青钱柳叶化学成分的研究

2022-12-17李善斌闫梦麒周先丽谢沛锋王凌峰罗嘉雯韦媛媛梁成钦

中成药 2022年7期

王笑，李善斌，闫梦麒，周先丽，谢沛锋，王凌峰，罗嘉雯，罗琴，韦媛媛，梁成钦*

(1.桂林医学院药学院，广西桂林 541004；2.桂林医学院生物技术学院，广西桂林 541004；3.桂林医学院科学实验中心，广西桂林 541004)

青钱柳Cyclocaryapaliurus(Batalin) Iljinsk为胡桃科青钱柳属双子叶植物，被称为植物界“大熊猫”，现仅存于中国，是我国二级保护濒危树种[1]，主要分布在江西、湖北、湖南等南方各省[2]，其性温，味辛、微苦，具有清热解毒、消肿止痛功效，还可用于医治顽癣[3]，并有着生津止渴、降血压、降血糖、降血脂作用[4]，以降血糖尤为显著[1]，含多种成分，其中含量相对较高的是黄酮、三萜、多糖、有机酸等[5]。课题组前期从青钱柳叶中分离得到一系列化合物，如四酮苷、黄酮、酚酸、三萜苷[6-8]，本实验又从中发现11个化合物，其中化合物1、5、6、7、9、10、11均为首次从该植物中分离得到。

1 材料

LC-MS8030液相色谱-四级杆质谱联用仪(日本岛津公司)；AM-400、DRX-500、AVANCE-600 MHz超导核磁共振仪(德国Bruker公司)；Waters2535制备型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；LC1260分析型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；BS400S型电子天平(德国赛多利斯公司)；ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm；9.4 mm× 250 mm，5 μm，美国Agilent公司)；JAKD-PAK ODS色谱柱 (19 mm×300 mm，10 μm，广州太玮生物科技有限公司)。

层析用硅胶(100～200、200～300目，青岛海洋化工厂)；反相填充材料RP-18(40～60 μm，德国Merck公司)；MCI填充材料SBC MCI GEL F型(50～100 μm，成都科谱生物有限公司)；Sephadex LH-20凝胶；GF254薄层硅胶板(青岛海洋化工厂)。色谱纯甲醇、乙腈(美国Fisher公司)；分析纯甲醇、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、乙醇(西陇化工股份有限公司)。

青钱柳叶采自广西资源县，经桂林医学院黄德青副教授鉴定为胡桃科青钱柳属植物青钱柳Cyclocaryapaliurus(Batalin) Iljinsk的干燥叶。

2 提取与分离

取干燥青钱柳叶粗粉50 kg，70%乙醇室温浸提3次，浸出液减压浓缩得浸膏，适量水分散，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压蒸馏回收溶剂，得乙酸乙酯、正丁醇、水部位萃取物。将乙酸乙酯部位萃取物用硅胶柱色谱分离(100～200目)，氯仿-甲醇(9∶1～0∶1)梯度洗脱，TLC检测合并相同流分，得Fr.A～Fr.E，硅胶柱(100～200目)分离。Fr.A洗脱液依次为石油醚-乙酸乙酯(1∶2、1∶3)、乙酸乙酯、甲醇，TLC检测合并相同流分，得Fr.A1～Fr.A5，Fr.A3用MCI柱分离，甲醇(30%～100%)洗脱，得Fr.A3-Ⅰ～Fr.A3-Ⅷ，Fr.A3-Ⅰ(30%甲醇-水)经RP-18反相硅胶层析柱分离，35%甲醇洗脱，得Fr.A3-Ⅰa、Fr.A3-Ⅰb，Fr.A3-Ⅰa经高效液相(25%甲醇-水)分离，得化合物7(t=49 min, 34.7 mg)、10(t=88 min, 60.8 mg)；Fr.A3-Ⅰb经高效液相(15%乙腈-水)分离，得化合物2(t=17.3 min, 21.4 mg)、9(t=23 min, 14.9 mg)。

