APP下载

高效液相色谱法同时测定蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸方法研究

2023-01-12黄柳霞陈丽香冯志强

海南师范大学学报(自然科学版) 2022年4期
关键词:标液糠醛蜂王浆

黄柳霞,陈 茹,张 琴,陈丽香,冯志强

(1.广东省食品工业公共实验室,广东 广州 511446;2.广东省食品工业研究所有限公司,广东 广州 511446;3.广东省质量监督食品检验站,广东 广州 511446)

蜂王浆又称王浆、蜂乳、蜂皇浆,是工蜂舌腺和上颚腺分泌的乳状物质[1],含有多种氨基酸和糖类物质,是集营养、食疗及保健多功效为一体的天然物质,具有抑菌、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、抗肿瘤、调节免疫及护肤美容等多方面药理作用[2]。5-羟甲基糠醛(C6H6O3)是由葡萄糖和果糖等化合物在高温或酸性条件下部分脱水生成的具有呋喃环结构的醛类化合物[3]。现有研究表明,5-羟甲基糠醛对人体有潜在的危害,摄入过量的5-羟甲基糠醛可能会造成横纹肌麻痹和内脏损害,对人体有致敏性、致癌性、神经毒性、基因毒性等副作用[4-5]。10-羟基-2-癸烯酸(C10H18O3)是蜂王浆中的主要功效成分,无法进行人工合成[6]。中国的蜂王浆出口和生产量占全世界的90%[7]。蜂王浆口服液是以蜂王浆为原料,经与其他成分配比后生产的相关制品,具有免疫调节的保健功能,深受现代消费者青睐。目前常使用高效液相色谱法检测蜂王浆、蜂王浆冻干粉中10-羟基-2-癸烯酸含量;而高效液相色谱法、液相色谱/质谱法和气相色谱/质谱法是检测蜂蜜、乳与乳制品、葡萄酒、饮料的5-羟甲基糠醛的主要方法。现有的检测方法不能对蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的同时检测,因此建立一种同时测定蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的方法,一方面有助于评价蜂王浆口服液新鲜度,在贮藏、加工条件控制中起重要作用;另一方面可为蜂王浆及相关制品的质量把控提供更快捷的方法,大大提高检测效率。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260 LC高效液相色谱仪,美国安捷伦有限公司;智能型数控超声清洗器,昆山市超声仪器设备有限公司;5-羟甲基糠醛标准物质,北京振翔科技有限公司,纯度≥97%;10-羟基-2-癸烯酸标准物质,北京振翔科技有限公司,纯度≥98%;甲醇(色谱纯),广州泛宏贸易有限公司;浓盐酸(优级纯),广州市广联津化工有限公司;去离子水符合GB/T 6682。

1.2 试剂的配制

1.2.1 0.01 mol/L盐酸溶液

取0.9 mL浓盐酸加水稀释至1 000 mL。

1.2.2 流动相溶液

取550 mL甲醇、450 mL 0.01 mol/L盐酸溶液混匀。

1.2.3 5-羟基糠醛储备液

称取5-羟甲基糠醛0.010 00 g至10 mL 容量瓶中,加甲醇溶解并定容,即配成含1 000µg/mL 的5-羟甲基糠醛储备液。

1.2.4 10-羟基-2-癸烯酸储备液

称取10-羟基-2-癸烯酸0.010 00 g至10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容,即配成1 000µg/mL的10-羟基-2-癸烯酸储备液。

1.2.5 5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸混标中间液

分别吸取1.00 mL 5-羟甲基糠醛储备液、1.00 mL 10-羟基-2-癸烯酸储备液至10 mL容量瓶,加甲醇稀释定容至刻度,即配成100µg/mL的混标中间液。

1.2.6 5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸混标使用液

分别吸取0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000 mL混标中间液至10 mL容量瓶,加流动相稀释至刻度,即得浓度为0.50、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0µg/mL的混标使用液。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

蜂王浆口服液试样,称样前摇匀样液,称取试样0.5~1.0 g(精确至0.001 g)至10 mL容量瓶,加入4.5 mL 0.01 mol/L盐酸溶液,涡旋混匀,再加入适量甲醇,混匀,超声10 min,冷却至室温,加甲醇定容至刻度,混匀,吸取样液用0.45µm有机滤膜压滤上机。

1.3.2 标样或样品比对处理

标样处理:将标液浓度为20µg/mL的10-羟基-2-癸烯酸在不同时间(第1~4 d)进行测定;

样品比对处理:同一样品在不同超声时间(10、20、30 min)下,其他前处理条件同1.3.1。5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的混标分别通过流动相稀释、甲醇稀释、乙醇稀释后上机比对。

1.4 仪器条件

色谱柱:AQC18250 mm×4.6 mm,5µm。流动相:甲醇+0.01 mol/L 盐酸溶液=55+45。流速:1.0 mL/min。波长:0~6 min为285 nm,6~15 min为210 nm。(实际可结合2个目标峰出峰时间进行调整)

