畜禽产品兽药残留检测结果计算时需要注意的几个问题

杨修镇，杨 林，徐恩民，赵丰华，杨智国

（山东省畜产品质量安全中心，山东 济南 250102）

兽药在畜禽养殖过程中起着举足轻重的作用，但是不合理甚至违法使用却会给畜禽产品带来极大的安全隐患。兽药残留可对人体产生毒理作用、“三致”作用、变态反应、激素样作用、破坏胃肠道微生物平衡及诱导细菌耐药性的产生等影响[1]。兽药残留检测是保障食品安全的重要手段，但是检测结果的计算却在一定程度上困扰着一些初入行业的检测者，甚至将其导入误区。本文针对畜禽产品兽药残留检测结果计算的类型特点及结果计算时需要注意的问题进行探讨，旨在为有关人员提供参考。

1 畜禽产品兽药残留结果计算和表述的类型

畜禽产品兽药残留检测一般都依据法定的检测标准，结果计算和表述在检测标准中都有具体的规定。常见的类型是单点校准和标准曲线校准。例如GB/T 21317-2007《动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》结果计算和表述采用了单点校准，农业部1025号公告-14-2008《动物源性食品中氟喹诺酮类药物残留检测 高效液相色谱法》标准中有标准曲线制备，结果计算和表述却采用了单点校准。GB/T 22966-2008《牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》结果计算采用了标准曲线校准。也有一些检测标准结果计算和表述同时采用了单点校准和标准曲线校准两种方式，例如农业部1025号公告-11-2008《猪尿中β受体激动剂多残留检测 液相色谱-串联质谱法》和农业部1025号公告-18-2008《动物源性食品中β受体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱法》。

1.1 单点校准

单点校准是指配制一个与被测组分浓度接近的标样，将试样与标样在相同条件下进行测定，依据响应值与浓度的比值恒定来定量的一种方法[2]。单点校准的特点是简单，便于操作，但是当被测组分浓度与标样相差较大时会有较大的误差，这是因为单点校准相当于利用原点是标准曲线上的另一个点，正常情况下标准曲线又是不通过原点的。一般情况下当被测组分的浓度处于标样浓度的80%～140 % 范围内能获得较好的定量结果，偏差≤1 %[3]，中国兽药典中的含量测定大多采用单点校准的方式。

1.2 标准曲线校准

标准曲线校准是指配制一系列不同浓度的标样，将试样与这一系列标样在相同条件下测定，以标样的浓度为横坐标，响应值为纵坐标，绘制标准曲线并利用数学方法拟合回归方程，将试样的响应值代入回归方程求得试样中待测组分浓度的一种方法[4]。标准曲线校正通常要求相关系数0.99以上[5]，标样最低浓度应在试样定量限对应的浓度以下。由于标准曲线的线性范围较广，所以适合大批次样品的检测，但标准曲线校正对试样也有特定的要求那就是必须落在线性范围以内。一般标准曲线是不通过原点的，拟合的回归方程是y＝ax＋b，这条直线存在不为0的截距b，截距的存在使得按照回归方程计算时低浓度的试样会出现较大偏差。

2 畜禽产品兽药残留结果计算时需要注意的几个问题

有的初学者认为检测标准给出了哪种结果计算和表述方式就选择哪种，两种方式都给出的可以自由选择，其实这种说法是不确切的。具体选择应结合实际情况，避免因选择的方式不当带来计算结果的偏离。

2.1 必要时标准曲线校准应进行加权

目前畜禽产品兽药残留检测大多采用高效液相色谱-串联质谱法，高效液相色谱-串联质谱法将色谱的分离能力与质谱的定性和高灵敏度检测能力结合起来，适用于复杂体系中痕量组分的分析[6]。高效液相色谱-串联质谱法受基质效应影响较大[7]，标准曲线浓度范围相差上百倍时，如不进行加权处理低浓度区域的结果准确度往往无法达到标准的要求[8]，甚至出现截距大于斜率的情况使低浓度区域出现严重的偏离。

标准曲线的加权在检测标准给出的结果计算和表述方式中一般不进行体现，需要在实际工作中进行摸索。标准曲线的加权是指增加一个权重因子使曲线上的各个点误差平方和最小，来求得回归方程，即将大的权重给绝对误差小的点，而小的权重给绝对误差大的。一般权重因子为1/Xi、1/Xi2、1/Yi、1/Yi2，权重因子的选择依据是使各测定点具有适当的权重，尽可能使各浓度点测量值的相对误差均较小[9]。

2.2 单点校准与标准曲线校准的选择

单点校准的缺点也是很明显的，如果试样中被测组分的浓度与标样浓度相差很大，同样也会带来较大的偏离。实际检测过程中试样中被测组分的残留量是不可预知的，单点校准时必须保证试样中被测组分的浓度与选定标样接近，要解决这个问题，就不能将单点校准与标准曲线校准割裂，完全可以先建立一条标准曲线，而在计算时部分试样选择与其浓度接近的标样进行单点校准。这样就兼具了两种结果计算和表述方式的优点，尤其在不掌握标准曲线加权的情况下。

畜禽产品兽药残留检测过程中最不该出现的就是结论性错误，即是否检出，是否超标。农业农村部在下达检测任务时，往往以文件规定采用定量限做为是否检出的判定标准，因此定量限这个点是需要额外注意的。定量限一般对应标准曲线上浓度较低的点，如果不采用经过适当加权的标准曲线校准定量容易出现结论性错误，故应综合考虑选择合适的单点校准或对标准曲线进行适当加权。

畜禽产品兽药残留检测标准起草过程中会按照农业农村部农发布的相关规定[10]进行试验验证，内容包括方重复性、法准确度和精密度。标准起草单位应进行储备液的稳定性考察、对前处理方法和仪器条件进行优化、对基质效应情况进行评估。对于有最大残留限量的药物会选择定量限、1/2最大残留限量、最大残留限量、2倍最大残留限量4个点进行添加回收试验，禁用物质会选择定量限、2倍定量限、10倍定量限3个点进行添加回收试验，并选择两家以上有资质的单位对结果进行复核验证。对于有最大残留限量的药物，定量限与2倍最大残留限量往往相距甚远，而标准曲线的线性范围又要囊括定量限和2倍最大残留限量，这就使得标准曲线浓度范围会相差上百倍，通过未经加权处理的标准曲线校准无法使定量限位置添加的回收率处于允许的范围内，而权重因子的选择往往受基质效应、仪器型号等原因影响无法进行统一的规定，因此大多数学者将两种结果计算和表述方式同时列入标准中，让初学者在处理低浓度区域时可以选择与浓度接近的标样进行单点校准定量。

3 小结

畜禽产品兽药残留量检测数量级一般为μg/kg，属于痕量检测，不确定性大，易出现检测结果的偏离和结论性错误。检验人员应做好岗前培训，持证上岗，积极参加有关部门组织的能力验证；对标准物质和试剂耗材供应商进行评估，并按规定存储和领用；仪器设备应定期进行检定/校准和期间核查，监控并记录可能对检测结果造成影响的环境因素；选择恰当的检测方法，并对其有效性进行确认。同时检测结果计算和表述方式也是很重要的一部分，要选择恰当的结果计算和表述方式进行结果计算，避免因计算问题而引起的偏离。