塔本文都苏提取液对糖尿病肾病小鼠血糖和血脂的影响研究

庄志鹤，曹瑞珍，金玲玲，张树军，张国文，乔 伟

（1.锡林郭勒盟中心医院，内蒙古 锡林浩特 026000；2.内蒙古民族大学 医学院，内蒙古 通辽 028043）

随着生活水平的提高，糖尿病的发病率逐年增加，且趋于年轻化。糖尿病除血糖增高外，还往往伴随血脂水平的异常［1］。长期的血糖水平高及血脂代谢紊乱，引起全身血管神经损害，多种糖尿病并发症随之发生，如心、脑、肾、眼、肢体等血管神经病变，而糖尿病肾病（diabetes nephropathy，DN）是较严重的并发症之一［2-3］。因此，在糖尿病治疗过程中，控制好血糖同时控制血脂，改善血循环，从而防止各种并发症的发生。

目前，治疗糖尿病的药物大多为西药，不良反应较多，长期服用易引起肝、肾功能等的损害。糖尿病在中蒙医学上属于消渴病的范畴，研究人员针对消渴病人的症状和体征，开发了很多的单味药及方剂［4］，并且利用现代科技手段提取这些药的有效成分，发现很多药物都是通过其有效成分如萜类、类胰岛素、黄酮类、多糖类、生物碱类、氨基酸类、不饱和脂肪酸类等而发挥降糖调脂作用［5］。

塔本文都苏为蒙药滋补健身方剂，由黄精、玉竹、天冬、刺蒺藜和天花粉等5种成分构成，该方剂具有滋补作用，能强心、降糖、调脂，激活和增强免疫功能。组成方剂后活性物质的功能得以加强［6］。笔者建立DN小鼠模型，旨在考察TBWDS提取液对DN小鼠的降糖、调脂和改善肾功能作用，为DN的治疗找到新的措施。

1 材料与方法

1.1 药材与试剂

塔本文都苏的5种组方购自通辽市中医院，由内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药学教研室老师鉴定。链脲佐菌素（STZ，sigma公司）；血糖、血脂4项和24 h尿蛋白测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 TBWDS提取液的制备

取TBWDS方剂400 g（黄精、玉竹、天冬、天花粉和刺蒺藜比列为3∶2∶2∶2∶1），制成粗粉（20目），加75%乙醇2 400 mL，浸泡12 h，回流提取1.5 h，再重复2次，合并提取液，回收乙醇，加蒸馏水溶解并定容至1 250 mL的溶液，配成1 mL含生药0.32 g。

1.3 实验动物模型的建立、分组及药物干预

SPF级雄性昆明小鼠70只，体重（20±2）g，由吉林省亿斯实验动物技术有限责任公司提供，生产许可证号：SCXK-（吉）2018-0007。适应性饲养14 d后，随机选择10只小鼠作为正常对照组，其余60只小鼠禁食24 h后，以80 mg·kg-1剂量连续2天腹腔注射STZ（临用前溶于pH 4.5的柠檬酸缓冲液），5天后断尾取血，采用罗氏血糖试纸和血糖仪（活力型）测定空腹血糖浓度，大于11.1 mmol·L-1者为糖尿病（DM）小鼠（成功46只）。

然后对正常对照组小鼠，继续给与常规饲料饲养，DM小鼠更换为高脂高糖饲料饲养，30 d后进行药物干预实验（期间损耗6只）。正常对照组仍然用常规饲料饲养，其余小鼠用高脂高糖饲料饲养。将DM小鼠随机分成4组（模型组、二甲双胍组和TBWDS高、低剂量组），每组10只，进行灌胃给药治疗，灌胃体积均根据小鼠体重0.01 mL·g-1，每日一次。TBWDS作为滋补方剂用药3个月，专家每日推荐剂量最小30 g，最大为60 g，根据人与小鼠的体表面积折算等效剂量，按照65 kg成人计算，小鼠给药剂量为成人的9.1倍，因此小鼠最高给药剂量定为8 g·kg-1（生药），而4 g·kg-1作为低剂量组给药剂量。二甲双胍组小鼠给予30 mg·kg-1的二甲双胍，模型组和正常对照组小鼠均给予等量蒸馏水。每天记录小鼠的饮水量、进食量及体重变化。

