扁蕾化学成分的研究

2022-12-29希古日干王图古拉宝钢图诺木拉哈利嘎苏达毕力格拉喜那木吉拉

中成药 2022年6期

希古日干王图古拉宝钢图诺木拉哈利嘎苏达毕力格拉喜那木吉拉

（内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽028000）

扁蕾为龙胆科一年生或二年生草本植物扁蕾Gentianopsis barbata（Froel.）Ma 的全草，其味苦，性寒，具有祛 “协日”、清热、愈伤、健胃等功效，作为蒙古族传统医药的特色药材，有着良好的疗效，尤其对“协日”病，如黄疸型肝炎、胆囊炎、胃炎等消化道疾病［1-2］，但目前对该植物化学成分和药理活性的研究较少。前期从扁蕾中分离提取多种化合物［3-7］，大多为口山酮、黄酮、萜类，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等多种药理活性［8-12］；本实验在此基础上得到12 个化合物，其中化合物4、5、7、11、12 均为首次从该植物中发现。

1 材料

AVAIVCE Ⅲ-500 型核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；TQS 液相色谱质谱联用仪（美国Waters 公司）；KQ-800 -E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；WRX-4 显微熔点测定仪（上海易测仪器设备有限公司）；LD-20 AT 岛津制备液相色谱仪（日本岛津公司）。Venusil MP C18反相色谱柱（100 Ao，21.2 × 250 mm，10 μm）；薄层色谱柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；Sephade×LH-20 葡聚糖凝胶（瑞典Pharmacia 公司）；柱色谱硅胶及GF254 薄层板（青岛海洋化工厂）。扁蕾采自内蒙古西乌珠穆沁旗，经内蒙古民族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定为扁蕾Gentianopsis barbata（Froel.）Ma。甲醇为色谱纯（山东禹王实业有限公司化工分公司）；其他试剂均为分析纯。

2 提取与分离

取扁蕾1.1 kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次3 h，提取液减压浓缩得浸膏0.5 kg，加500 mL 去离子水搅拌成混悬液，依次用石油醚、二氯甲烷、正丁醇各萃取5次，合并各层，减压浓缩至干，分别得石油醚层120.2 g、二氯甲烷层117.4 g、正丁醇层113.3 g。

取石油醚层3 g，经硅胶柱（500 g），以石油醚-二氯甲烷（3∶2）为流动相洗脱，得流分F.1～F.100，洗脱液经TLC 检测，合并相似组成，得化合物3（1 g）。

取二氯甲烷层3 g，经凝胶柱（500 g），以甲醇-二氯甲烷（3∶2）为流动相洗脱，得流分F.1～F.21、F.2.1～F.2.87，洗脱液经TLC 检测，合并相似组成，得化合物1（2 g）、2（1.4 g）、6（1 g）、8（2 g）、10（3 g）。再将F.7～F.21 合并，经反相制备HPLC，以不同体积分数甲醇为流动相梯度洗脱，得化合物9（0.2 g）。

正丁醇层经反相制备HPLC，以不同体积分数甲醇为流动相梯度洗脱，得化合物4（0.5 g）、5（0.5 g）、7（0.4 g）、11（0.4 g）、12（0.3 g）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z287.0 ［M ＋H］＋，C15H10O6。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.38（brs，1H），7.37（brs，1H）为C环2′和6′位苯环氢信号，6.90（d，J＝8.2 Hz，1H）为C 环5′位邻耦产生的氢信号，6.54（s，1H）位B 环3 位氢原子信号，6.43（brs，1H），6.20（brs，1H）为A 环7 位和9 位间耦产生的氢信号。13CNMR（125 MHz，MeOD）δ：182.5（C-4），164.9（C-2），164.7（C-7），161.8（C-5），157.9（C-9），149.6（C-4′），145.6（C-3′），122.2（C-1′），118.9（C-6′），115.4（C-5′），112.7（C-2′），103.9（C-10），102.4（C-3），98.7（C-6），93.6（C-8）。与文献［13］报道的木犀草素一致。

化合物2：黄色针状结晶，溶于甲醇；ESI-MSm／z276.0 ［M＋H］＋，C14H12O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：11.91（s，1H）和9.51（s，2H）为1，7，8 位活泼氢信号，7.30（d，J＝8.9Hz，1H）和6.91（d，J＝8.9 Hz，1H）为5，6位邻耦氢信号，6.62（d，J＝2.0 Hz，1H）和6.40（d，J＝2.1 Hz，1H）为2，4 位间耦氢信号，3.89（s，3H）为3 位甲氧基信号（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：184.8（C ＝O），167.5（C-3），162.4（C-1），158.2（C-4a），148.5（C-4b），147.6（C-8），141.0（C-7），124.6（C-6），107.9（C-8a），106.5（C-5），102.2（C-8b），97.7（C-2），93.3（C-4），56.7（C-3）。与文献［14］报道的1，7，8-三羟基-3-甲氧基口山酮一致。

