AHP-CRITIC混合加权评分法对辽宁产白鲜皮质量评价*

李欣然，康靖杰，夏林波，朱思晗，贾天柱，刘 莲，陈晓霞

(1 辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600；2 北京斯丹姆赛尔生物技术有限责任公司，辽宁 沈阳 110000)

白鲜为芸香科(Rutaceae)白鲜属多年生草本植物白鲜的根皮。我国有白鲜属植物 2种，即白鲜(Dictamnusdasycarpus)产于东北(黑龙江、吉林、辽宁)、华北(内蒙古、河北)、西北(陕西、甘肃)、东南(山东、江苏、江西、安徽、)和华中(湖南、湖北)等地区；狭叶白鲜(Dictamnusangustifolius)产于新疆[1]。有羊膻气、味微苦、咸，性寒，归脾、胃、膀胱经，主要含有生物碱、柠檬苦素、倍半萜及其苷、黄酮、香豆素、挥发油类等化学成分[2]，其中2020版《中国药典》以黄柏酮及梣酮为其指标性成分进行质量控制[3]。《药性论》中记载治一切热毒风、恶风、风疮、疥癣赤烂、眉发脱脆、皮肌急、壮热恶寒。进入21世纪后，白鲜皮独特的疗效和特殊用途被逐渐开发利用，市场需求较上世纪增长10多倍[4]，导致野生资源大量减少，人工大面积栽培迫切需要。中药的道地性为人工栽培白鲜皮药效的保证提供依据，辽宁产白鲜皮被公认为质量较好，但是目前没有数据支持。本实验对不同来源辽宁产白鲜皮与省外白鲜皮中三种主要成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮含量及出膏率进行测定，采用综合加权评分法对其质量进行评分，结果显示辽宁产白鲜皮总体评分平均分较省外评分高，具有显著性差异，尤其是其中白鲜碱含量显著高于省外地区。这为辽宁产白鲜皮质量评价提供科学依据，为进一步开发辽宁产白鲜皮应用提供研究方向。

1 实 验

1.1 仪器与材料

Agilent 1290高效液相色谱仪(含四元低压梯度泵及DAD检测器)，美国安捷伦科技有限公司；AUW 220D十万分之一电子天平，日本岛津有限公司；HH-M4电热恒温水浴锅，上海赫田科学仪器有限公司；KQ5200DE超声清洗机，昆山市超声仪器有限公司；DFT-300小型粉碎机，温州顶力医疗器械有限公司；101-2A电热鼓风干燥箱，天津泰斯特仪器有限公司。

白鲜碱对照品(YJ0102),江苏永健医药科技有限公司；黄柏酮(111923-20160)及梣酮(111700-201603)对照品，中国食品药品鉴定研究院；19批次白鲜皮药材信息详见表2，经辽宁中医药大学药用植物教研室尹海波教授鉴定为芸香科(Rutaceae)白鲜属植物白鲜的根；纯净水；色谱纯甲醇，天津科密欧；分析纯甲醇，国药集团。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm×5 μm×250 mm)；流动相：甲醇-45%水；流速：1.0 mL·min-1；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；检测波长：236 nm; 理论塔板数以梣酮计算应不少于3000。

1.2.2 供试品溶液制备

取各产地白鲜皮药材粗粉(过四号筛)1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

1.2.3 对照品溶液的制备

分别精密称取白鲜碱，黄柏酮和梣酮对照品9.30 mg、10.15 mg、10.66 mg，加甲醇分别定容，配制成0.3720 mg·mL-1、1.015 mg·mL-1、1.066 mg·mL-1的对照品储备液，低温、避光保存。分别取各对照品储备液不同体积配置成分别含白鲜碱，黄柏酮和梣酮111.6, 507.5, 213.2 μg·mL-1混合标准品，依次按照2、4、10、20、40、100倍进行稀释。