Fr.A1经高效液相(30%～54%甲醇-水)分离，得Fr.A1-I～Fr.A1-Ⅺ。Fr.A1-Ⅵ经高效液相(70%甲醇-水)分离，得化合物8 (t=94 min)；Fr.A1-XI经高效液相(45%甲醇-水)分离，得化合物3(t=117 min, 35.5 mg)、4(t=91 min, 22.0 mg)。

Fr.A4经MCI柱分离，甲醇-水(0～100%)洗脱，得Fr.A4a～Fr.A4f。FA4a经高效液相(45%甲醇-水)分离，得FA4a-1～FA4a-3，FA4a-1经高效液相(33%甲醇-水)洗脱，得化合物1(t=38.4 min, 18.5 mg)。

Fr.A5经MCI柱分离，甲醇-水(0～100%)洗脱，得Fr.A5a～Fr.A5f。Fr.A5d经高效液相(78%甲醇-水)，得Fr.A5d-I～Fr.A5d-V，Fr.A5d-V经高效液相(31%乙腈-水、66%甲醇-水)分离，得化合物6(t=115 min, 5.4 mg)。

为了富集得到极性较大的青钱柳苷类，另取50 kg干燥叶，热水提取多次至水溶液无明显苦味，水提液用D101大孔树脂吸附，90%乙醇进行洗脱，合并洗脱液，减压浓缩至无酒精味，正丁醇萃取，萃取液减压浓缩干燥(共3.5 kg)后经MCI柱，甲醇-水(0～100%)洗脱，TLC检测合并相同组分，得Fr.a～Fr.k。Fr.f(50%甲醇-水)经凝胶柱分离，甲醇洗脱，TLC检测合并相同组分并浓缩干燥，得Fr.f1～Fr.f27。Fr.f2经高效液相(50%甲醇-水)分离，得化合物5(t=97 min, 42.9 mg)、11(t=111 min, 16.4 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末。ESI-MSm/z: 485[M+Na]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.28 (1H, brs, H-2′), 7.24 (1H, d,J=8.2 Hz, H-6′), 6.85 (1H, d,J=8.2 Hz, H-5′), 6.38 (1H, s, H-8), 6.19 (1H, s, H-6), 5.24 (1H, s, H-1″), 3.96 (1H, d,J=3.2 Hz, H-2″), 3.43 (1H, m, H-4″), 3.17 (3H, s, 4″-OCH3), 3.16 (1H, m, H-5″), 3.15 (1H, m, H-3″), 0.80 (3H, d,J=5.9 Hz, H-6″);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 157.7 (C-2), 134.6 (C-3), 178.1 (C-4), 161.7 (C-5), 99.2 (C-6), 164.8 (C-7), 94.1 (C-8), 156.9 (C-9), 104.4 (C-10), 121.1 (C-1′), 115.8 (C-2′), 145.6 (C-3′), 148.9 (C-4′), 116.0 (C-5′), 121.5 (C-6′), 102.2 (C-1″), 70.7 (C-2″), 71.5 (C-3″), 71.0 (C-4″), 70.4 (C-5″), 17.9 (C-6″), 49.0 (4″-OCH3)。以上数据与文献[9]一致，鉴定为quercetin-3-O-(4″-methoxy)-α-L-rahmnopyranosyl。

化合物2：黄色无定型粉末。ESI-MSm/z: 447.0[M-H]-。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.61 (1H, s, 5-OH), 8.05 (2H, dd,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.87 (1H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.51 (1H, brs, H-8), 6.27 (1H, brs, H-6), 5.40 (1H, d,J=7.7 Hz, H-1″);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 156.4 (C-2), 133.3 (C-3), 177.6 (C-4), 161.2 (C-5), 98.8 (C-6), 164.4 (C-7), 93.8 (C-8), 156.5 (C-9), 103.9 (C-10), 120.8 (C-1′), 131.0 (C-2′), 115.2 (C-3′), 160.1 (C-4′), 119.8 (C-5′), 131.0 (C-6′), 101.8 (C-1″), 71.3 (C-2″), 73.2 (C-3″), 67.8 (C-4″), 75.8 (C-5″), 60.1 (C-6″)。以上数据与文献[10]一致，鉴定为山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷。

