麻干防风合剂质量标准研究

孙 惠，郭 鑫，刘雪坤

麻干防风合剂是某医院门诊部临床验方开发的院内制剂，由麻黄、干姜、防风、黄芪、陈皮等12 种中药组成，有辛温解表、宣肺散寒之功效，临床上多用于治疗寒冷型荨麻疹.麻黄为肺经之要药，易宣肺止咳平喘；麻黄、苦杏仁合用升降相宜，在止咳平喘方面具有协同作用；黄芪配伍防风益气固表止汗，多用于治疗表虚自汗；干姜有温中、回阳、温肺化痰等治疗功效，处方中各味药相互配伍达宣肺散寒、辛温解表之功效［1-3］.

麻黄中麻黄碱含量较高，同时也是麻黄主要生物活性成分之一，麻黄碱占总生物碱的30%～90%，麻黄碱通过影响α和β肾上腺素使受体产生心率收缩、外周血管收缩、支气管扩张和中枢神经系统刺激，麻黄碱的血管收缩和支气管扩张作用可用于治疗鼻腔充血剂和哮喘等疾病；同样通过刺激中枢神经系统兴奋、抑制食欲等方式，可以减轻肥胖患者的体重、改善耐力训练表现、提高脂肪组织的代谢率［4］.随着研究不断深入，发现含麻黄碱的制剂具有较多副作用，如会造成心肌梗塞、心律失常、癫痫、意识丧失，甚至死亡等［5］.因此，需要对制剂中的麻黄碱含量限度进行测定，为制订制剂质量标准提供基础.

橙皮苷是陈皮的主要成分之一，是一种广泛存在于柑橘果实中的黄酮苷类化合物，具有多种生物学活性，如抗氧化、抗炎、抗癌、抗过敏、保护心血管等作用［6］，可有效治疗多种疾病，包括心血管疾病、神经疾病、精神疾病、癌症等.橙皮苷不仅可以通过ERK/Nrf2 信号通路增强抗氧化细胞的防御而发生抗炎作用，还具有类似维生素的活性，可以降低毛细血管通透性、渗漏和脆性，下调过度激活的巨噬细胞和上调功能失调的T 淋巴细胞可产生免疫调节作用［7-9］.为更好地保证制剂质量并应用于临床，本文采用HPLC 法对麻黄中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，以及陈皮中橙皮苷进行测定，为临床安全用药提供理论基础和科学依据.

1 仪器与试药

仪器和试药的造配如表1所示.

表1 仪器与试药

2 方法与结果

2.1 盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱含量测定

2.1.1 溶液的制备

对照品溶液的制备：精确称定适量两种对照品，溶剂为0.01 mol·L-1盐酸，使其溶解、定容，制成每种成分均为10 μg·mL-1的混合溶液.

供试品溶液的制备：精确量取制剂10 mL，溶剂甲醇，定容至25 mL 后过滤；取5 mL 滤液过中性氧化铝柱（100～200 目），洗脱剂为无水乙醇（40 mL），实验中收集全部洗脱液，并将其蒸干（旋转蒸发法），残渣先用50%甲醇（2 mL）溶解，再加0.01 mol·L-1盐酸定容至5 mL，过0.45 μm 滤膜，即得供试品溶液.

阴性样品溶液的制备：在处方中去除麻黄后，按此处方比例制备制剂，结合供试品溶液的制备制成阴性样品溶液.

2.1.2 色谱条件

色谱柱：Hypersil BDS C18（4.6×200 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.3%三乙胺溶液0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（pH3.0）（4∶96）；流速：0.8 mL·min-1；柱温：室温；进样量：10 μL；检测波长：210 nm；理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于4 000［10-11］.

2.1.3 专属性试验

对照品溶液，供试品溶液及阴性样品溶液按色谱条件测定，记录色谱峰.结果表明，色谱图中两种有效成分之间、两种成分与其他成分之间分离度均比较好，且无干扰.实验结果见图1.

图1 专属性试验谱图

2.1.4 标准曲线制备

分别精密吸取混标溶液0.75 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL、2.25 mL，并用0.01 mol·L-1盐酸分别稀释10 倍.分别测定峰面积值（A），以浓度为横坐标，以A值为纵坐标，绘制标准曲线并计算回归方程，实验结果见表2.

表2 标准曲线实验结果

2.1.5 精密度试验

取对照品溶液，连续测定6 次A值，计算RSD 值，实验结果见表3，RSD 值分别为0.13%和0.21%.

表3 盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱精密度试验结果

2.1.6 重复性试验

取同一批次的麻干防风合剂6 份，制备供试品溶液并测定A值，分别计算两种成分含量及其RSD 值，RSD 值分别为0.73%和0.80%，实验结果见表4.