2 结果与分析

2.1 色谱条件选择

本实验对不用的色谱条件进行了选择，最终确定以Agilent HC-C18色谱柱，甲醇-45%水为流动相，在1.0 mL·min-1流速及40 ℃柱温条件下，236 nm波长处测得的三个主要化学在混合对照品及样品中得到较好的分离(见图1)，可以用于样品测定。

图1 HPLC色谱分离图

2.2 线性关系

将配置好的系列对照品溶液，按“2.1”下的色谱条件进行测定，记录峰面积(y)为纵坐标，浓度(x)为横坐标，进行线性回归，结果见表1。

表1 三种成分的回归方程、相关系数及线性范围

2.3 精密度测验

精密吸取同一白鲜皮供试品溶液，重复进样6次，分别以白鲜碱、黄柏酮、梣酮含量的RSD值为1.94%、1.98%、1.57%，表明仪器精密度良好。

2.4 稳定性试验

取同一白鲜皮的供试品溶液，分别在制备0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，结果各主要色谱峰相对峰面积的RSD值为1.83%、1.99%、1.66%，表明样品溶液在24 h内稳定性良好。

2.5 重复性试验

取同一批白鲜皮供试品6份,按照供试品方法制备样品进行含量测定，结果各主要色谱峰相对峰面积的RSD值为1.43%、1.36%、1.03%，表明方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验

取已知含量的6份白鲜皮样品粉末各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入一定量的对照品物质，按照“1.2.2”项下制备供试品溶液。进行测定测定各成分的含量，计算白鲜碱、黄柏酮、梣酮平均加样回收率为在95.5%～96.2%之间，RSD均小于2.2%，表明方法的准确度良好。

2.7 样品含量测定

取收集的19种不同产地的白鲜皮，按“1.2.2”项制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下分别进行含量测定。

2.8 出膏率测定

称取不同产地白鲜皮5 g，分别加入12倍量的水，煎煮1 h后再加入10倍量的水，煎煮1 h，趁热抽滤，蒸干，烘成浸膏备用，出膏率如表2所示。

2.9 样品质量评价

中药成分负复杂，往往不能以单一成分来评价其质量好坏。综合评分法是通过打分来对根据品质划分等级的项目进行量化处理，是对评价的不同等级赋予不同的分值，并以此为基础进行综合评价，被广泛引用在中药质量评价中。本实验分别采用层次分析(AHP)、CRITIC 及AHP-CRITIC混合加权法来确定权重系数。

(1)层次分析(AHP)法确定权重系数 AHP法是基于主观赋值权重的一种方法[5]。查阅文献中对白鲜皮中主要三个有效成分的药理作用及药典规定指标，对白鲜碱、黄柏桐和梣酮的含量、出膏率作为权重指标予以量化。将4个指标分为4个层次，确定4项指标的优先顺序为：黄柏桐=梣酮>白鲜碱>出膏率。黄柏桐及梣酮含量为2020版《中国药典》规定白鲜皮中检测的两个指标，因此认为其同样重要。但较白鲜碱含量而言比较重要赋值5；较出膏率而言十分重要，赋值6；白鲜碱含量较出膏率而言比较重要，赋值4。进行权重系数计算分别为0.12、0.41、0.41、0.06.

(2)指标重复性相关法(CRITIC)确定权重系数 主观赋权不能有效全面地体现各指标中成分对药材质量的影响，而CRITIC法以评价指标间的对比强度及冲突性作为基础，通过计算标准差将对比强度体现出来，是一种能客观反映各评价指标权重的计算方法[6]，故考察采用CRITIC法确定各指标权重系数。将19批不同产地样品中白鲜碱、黄柏桐、梣酮含量及出膏率输入spssau软件中，计算其各自权重系数为0.18,0.49,0.32,0.01。