2 结果与分析

2.1 不同时间测定同一瓶10-羟基-2-癸烯酸标液(20 μg/mL)的峰面积情况

内标法检测10-羟基-2-癸烯酸是标准的检测方法,多是以对羟基苯甲酸甲酯为内标[1][8]。而本文通过不同时间测定同一瓶标液,观察了10-羟基-2-癸烯酸储备液峰面积的变化,在几天时间内多次上机测定,发现10-羟基-2-癸烯酸储备液峰面积无太大变化(见表1),RSD值为3.0%,故本文采用外标法定量。

表1 不同时间测定同一瓶10-羟基-2-癸烯酸标液(20 μg/mL)的峰面积Table 1 Determination of Peak areas of the same bottle of 10-hydroxy-2-decenoic acid standard solution(20 μg/mL)at different time

2.2 超声时间比对

在同一前处理条件下,分别通过设置不同超声时间10、20、30 min,测定同一样品中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的含量,发现5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的含量并无太大的波动(见表2),其对应的RSD值均在5%范围内,故本文选择了10 min的超声时间,以实现更高效率的检测。

表2 同一样品在不同超声时间后测定的含量Table 2 The content of the same sample measured after different ultrasonic time

2.3 流动相比对

从图1~3标样的出峰可以清晰看出,使用流动相稀释标液得到的标样峰型正常。用甲醇稀释的标液目标峰均出现了峰宽变大,峰前沿拖尾。用乙醇稀释的标液则出现了5-羟甲基糠醛峰分叉,峰宽变大;10-羟基-2-癸烯酸峰宽变大,峰型不佳。故结合实验情况,选择了以流动相溶液稀释标液进行外标法定量。

图1 流动相稀释标液高效液相色谱图Figure 1 HPLC chromatography of mobile phase dilution standard solution

2.4 方法线性范围、检出限及定量限、标样重复性和样品加标回收率

按确定的方法进行测定,分别以5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸含量为横坐标,5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的峰面积为纵坐标,作出标准曲线。实验结果表明,5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸均在0.5~20µg/mL 范围内成线性关系(见表3),5-羟甲基糠醛相关系数R= 0.999 97,10-羟基-2-癸烯酸相关系数R=0.999 95;其中标曲最低点0.5µg/mL的10-羟基-2-癸烯酸和5-羟甲基糠醛信噪比分别为40.2、10.8,根据大于3倍和10倍信噪比确定检出限和定量限,得出10-羟基-2-癸烯酸和5-羟甲基糠醛的检出限及定量限均为5 mg/kg。标曲最低浓度点0.5µg/mL重复进样6次,峰面积见表4,其中5-羟甲基糠醛的RSD数值为1.5%,10-羟基-2-癸烯酸的RSD数值为1.7%。5-羟甲基糠醛回收率为89.4%~103.0%,相关标准偏差(RSD)为0.98%~2.10%;10-羟基-2-癸烯酸回收率为88.9%~102.0%,相关标准偏差(RSD)为0.57%~2.80%(见表5)。该方法方便、灵敏度高、定性定量准确,可很好地实现蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸的测定。

表3 线性回归方程Table 3 Linear regression equation

表4 标点0.5 μg/mL重复测定6次的峰面积情况Table 4 The peak area of 0.5 μg/mL ofter repeated determination of 6 times

表5 回收率和精密度Table 5 Recovery and precision

图2 甲醇稀释标液高效液相色谱图Figure 2 HPLC chromatography of methanol diluted standard solution

图3 乙醇稀释标液高效液相色谱图Figure 3 HPLC chromatography of the ethanol diluted standard solution

2.5 市售蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸检出结果

由表6可见,目前随机抽查的市售部分蜂王浆口服液均检出不同数值的10-羟基-2-癸烯酸,反映不同产品中10-羟基-2-癸烯酸含量有较大差异性;大部分产品均检出有5-羟甲基糠醛,一定程度上反映了产品的不同新鲜程度,增加了产品的贮藏条件的理论依据。

表6 蜂王浆口服液中5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸检出结果Table 6 Detection of 5-hydroxymethylfurfural and 10-hydroxy-2-decenoic acid in royal jelly oral liquid

3 结论

采用0.01 mol/L的盐酸溶液和甲醇溶解蜂王浆口服液并沉淀蛋白质后超声提取10 min,以甲醇(55%)+0.01 moL/L盐酸溶液(45%)为流动相,检测波长280 nm(5-羟甲基糠醛)及210 nm(10-羟基-2-癸烯酸),经高效液相色谱法可同时测定5-羟甲基糠醛和10-羟基-2-癸烯酸2种物质。该方法以出峰时间定性,以外标法定量,方便,快捷,灵敏度高,适用于蜂王浆其他相关产品,为蜂王浆及相关制品的质量把控提供了可行的检测方法。

展开全文▼

猜你喜欢

标液糠醛蜂王浆
环境监测用醛酮腙混合标准溶液量值比对研究
糠醛选择性加氢合成四氢糠醛的研究进展
弱碱性铅加标液的配制方法研究
能力验证过程中出现的问题及解决方法
能力验证过程中出现的问题及解决方法
蜂王浆辅助治病单验方集锦
不同糠醛抽出油对SBS改性沥青性能的影响
憎水性ZIFs对糠醛和5-羟甲基糠醛的吸附分离性能
蜂王浆的正确吃法
催化合成典型5-羟甲基糠醛衍生物的研究进展