1.4 标本采集

治疗12周后，进行实验标本制备。（1）在处死小鼠前1 d，用代谢笼收集各组小鼠24 h尿液，离心后分装，4℃保存备用；（2）采取断头取血的方法，收集各组小鼠的血液，离心制备血清，4℃保存备用。

1.5 小鼠血清尿液生化指标检测

取出4℃保存的各组血清和尿液，分别按照血糖、血脂4项和24 h尿蛋白的测定试剂盒说明书操作，采用普利马半自动生化仪和7230分光光度计比色测定。

1.6 统计学方法

采用SPSS20软件进行分析，各组数据用平均值±标准差表示。用单因素方差分析及t检验进行组间比较，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著差异。

2 结果

2.1 TBWDS提取液对DN小鼠血糖等指标的影响

与正常对照组相比较，注射STZ后的4组动物的血糖值显著升高（P<0.01），表明DM鼠造模成功；与模型组相比，TBWDS提取液高、低剂量组均能显著降低糖尿病小鼠的血糖、24 h饮水量和尿蛋白（P<0.01），说明TBWDS提取液能够降低糖尿病模型小鼠的血糖，从而降低血液渗透压，缓解口渴，同时也减轻肾损害，降低尿蛋白；但对这些指标的影响不如二甲双胍（P<0.05，P<0.01），特别是低剂量的。见表1。

表1 TBWDS提取液对DN小鼠空腹血糖、24 h饮水量及尿蛋白的影响Tab.1 Effects of TBWDS extract on fasting blood glucose，24 h water intake and urinary protein in DN mice ，n=10

表1 TBWDS提取液对DN小鼠空腹血糖、24 h饮水量及尿蛋白的影响Tab.1 Effects of TBWDS extract on fasting blood glucose，24 h water intake and urinary protein in DN mice ，n=10

注：与正常对照组比较▲▲P<0.01；与模型组比较★★P<0.01；与二甲双胍组比较●P<0.05，●●P<0.01。

组 别正常对照组模型组二甲双胍组TBWDS低剂量组TBWDS高剂量组给药前血糖/（mmol·L-1）4.8±0.57 19.38±3.92▲▲20.95±3.12▲▲20.21±2.34▲▲20.89±3.14▲▲给药后血糖/（mmol·L-1）5.47±1.33 20.49±3.24▲▲7.14±1.54▲▲★★12.79±2.05▲▲★★●●9.12±1.65▲▲★★●●24小时饮水量/mL 25.37±2.98 69.26±7.88▲▲49.17±5.27▲▲★★60.25±7.89▲▲★★●●54.56±6.02▲▲★★●24小时尿蛋白/mg 20.63±3.84 102.48±9.27▲▲54.83±4.61▲▲★★62.18±5.02▲▲★★●●59.79±5.78▲▲★★

2.2 TBWDS提取液对DN小鼠血脂4项指标的影响

与模型组相比，TBWDS提取液高、低剂量组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平均明显降低（P<0.05，P<0.01），而高剂量组HDL-C水平明显高于模型组（P<0.05），表明TBWDS提取液对DN小鼠的血脂有很好的调节作用。TBWDS高、低剂量组与二甲双胍组各项指标比较没有明显差异。见表2。

表2 TBWDS提取液对DN小鼠血脂水平的影响Tab.2 Effect of TBWDS extract on blood lipid level of DN mice ，n=10

表2 TBWDS提取液对DN小鼠血脂水平的影响Tab.2 Effect of TBWDS extract on blood lipid level of DN mice ，n=10

注：与正常对照组比较▲▲P<0.01；与模型组比较★P<0.05，★★P<0.01。

组 别正常对照组模型组二甲双胍组TBWDS低剂量组TBWDS高剂量组TC/（mmol·L-1）2.33±0.15 5.27±0.97▲▲4.26±0.68▲▲★★4.68±0.59▲▲★4.32±0.43▲▲★★TG/（mmol·L-1）1.55±0.32 7.72±2.39▲▲4.42±1.13▲▲★★5.87±2.06▲▲★4.69±1.66▲▲★★HDL-C/（mmol·L-1）1.26±0.37 0.86±0.38▲▲1.24±0.49▲▲★★1.05±0.45▲▲1.18±0.43▲▲★LDL-C/（mmol·L-1）1.25±0.61 3.47±1.07▲▲1.87±0.98▲▲★★2.07±1.06▲▲★★1.96±0.88▲▲★★