(3)AHP-CRITIC混合加权法确定权重系数 AHP法依据中药主要成分与有效成分概念，赋予主要有效成分黄柏桐、梣酮最大的权重系数，次要有效成分白鲜碱权重系数次之，出膏率权重系数最小。CRITIC法计算结果显示，黄柏桐、梣酮的权重系数相差较大，虽然客观真实，但不能反映中药中多种主要有效成分起作用的意义。AHP-CRITIC混合加权法兼具两者优点，能全面体现样本的数据信息，故决定采用AHP-CRITIC混合加权法确定指标权重系数，即:ω综和ij=ωAHPijωCRITICij/∑ωAHPijωCRITICij。(ωAHPij表示AHP法计算的权重系数，ωCRITICij表示CRITIC法计算的权重系数，i表示第i个因素，j表示第j个样本)。根据AHP-CRITIC混合加权法计算得白鲜碱、黄柏桐、梣酮及出膏率权重系数分别为0.06、0.57、0.36、0.02。

(4)3种赋权法的综合评分结果比较 分别用 3种赋权法得到的权重系数对实验数据进行综合评分，结果见表2。通过SPSS 16.0软件对3种赋权法得到的综合评分进行相关性分析，结果AHP法与CRITIC法得到的综合评分之间的相关系数为0.982，AHP法与AHP-CRITIC混合加权法得到的综合评分之间的相关系数为0.969，CRITIC法与AHP-CRITIC混合加权法得到的综合评分之间的相关系数为0.981，三者间的相关性均显著(P<0.05)，说明这3种赋权法得到的评分结果具有一致性。相较之下，AHP-CRITIC混合加权法结合了AHP法与CRITIC法两种方法的优势，能从主、客观两方面体现提取药材质量评价的实际情况。

表2 19种不同产地的白鲜皮指标性成分含量测定及评分结果

本实验通过AHP-CRITIC混合加权法对19批药材综合评分进行分析，发现12批辽宁产地药材，包括直接购买3批，野生采挖3批及种植基地人工栽培6批，除S5及S8外均评分高于50。另外，我们对辽宁产的12批药材与辽宁外的其他省外7批综合评分进行统计学处理，发现二者平均值分别为57.33及41.70，且具有统计学差异(P=0.02)。由此可见辽宁产地白鲜皮质量较高。但辽宁产的S8样品为人工栽培三年生品种，其梣酮含量不符合2020版中国药典不得少于0.05%的规定，可能是由于其生长年限不够，S5为野生品种采挖，其评分低可能也是生长周期不够长。另外五个栽培品生长期高于四年均能满足《中国药典》要求，由此我们推断辽宁栽培白鲜皮生长年限至少要达到四年才能采挖。另对不同产地白鲜皮中三种主要化学成分直观分析(见图2)，发现辽宁产白鲜皮中白鲜碱的含量明显高于省外产地，黄柏酮和梣酮没有明显规律。白鲜碱虽然没有被纳入《中国药典》检测范围中，但由于白鲜碱对某些肿瘤细胞有着抑制细胞增殖、侵袭和转移的作用[7]，因此一直是研究热点。由此推测辽宁产白鲜皮可值得更进一步研究和开发。

图2 19种产地白鲜皮中三种主要化学成分含量比较

3 结 论

随着白鲜皮药用价值的不断开发及野生资源的枯竭，人工栽培白鲜皮受到了重视。近年来市场上陆续出现了种植品。中草药的栽培质量受到很多因素影响，其中栽培地的选择应尽量遵循“道地”原则。本实验对辽宁产的白鲜皮与省外产白鲜皮进行了评分分析，辽宁产白鲜皮平均值高，且人工栽培品与市售和野生产品三个主要成分及出膏率未见显著差异。从目前收集样本分析可见辽宁产白鲜皮中白鲜碱含量普遍较高，有可能为辽宁产白鲜皮种植及引用开发提供可靠支持。但是本实验收集的样本数量还存在不足，辽宁产地白鲜覆盖地域较窄，省外样品数目较少，有待于收集更多的样本采用HPLC-MS/MS对其化学成分进行更全面分析。