化合物3：黄色无形状粉末。ESI-MSm/z: 285[M-H]-。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 8.09 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.39 (1H, s, H-8), 6.18 (1H, s, H-6);13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 148.1 (C-2), 137.1 (C-3), 177.4 (C-4), 162.5 (C-5), 99.3 (C-6), 165.6 (C-7), 94.5 (C-8), 158.3 (C-9), 104.6 (C-10), 123.7 (C-1′), 130.7(C-2′，6′), 116.3(C-3′，5′), 160.5 (C-4′)。以上数据与文献[10]一致，鉴定为山柰酚。

化合物4：黄色粉末。ESI-MSm/z: 487[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.86 (2H, d,J=2.1 Hz, H-2′), 7.60 (2H, dd,J=8.8, 2.1 Hz, H-6′), 6.88 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5′), 6.42 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.22 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 5.18 (1H, d,J=2.0 Hz, H-1″), 3.87～3.48 (为单糖上的氢);13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 158.8 (C-2), 135.8 (C-3), 179.6 (C-4), 163.0 (C-5), 99.9 (C-6), 166.1 (C-7), 94.7 (C-8), 158.5 (C-9), 105.7 (C-10), 122.9 (C-1′), 117.8 (C-2′), 145.8 (C-3′), 149.9 (C-4′), 116.1 (C-5′), 123.0 (C-6′), 105.4 (C-1″), 73.2 (C-2″), 75.1 (C-3″), 70.0 (C-4″), 77.2 (C-5″), 62.0 (C-6″)。以上数据与文献[11]一致，鉴定为金丝桃苷。

化合物5：黄棕色粉末, ESI-MSm/z: 541[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 8.00 (1H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (1H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.30 (1H, s, H-8), 6.13 (1H, s, H-6), 5.29 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″), 4.05 (2H, m, H-1‴), 3.83 (1H, d,J=9.6 Hz, H-5″), 3.62 (1H, m, H-4″), 3.53 (1H, m, H-2″), 3.36 (1H, m, H-3″), 1.49 (2H, m, H-2‴), 1.25 (2H, m, H-3‴), 0.82 (3H, t,J=7.3 Hz, H-4‴);13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 159.0 (C-2), 135.2 (C-3), 179.0 (C-4), 162.7 (C-5), 99.9 (C-6), 165.8 (C-7), 94.8 (C-8), 158.2 (C-9), 105.5 (C-10), 122.3 (C-1′), 132.2 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.5 (C-4′), 104.5 (Glc-C-1″), 75.4 (Glc-C-2″), 77.0 (Glc-C-3″), 72.6 (Glc-C-4″), 77.3 (Glc-C-5″), 170.1 (Glc-C-6″), 66.2 (butyl-C-1‴), 31.5 (butyl-C-2‴), 19.9 (butyl-C-3‴), 13.9 (butyl-C-4‴)。以上数据与文献[12]一致，鉴定为山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸丁酯。

化合物6：白色蜡状物。ESI-MSm/z: 699[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 5.39～5.26 (6H, m, H-9′, 10′, 12′, 13′, 15′, 16′), 4.88 (1H, m, H-1‴), 4.39 (1H, brs, H-1″), 4.08 (2H, m, H-3), 3.96 (1H, m, H-2), 3.82～3.53 (12H, m), 3.50 (2H, m, H-3″, 5″), 2.77 (4H, brs, H-11′, 14′), 2.29 (2H, t,J=7.6 Hz, H-2′), 2.02 (4H, m, H-8′, 17′), 1.50 (2H, t,J=7.6 Hz, H-3′), 1.33～1.20 (8H, m, H-4′-7′), 0.92 (3H, t,J=7.6 Hz, H-18′);13C-NMR (151 MHz, DMSO-d6)δ: 70.3 (C-1), 68.0 (C-2), 65.4 (C-3), 172.9 (C-1′), 33.3 (C-2′), 24.3 (C-3′), 28.4 (C-4′), 28.4 (C-5′), 28.9 (C-6′), 28.5 (C-7′), 26.5 (C-8′), 129.8 (C-9′), 126.9 (C-10′), 25.0 (C-11′), 127.8 (C-12′), 127.8 (C-13′), 25.1 (C-14′), 127.4 (C-15′), 131.4 (C-16′), 19.9 (C-17′), 14.0 (C-18′), 103.9 (C-1″), 69.5 (C-2″), 71.1 (C-3″), 68.3 (C-4″), 72.9 (C-5″), 66.4 (C-6″), 99.3 (C-1‴), 69.7 (C-2‴), 70.4 (C-3‴), 68.7 (C-4‴), 72.8 (C-5‴), 60.4 (C-6‴)。以上数据与文献[13]一致，鉴定为3-α-亚麻酸甘油酯1-O-[α-D-半乳糖基-(1→6)-O-β-D-半乳糖苷]。