化合物3：淡黄色针状结晶，溶于甲醇；ESIMSm／z289.0 ［M-H］-，C15H14O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.30（s，1H），9.62（s，1H）为1，7 位活泼氢信号，7.39（d，J＝9.1 Hz，1H），7.23（d，J＝9.1 Hz，1H）为2，4 位邻耦氢信号，6.34（d，J＝2.3 Hz，1H）和6.54（d，J＝2.3 Hz，1H）为2，4 位间耦氢信号，3.87（s，3H），3.81（s，3H）为3，8 位甲氧基信号（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：181.0（C ＝O），166.5（C-3），163.3（C-1），157.2（C-4a），149.8（C-8），147.5（C-4b），145.7（C-7），124.9（C-6），115.4（C-8a），113.7（C-5），103.7（C-8b），97.2（C-2），92.3（C-4），61.5（C-3），56.5（C-8）。与文献［13］报道的1，7-二羟基-3，8-二甲氧基口山酮一致。

化合物4：黄色无定型粉末，溶于甲醇；ESIMSm／z363.1 ［M-H］-，C18H20O8。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ；12.59（s，1H）为1 位活泼氢信号，7.15（d，J＝2.5 Hz，1H），7.07（d，J＝2.5 Hz，1H）为6，8 位间耦氢信号，4.06（s，3H），3.99（s，3H），3.91（s，3H），3.88（s，3H），3.82（s，3H）为5 个甲氧基信号（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：180.1（C-9），156.4（C-7），154.2（C-3），151.9（C-1），141.9（C-5），135.3（C-4b），134.3（C-4a），132.8（C-4），130.5（C-2），120.9（C-8a），113.3（C-8b），107.8（C-6），95.6（C-8），61.9（C-1′），61.1（C-2′），61.1（C-3′），57.2（C-4′），56.2（C-5′）。与文献报道的1-羟基-2，3，4，5，7-五甲氧基口山酮一致［15］。

化合物5：黄色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z303.1 ［M-H］-，C16H16O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.71（s，1H）为1 位活泼氢信号，7.70（d，J＝8.0Hz，1H），7.42（t，J＝8.0 Hz，1H），7.54（d，J＝7.9 Hz，1H）为苯环上6，7，8位氢信号，3.98（d，J＝8.6 Hz，6H，），3.74（s，3H）为3 个甲氧基信号（OCH3），13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：180.6（C-9），160.2（C-3），153.1（C-1），152.7（C-4a），148.1（C-5），145.6（C-4b），131.3（C-2），124.2（C-7），120.3（C-8a），116.7（C-8），115.6（C-6），103.4（C-8b），91.7（C-4），60.1（C-1′），56.7（C-2′），56.3（C-3′）。与文献［16］报道的1-羟基-2，3，5-三甲氧基口山酮一致。

化合物6：黄色无定型粉末，易溶于甲醇；ESI-MSm／z303.0 ［M-H］-，C16H16O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.29（s，1H）为1 位活泼氢信号，7.22（d，J＝9.1 Hz，1H）和7.39（d，J＝9.1 Hz，1H）为5，6 位邻耦氢信号，6.32（d，J＝2.3 Hz，1H）和6.52（d，J＝2.3 Hz，1H）为2，4 位间耦氢信号，3.81（s，3 H）和3.87（brs，6H）为3，7，8 位甲氧基信号（OCH3）。与文献［17］报道的1-羟基-3，7，8-三甲氧基口山酮一致。

化合物7：黄色针状结晶，易溶于甲醇；ESIMSm／z333.0 ［M-H］-，C17H18O7。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.62（s，1H）为1 位活泼氢信号，7.71（d，J＝9.9 Hz，1H）为5 位三旋体系（AB2）结构氢信号，7.52（dd，J＝9.9，3.1 Hz，1H）为6 位三旋体系（AB2）结构氢信号，7.51（d，J＝3.1 Hz，1H）为8 位三旋体系（AB2）结构氢信号，4.06（s，3H）、3.89（brs，6H）和3.83（s，3H）为4 个甲氧基信号（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：181.3（C-9），156.4（C-7），154.4（C-3），150.8（C-1），150.2（C-4a），145.9（C-4b），135.2（C-2），132.6（C-4），125.9（C-6），120.3（C-8a），120.2（C-6），105.5（C-8），104.7（C-8b），62.2（C-1′），61.9（C-2′），61.1（C-3′），56.3（C-4′）。与文献［18］报道的1-羟基-2，3，4，7-四甲氧基口山酮一致。