表4 盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱重复性试验结果

2.1.7 稳定性试验

测定供试品溶液0～48 h 内样品稳定性，按表5时间点取样并测定A值，计算其RSD 值.实验结果见表5，RSD 分别为0.77%、1.50%，符合规定.

表5 盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱稳定性试验结果

2.1.8 回收率试验

取同一批次的麻干防风合剂18 份，分别按表6、表7中加标量加入对照品，测定A值，计算回收率及RSD 值.实验结果见表6、表7，平均回收率分别为98.66%、99.80%，RSD 值为1.48%、1.17%，结果均符合此样品含量项下加样回收率的要求.

表6 盐酸麻黄碱回收率试验结果

表7 盐酸伪麻黄碱回收率试验结果

2.2 橙皮苷含量测定

2.2.1 溶液的制备

对照品溶液的制备：取橙皮苷适量，精确称取，甲醇为溶剂，制30 μg·mL-1的溶液.

供试品溶液的制备：取2 mL 制剂，稀释12.5 倍，50%乙醇溶液为稀释剂，过0.45 μm滤膜，即得供试品溶液.

阴性样品溶液的制备：在处方中去除陈皮后，按此处方比例制备制剂，结合供试品溶液的制备制成阴性样品溶液.

2.2.2 色谱条件

色谱柱：HyPpersil BDS C18（4.6×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-1%醋酸（17∶83）；流速：0.8 mL·min-1；柱温：室温；检测波长：283 nm；理论板数按橙皮苷峰计算，应不低于4 000.

2.2.3 专属性试验

将对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液三种溶液注入高效液相色谱仪中得到相应谱图.结果表明，供试品溶液的色谱图中，橙皮苷与其他成分分离度好且无干扰.实验结果见图2.

图2 专属性试验谱图

2.2.4 标准曲线制备

精密吸取贮备液2.0 mL、3.2 mL、4.0 mL、4.8 mL、6.0 mL，并将其分别稀释10 倍，稀释剂为甲醇，分别测定A值，以对照品浓度为x，以A值为y，绘制标准曲线，计算回归方程，实验结果见表8，回归方程为y=24 722x-4 302.9（r2=1.000 0）；实验结果表明，橙皮苷在13.26～39.77 μg·mL-1的范围内线性关系良好.

表8 橙皮苷标准曲线结果

2.2.5 精密度试验

取橙皮苷溶液连续测定6 次，记录A值，计算RSD 值，实验结果见表9，RSD 为0.04%.

表9 橙皮苷精密度试验结果

2.2.6 重复性试验

取同一批次的麻干防风合剂6 份，制备供试品溶液并测定A值，计算其RSD 值为0.13%，实验结果见表10.

表10 橙皮苷重复性试验结果

2.2.7 稳定性试验

测定供试品溶液0～48 h 内样品稳定性，按表11时间点取样并测定A值，实验结果见表11，计算其RSD 值为0.36%，符合规定.

表11 橙皮苷稳定性试验结果

2.2.8 回收率试验

取同一批次的麻干防风合剂9 份，按表12中加标量分别加入对照品，测定A值，计算回收率及RSD 值.实验结果见表12，平均回收率为95.76%，RSD 值为1.64%，结果均符合加样回收率的要求.

表12 橙皮苷回收率试验结果

2.3 样品含量测定

取3 批麻干防风合剂，制备供试品溶液，分别测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱、陈皮中橙皮苷A值，根据标准曲线计算含量，实验结果见表13.

表13 3 批麻干防风合剂含量结果

3 讨论

麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱色谱条件筛选过程中，通过查阅文献并结合《中国药典》（2020年版）中小青龙合剂中麻黄含量测定方法进行实验，并进行方法学验证.在测定陈皮中橙皮苷时，采用药典中陈皮药材方法测定峰型较差，因此再加1%醋酸溶液以调整峰型，并且通过对流动相比例及流速，调整合适的运行时间，最终确定橙皮苷色谱条件.盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和橙皮苷化学性质相差较大，不能同时进行含量测定，故分别测定其含量，对所建立色谱条件进行方法学验证，所测定的有效成分均在相应范围内具有较好的线性关系，并可以基于此关系进行制剂含量测定，并对所用仪器、所建立提取方法及样品放置稳定性进行考察，其RSD 值均＜2%，符合相关规定，建立的方法精密度高，重复性好，可应用于该制剂的检测，同时也为制订麻干防风合剂质量标准提供基础.

麻干防风合剂进行含量测定，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和橙皮苷含量平均值分别为0.039 mg·mL-1、0.031 mg·mL-1、0.314 mg·mL-1，且RSD 均小于2.0%，说明制剂含量均一、稳定，进一步验证了工艺的稳定性，为下一步临床研究提供了参考.