化合物7：黄白色无定型粉末。ESI-MSm/z: 347[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.00 (1H, d,J=8.3 Hz, H-6), 6.79 (1H, d,J=1.7 Hz, H-3), 6.66 (1H, dd,J=8.2, 1.7 Hz, H-5), 5.93 (1H, ddt,J=16.9, 10.1, 6.8 Hz, H-8), 5.06 (1H, m, H-9b), 5.02 (1H, d,J=10.0 Hz, H-9a), 4.83 (1H, d,J=7.4 Hz, H-1′α), 3.74 (3H, s, OCH3), 3.64 (1H, d,J=11.6 Hz, H-6′b), 3.45 (1H, d,J=9.7 Hz, H-6′a), 3.17 (2H, brs, H-7);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 144.9 (C-1), 148.9 (C-2), 115.6 (C-3), 133.5 (C-4), 120.4 (C-5), 113.0 (C-6), 39.1 (C-7), 138.0 (C-8), 115.6 (C-9), 55.7 (OCH3), 100.3 (C-1′), 73.3 (C-2′), 77.0 (C-3′), 69.7 (C-4′), 76.9 (C-5′), 60.7 (C-6′)。以上数据与文献[14]一致，鉴定为丁香酚-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8：无色粉末。ESI-MSm/z: 509[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz, C5D5N-d5)δ: 5.51 (1H, brs, H-12), 4.59 (1H, dd,J=11.9, 4.8 Hz, H-2), 4.14 (1H, d,J=10.6 Hz, H-23a), 3.73 (1H, d,J=10.6 Hz, H-23b), 2.82 (1H, dd,J=11.7, 4.8 Hz, H-18), 1.35 (3H, s, H-30), 1.22 (3H, s, H-27), 1.17 (3H, s, H-26), 1.08 (3H, s, H-29), 0.97 (3H, s, H-25), 0.91 (3H, s, H-24);13C-NMR (125 MHz, C5D5N-d5)δ: 46.0 (C-1), 72.6 (C-2), 213.2 (C-3), 52.3 (C-4), 47.2 (C-5), 17.8 (C-6), 33.0 (C-7), 39.5 (C-8), 46.7 (C-9), 39.5 (C-10), 23.6 (C-11), 123.1 (C-12), 144.0 (C-13), 42.1 (C-14), 28.2 (C-15), 25.6 (C-16), 43.7 (C-17), 42.3 (C-18), 45.0 (C-19), 30.8 (C-20), 34.1 (C-21), 32.7 (C-22), 65.6 (C-23), 13.7 (C-24), 18.0 (C-25), 15.5 (C-26), 25.9 (C-27), 180.1 (C-28), 33.2 (C-29), 23.6 (C-30)。以上数据与文献[15]一致，鉴定为青钱柳酸B。

