COVID-19疫情下加热前处理浆膜腔积液标本的制作体会

脱颖，赵双龙 ，黄蕾蕾

（1中山大学附属第一医院病理科，广州 510080；2山西医科大学汾阳学院，汾阳 032200）

新型冠状病毒肺炎( coronavirus disease 2019，COVID-19) 是一种急性呼吸道传染病，传播途径主要为飞沫传播、接触传播、气溶胶等方式。病理科细胞室操作人员在日常工作中，会接触确诊或疑似COVID-19患者的痰液、胸腔积液、腹腔积液等标本，这些标本在离心包埋过程中易产生气溶胶污染以及液体飞溅导致的体液污染，因此细胞学检查被认定为病理科重点防护环节之一[1]。本文拟探讨新冠疫情常态化下，浆膜腔积液标本在60 ℃ 30 min加热处理与室温常规处理后，在大体观、细胞涂片及细胞蜡块HE和免疫组织化学染色的差异，并明确诊断结果是否一致，从而探讨一种既不影响细胞学诊断，又能阻断细胞学环节的生物安全隐患的前处理方式。

材料与方法

1 材料

选取2022年3月中山大学附属第一医院病理科细胞室接收的浆膜腔积液标本15例作为研究对象。

2 方法

将接收的标本分为加热组和对照组；加热组对细胞学标本行烤箱60 ℃加热 30 min的前处理，对照组无前处理。随后，两组同步观察大体，按传统方式离心沉淀后，直接行细胞涂片、液基制片和细胞蜡块HE染色，观察细胞形态。若染色中查见不典型细胞，同步行免疫组织化学染色进一步明确诊断。

免疫组织化学染色采用Leica BOND Ⅲ全自动免疫仪法， 一抗Ki-67（MIB-1）、pan CK（AE1/AE3）、Vimentin（3B4）均购自DAKO公司，二抗检测显色系统为机器配套试剂。两名经验丰富的细胞病理医师按《中国浆膜腔积液细胞病理学检查专家共识(2020年版)》对染色结果进行评估和判读[2]。

结果

两组胸腹水标本肉眼观察颜色、质地无明显差异（图1A、B）。在涂片和液基制片上，染色后两组细胞轮廓均清晰可见，核、质及细胞团结构清晰，两组无明显区别。但在细胞数量上，加热后的涂片标本细胞密度均略微变低，细胞团有一定程度的散开（图1C—F）。

两组细胞蜡块HE染色均可见保存良好的淋巴细胞、组织细胞、间皮细胞等。其中可疑含肿瘤细胞的4例，均至少有1个含5个及以上肿瘤细胞的细胞团或者单张切片可辨认的肿瘤细胞数量＞50个（图2A、B）；两组CK、Ki-67、vimentin）免疫组织化学染色结果一致（图2C—H）。

两组标本的最终病理诊断结果一致：11/15未见肿瘤细胞，4/15可见肿瘤细胞。

讨论

新型冠状病毒( severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2) 属于冠状病毒β属，是有包膜的单链RNA病毒，当包膜被破坏后，RNA容易被降解，从而使病毒失活。因此，病毒对紫外线和热敏感。56 ℃ 30 min、75% 乙醇、含氯消毒剂等脂溶剂均可有效灭活病毒[3]。目前加热灭活新冠病毒的前处理方式，对于分子检测结果和血清生化指标检测结果的影响，已进行初步探讨[4,5]。对于病理科细胞学标本预处理方式，目前国内报道的为福尔马林固定灭活和加热灭活两种方法。但通过福尔马林固定后的细胞学标本常常发生细胞固缩，尤其是细胞学涂片标本细胞固缩较为严重，对诊断影响较大[6]。通过对新型冠状病毒肺炎患者肺泡灌洗液，行水浴锅中56 ℃灭活 30 min，认为在生物安全二级防护措施下进行细胞蜡块制作，未发生实验室人员感染，加热灭活的安全性得到了确认[7]，但此实验未和加热前的常规处理标本进行比较，无法判断加热前后各项指标的一致性。

随着2021年我国疫情防控措施不断优化和推进、疫苗广泛接种，我国疫情防控已经逐步平稳。但新突变型病毒的出现，使得防疫限制措施可能会持续或间歇实施，仍对我国细胞病理学工作产生了巨大影响[8]。因此不断探索安全有效的细胞学标本的前处理方式阻断病毒传播尤为重要。在新冠疫情常态化的环境下，本文对细胞学标本前处理方进行了探讨，通过比较加热前后浆膜腔积液标本的大体观、细胞涂片及细胞蜡块HE和免疫组织化学染色，最终的病理诊断结果均一致。需指出，加热也会对细胞形态略有影响，低倍镜下细胞形态无明显差异，但高倍镜可查见核膜稍皱缩，核仁稍不清，但对最终诊断无影响。

我们探索的加热预处理对于类似高传染性体液标本的转运及制片均具有借鉴意义，能降低医务人员操作中病毒传播的危险，减少院内感染，是一种简单易行的切断新冠病毒传播的有效方式之一，值得借鉴。