科植物孩儿参[Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.]的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺的功效[1]。太子参为多年生草本植物，适宜生长在温暖湿润的环境，于砂质土壤中生长良好，主要栽培地有贵州、福建、安徽、山东等，其中山东是太子参传统道地产区之一[2]。经现代研究表明，多糖是太子参主要化学成分之一，其具有抗炎[3]、抗糖尿病[4]、抗应激[5]、免疫调节[6]和保护心肌[7]等多方面的药理作用。

近年来，我国经济蓬勃发展，国民生活水平稳步提升，养生保健被高度重视。自太子参被国家批准列入可用于保健食品以来，其保健食用功能的适用性已在不断的研究应用中得到社会人群的广泛认可，市场需求量也与日俱增[8]。目前，近几版《中国药典》中太子参质量标准只有水分、灰分和浸出物检查标准，并没有反应太子参质量的关键指标。因此，本实验采用水提醇沉和苯酚-硫酸显色法，用紫外-可见分光光度仪测定太子参中多糖含量，旨在为太子参药材质量标准的完善提供一定的参考依据。

1 仪器与试剂

UV-2501PC紫外分光光度仪(日本岛津公司)；HH-6数显恒温水浴锅(金坛市三和仪器有限公司)；ST-16R高速冷冻离心机(赛默飞公司)；电子天平(瑞士梅特公司)。

无水乙醇(分析纯，批号：20211101)、苯酚(分析纯：20190801)、浓硫酸(分析纯，批号：20210701)；纯水；葡萄糖对照品(批号：20200110)，15批黔产太子参来源见表1。

表1 太子参药材来源Tab.1 Sources of Pseudostellariae radix

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备

取恒重后葡萄糖对照品10 mg，精密称定，加水制成每1 mL中含0.1 mg的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取本品粉末0.8 g(过三号筛)，精密称定，加水200 mL，加热回流2小时，放冷，转移至250 mL量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液2 mL，置15 mL离心管中，精密加入无水乙醇10 mL，摇匀，冷藏1小时，取出，离心(转速为每分钟4000转)20分钟，弃去上清液，沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8 mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25 mL量瓶中，放至室温，加水至刻度，摇匀。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系考察

精密量取对照品溶液0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL，分别置10 mL具塞试管中，各加水至1.0 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL(临用配制)，摇匀，再精密加浓硫酸5 mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在488 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，可得回归方程为：y=8.8376x+0.0041(n=7)，r2=0.9997。表明葡糖糖浓度在0.02～0.08 mg/mL范围内呈良好的线性关系，结果见表2。

2.2.2 精密度试验

取标准品溶液0.5 mL，加水至1 mL，照“2.2.1”方法进行测定，重复6次，实验结果见表3，RSD为0.2%，表明仪器精密度较好。

表3 精密度试验结果Tab.3 Precision test results

2.2.3 稳定性实验

取供试品溶液1 mL，照“2.2.1”方法分别在0 min，30 min，60 min，90 min，120 min，150 min测定其吸光度，实验结果见表4，RSD为2.01%，确定150 min内供试品溶液较稳定。

表4 稳定性试验结果Tab.4 Stability test results

2.2.4 重复性实验

取本品6份，按照“2.1.2”方法制备待测液，按照“2.2.1”方法测定吸光度值，实验结果见表5。结果表明，6份样品多糖含量均值为22.18%，RSD为2.37%，重复性良好。

表5 重复性试验结果Tab.5 Repeatability test results

2.2.5 加样回收实验

取本品粉末0.4 g(过三号筛)和对照品0.09 g，精密称定，后续方法同“2.1.2”和“2.2.1”。实验结果见表6，结果表明，回收率均值为97.27%，RSD为1.36%，方法较好。

表6 加样回收试验结果Tab.6 Spiked recovery test results

2.3 多批次太子参药材中多糖含量测定和计算

精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.0 mL(临用配制)，摇匀，再精密加入硫酸5.0 mL，摇匀，置沸水浴中加热20 min，取出后置冰浴中冷却5 min，以相应试剂为样品空白，依法测定吸光度，依标准曲线回归方程计算样品溶液中葡萄糖的浓度，按公式(1)计算样品中多糖百分含量，结果见表7。

(1)

式中：A—测定用样品溶液中的葡萄糖绝对含量(μg)；W—取样量(g)。

表7 样品含量测定结果(n=3)Tab.7 Content determination results of the samples

3 讨论

多糖是太子参的主要有效成分之一，多糖含量的差异可能是太子参药效参差不齐的原因[9]。目前，常用提取多糖的方法有水提醇沉法、超声波(辅助)提取和超高压技术提取等，其中水提醇沉法最为常用[10]。虽然超声波和超高压技术提取率高于水提醇沉法，但超声波功率过高会破坏多糖结构、超高压提取会影响蛋白质和淀粉等大分子结构，且两种方法都需要特定的提取设备，提取成本较高[11-13]。查阅文献可知，苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法是测定多糖含量的常用方法。杨勤等[14]采用两种方法测定地参多糖含量，结果表明苯酚-硫酸法在稳定性和准确性上均优于蒽酮-硫酸法，苯酚-硫酸法测定地参多糖的含量更加准确。朱佳敏[15]等亦采用两种方法测定核桃青皮多糖含量，结果显示苯酚硫酸法测定的多糖含量比蒽酮硫酸法高约50 mg/g。因此，本实验采用水提醇沉法和苯酚-硫酸显色法测定太子参中多糖的含量。

实验结果表明，15批黔产太子参多糖含量存在较大差异，RSD则高达15.38%，多糖含量最高的是镇远②，多糖含量为27.40%，多糖含量最低的是施秉牛大场②，多糖含量为16.96%。15批太子参样品多糖含量范围在16.96%～27.40%，平均值为20.43%。宋李桃等[16]测定了6个不同省份太子参多糖含量，结果显示多糖含量范围在8.54%～13.56%。罗忠圣等[17]研究显示，贵阳市商品太子参多糖含量范围在9.74%～18.43%。本实验测得15批太子参多糖含量平均值是20.43%，高于文献中报道的太子参多糖含量，产生这种差异的原因可能与贵州省特殊的地理环境、湿润的气候有关。