化合物9：黄色无定型粉末。ESI-MSm/z: 529[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz, C5D5N-d5)δ: 7.43 (1H, d,J=8.3 Hz, H-6), 7.35 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2), 7.26 (1H, dd,J=8.3, 2.1 Hz, H-5), 7.02 (1H, d,J=1.6 Hz, H-6′), 6.92 (1H, d,J=1.6 Hz, H-2′), 6.09 (1H, d,J=6.5 Hz, H-7), 6.06 (1H, d,J=1.7 Hz, H-1″), 3.93 (2H, t,J=6.4 Hz, H-9′), 3.84 (3H, s, OCH3), 3.57 (3H, s, OCH3), 2.87 (2H, dd,J=8.7, 6.8 Hz, H2-7′), 2.08 (2H, m, H2-8′), 1.59 (3H, t,J=6.1 Hz, H3-6″);13C-NMR (125 MHz, C5D5N-d5)δ: 138.1 (C-1), 111.3 (C-2), 147.3 (C-3), 151.4 (C-4), 119.0 (C-5, C-6), 88.0 (C-7), 55.2 (C-8), 64.6 (C-9), 129.9 (C-1′), 113.8 (C-2′), 144.8 (C-3′), 146.4 (C-4′), 136.4 (C-5′), 117.6 (C-6′), 32.7 (C-7′), 36.1 (C-8′), 61.6 (C-9′), 101.6 (C-1″), 72.7 (C-2″), 72.1 (C-3″), 73.9 (C-4″), 71.1 (C-5″), 18.6 (C-6″), 56.0 (OCH3), 56.4 (OCH3)。以上数据与文献[16]一致，鉴定为icariside E4。

化合物10：黄色无定型粉末。ESI-MSm/z: 515[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 6.78 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.73 (1H, d,J=7.9 Hz, H-6′), 6.60 (1H, s, H-8), 6.47 (1H, dd,J=7.9, 2.0 Hz, H-5′), 6.09 (1H, s, H-5), 5.24 (1H, s, H-1), 3.93 (1H, d,J=7.5 Hz, H-1″), 3.71 (6H, s, OCH3-6, OCH3-3′), 2.72 (1H, d,J=8.3 Hz, H-4α), 2.50 (1H, s, H-4β), 1.87 (1H, s, H-2), 1.70 (1H, t,J=10.7 Hz, H-3);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 45.6 (C-1), 44.0 (C-2), 67.3 (C-2a), 37.6 (C-3), 62.6 (C-3a), 32.5 (C-4), 127.0 (C-4a), 111.7 (C-5), 145.4 (C-6), 144.5 (C-7), 116.2 (C-8), 132.5 (C-8a), 136.8 (C-1′), 113.8 (C-2′), 147.1 (C-3′), 144.0 (C-4′), 115.4 (C-5′), 121.0 (C-6′), 104.4 (C-1″), 73.3 (C-2″), 76.6 (C-3″), 69.5 (C-4″), 65.5 (C-5″), 55.4 (OCH3-6), 55.6 (OCH3-3′)。以上数据与文献[3]一致，鉴定为(-)-isolariciresinol-2a-O-β-D-xylopyranoside。

化合物11：白色无定型粉末。ESI-MSm/z: 337[M+Na]+。1H-NMR (CD3OD, 500 MHz)δ: 6.94 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5″), 6.78 (1H, brs, H-2″), 6.76 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6″), 6.67 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.51 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6′), 5.69 (1H, brs, H-2′), 3.11～3.06 (1H, m, H-3), 2.69～2.65 (1H, m, H-7a), 2.59～2.50 (2H, m, H-1a, H-7b), 2.46～2.42 (1H, m, H-1b), 1.71～1.66 (1H, m, H-6a), 1.54～1.48 (1H, m, H-6b), 1.42～1.39 (2H, m, H-2), 1.25～1.17 (2H, m, H-4a, H-5a), 1.07～1.02 (1H, m, H-5b), 0.93～0.88 (1H, m, H-4b);13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 29.5 (C-1), 37.9 (C-2), 72.8 (C-3), 39.5 (C-4), 23.7 (C-5), 31.6 (C-6), 36.3 (C-7), 135.2 (C-1′), 114.4 (C-2′), 149.7 (C-3′), 144.3 (C-4′), 117.0 (C-5′), 123.0 (C-6′), 142.4 (C-1″), 120.2 (C-2″), 151.1 (C-3″), 143.2 (C-4″), 125.2 (C-5″), 122.5 (C-6″)。以上数据与文献[17]一致，鉴定为(3S)-3′，4″-epoxy-1-(4′-hydroxylphenyl)-7-(3″-hydroxylphenyl) heptane-3-hydroxy。