化合物8：黄色颗粒状，少量溶于甲醇；ESIMSm／z449.1 ［M＋H］＋，C15H16O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.00（s，1H）为活泼氢信号，7.46（dd，J＝8.4，2.3 Hz，1H）为C 环6′位氢信号，7.42（d，J＝2.3 Hz，1H）为C 环2′位氢信号，6.91（d，J＝8.4 Hz，1H）为C 环5′ 邻耦氢信号，6.79（d，J＝2.1 Hz，1H）和6.45（d，J＝2.1 Hz，1H）为A 环8，5 位间耦氢信号，6.76（s，1H）为B 环3 位孤立氢信号，5.09（d，J＝7.5 Hz，1H）位端基碳原子上的氢信号，3.72～3.16（m，10H）为链接糖苷上的氢信号。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：182.4（C-4），164.9（C-2），163.4（C-7），161.6（C-5），157.4（C-9），150.4（C-4′），146.3（C-3′），121.9（C-1′），119.6（C-6′），116.5（C-5′），114.0（C-2′），105.8（C-10），103.6（C-3），100.4（C-1″），100.0（C-6），95.2（C-8），77.6（C-5″），76.9（C-3″），73.6（C-2″），70.0（C-4″），61.1（C-6″）。与文献［19］报道的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷一致。

化合物9：黄色无定型粉末，溶于甲醇；ESIMSm／z581.3 ［M-H］-，C26H32O15。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.16（d，J＝9.0 Hz，1H）和7.30（d，J＝9.1 Hz，1H）为5，6 位邻耦氢信号，6.77（d，J＝2.3 Hz，1H）和6.73（d，J＝2.3 Hz，1H）为4，2 位间耦氢信号，4.92（d，J＝7.7 Hz，1H）和4.18（d，J＝7.6 Hz，1H）为两个糖的端基碳上的氢信号，3.88（s，3H）和3.80（s，3H）为8，3 位甲氧基信号（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：175.1（C ＝O），164.6（C-3），159.5（C-1），158.2（C-4a），148.9（C-8），147.3（C-4b），145.6（C-7），123.5（C-6），117.8（C-7a），113.1（C-5），107.9（C-8b），104.6（C-1′），103.1（C-1″），100.6（C-2），95.3（C-4），80.8（C-5′），77.0（C-3″），76.8（C-3′），73.8（C-2″），73.8（C-2′），69.9（C-4′），69.6（C-4″），66.1（C-6′），64.6（C-5″），61.3（C-3），56.5（C-8）。与文献［20］报道的1-O-［β-D-吡喃木糖（1 →6）-β-D-吡喃葡萄糖］-7-羟基-3，8-二甲氧基口山酮一致。

化合物10：白色粉末，易溶于甲醇；ESI-MSm／z455.1［M-H］-，C30H48O3。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.03（s，1H），5.16（s，1H），4.30（d，J＝5.2 Hz，1H），2.99（dd，J＝10.2，5.3 Hz，1H），2.81～2.69（m，1H）为连氧碳上的氢信号，1.96～0.62（m，21H）为7 个甲基质子信号。13CNMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：144.3（C-13），121.9（C-12），77.3（C-3），55.3（C-5），47.5（C-9），40.6（C-14），38.9（C-8），38.5（C-4），37.1（C-1），33.8（C-10），32.6（C-7），27.4（C-2），26.1（C-15），23.4（C-11），23.1（C-16），18.5（C-6）。与文献［21］报道的齐墩果酸一致。

化合物11：淡黄色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z359.1［M＋H］＋，C16H22O9。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.49（s，1H）为双键上3 位氢信号，4.50（d，J＝7.9 Hz，1H）为连糖端基碳上的1′位氢原子信号。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：164.7（C-11），151.5（C-3），132.4（C-8），120.4（C-10），104.9（C-4），98.1（C-1′），95.6（C-1），77.4（C-5′），76.4（C-3′），73.1（C-2′），70.1（C-4′），67.7（C-7），61.1（C-6′），41.5（C-9），26.8（C-5），24.3（C-6）。与文献［22］报道的獐牙菜苷一致。

化合物12：淡黄色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z413.1［M＋Na］＋，C17H26O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.36（s，1 H，H-3）为3 位双键上的氢信号，5.12（d，J＝5.0 Hz，1H）为1 位连氧碳上的氢信号，4.47（m，1H）为7 位氢信号，3.88（m，1H）为连糖6′氢信号，3.62（s，3H）为12 位甲基（CH3）上的氢信号，3.16（m，1H）为5 位氢信号，2.06（m，1H）为9 位氢信号，1.84（m，1H）为8 位氢信号，1.76（m，2H）为6 位氢信号，0.98（d，J＝6.8 Hz，3H）为10 位甲基（CH3）上的氢信号。13C-NMR（125 MHz，DMSOd6）δ：167.0（C-11），150.6（C-3），112.1（C-4），98.6（C-1′），96.1（C-1），77.2（C-3′），76.7（C-5′），73.1（C-2′），72.1（C-7），70.1（C-4′），61.1（C-6′），51.0（C-12），44.7（C-8），41.7（C-6），40.5（C-9），30.8（C-5），13.5（C-10）。与文献［23］报道的马钱素一致。