2.3 TBWDS提取液对DN小鼠体重的影响

造模成功后的各组小鼠体重明显低于正常对照组（P<0.01），经TBWDS提取液高、低剂量陆续治疗3个月后，小鼠体重逐渐增加，且都明显高于模型组（P<0.01）；TBWDS高、低剂量组与二甲双胍组相比，除了TBWDS低剂量给药2个月的不如二甲双胍组外，余未见明显差异。见表3。

表3 TBWDS提取液对DN小鼠体重的影响Tab.3 Effect of TBWDS extract on body weight of DN mice ，n=10

表3 TBWDS提取液对DN小鼠体重的影响Tab.3 Effect of TBWDS extract on body weight of DN mice ，n=10

注：与正常对照组比较▲▲P<0.01；与模型组比较★★P<0.01；与二甲双胍组比较●P<0.05。

组 别正常对照组模型组二甲双胍组TBWDS低剂量组TBWDS高剂量组造模后体重/g 27.77±1.14 18.12±1.09▲▲18.05±0.88▲▲17.79±1.22▲▲18.57±1.31▲▲给药后1个月体重/g 34.96±1.64 21.44±1.56▲▲24.54±1.69▲▲★★23.57±1.52▲▲★★24.86±1.67▲▲★★给药后2个月体重/g 41.36±2.68 25.45±1.89▲▲30.55±2.31▲▲★★28.42±2.13▲▲★★●29.51±2.04▲▲★★给药后3个月体重/g 48.06±2.72 32.32±2.06▲▲36.35±2.20▲▲★★35.39±2.32▲▲★★36.46±2.58▲▲★★

3 讨论

糖尿病是一组复杂的代谢紊乱疾病，是由于胰岛素绝对或相对缺乏，使细胞不能利用葡萄糖，糖利用障碍就在血液堆积引起高血糖，高糖引起高渗，表现为口渴多饮；细胞利用血糖障碍，细胞处于饥饿状态，表现多吃；高血糖超过肾糖阈值，就会出现尿糖，糖的排出需要溶解于水，即渗透性利尿导致多尿；而机体的能源物质主要是糖、脂和蛋白质，糖利用障碍，就要大量动员脂肪以及分解蛋白质，从而使机体消瘦，体重下降，使糖尿病患者表现为“三多一少”症状［7-9］。TBWDS提取液具有明显的降糖作用从而降低水的摄入量和排尿量。

糖的代谢障碍，伴随脂类和蛋白质的代谢紊乱，引起血脂四项的改变，TBWDS提取液有明显调节脂代谢作用。高糖、高脂引起全身血管、神经损害，引起各种并发症，包括肾脏损伤，肾小球滤膜屏障功能破坏，从而引起蛋白尿［10］。尿蛋白是反映肾小球功能的独立危险因素，早期微量白蛋白尿，随着病情的发展到无选择性大量蛋白尿［10-11］。本实验结果显示，TBWDS提取液能够显著降低DN小鼠24 h尿蛋白量，能够减轻肾的损害，保护肾功能。

前期研究表明，黄精多糖能降低血糖，通过降低细胞信息传导途径的cAMP含量而实现［12-13］；黄精浸膏能拮抗肾上腺素的升糖作用；玉竹水提物能降低糖尿病鼠血糖水平，玉竹多糖能够降糖、调脂及抗氧化，缓解糖尿病动物动脉粥样硬化斑块的形成［13］；蒺藜水煎液、天冬水提液和醇提液、天花粉分离出的5种聚糖成分都有降低血糖作用［14-16］。因此，TBWDS提取液是通过各组方的有效成分发挥降糖、调脂、抗氧化等作用，随着血糖、血脂的降低，氧化应激作用的减轻，微循环的改善，肾组织的损伤得到修复，从而达到保护肾及其他脏器的功能。