原子吸收法测定AD钙奶中钙含量的方法学验证*
2022-12-13李侠史静晓李艳婷郭伟伟郭霄飞徐莉娜
李侠 史静晓 李艳婷 郭伟伟 郭霄飞 徐莉娜***
1（山西省太原市农业技术推广服务中心，山西太原 030030）
2（山西农业大学，山西太原 030031）
3（山西省晋中市综合检验检测中心，山西晋中 030600）
AD 钙奶是在牛奶中添加了维生素A 和维生素D，能够促进机体对钙的吸收。钙能够维持神经肌肉的正常兴奋性，促进神经末梢分泌乙酞胆碱，也能改善细胞膜的通透性，增加毛细血管的致密性；与体内80多种酶的活性有关，具有促进器官发育和智力提高、改善味觉、促进伤口愈合以及提高免疫功能等作用。本试验采用GB 5009.92—2016《食品安全国家标准 食品中钙的测定》中火焰原子吸收光谱法测定AD 钙奶中钙的含量，并通过线性考察、重复性、精密度、加标回收等试验进行方法学验证。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
PinAAcle 900H 原子吸收光谱仪：PerkinElmer；AUW120D 分析天平,岛津菲律宾工厂；SH-II-5B 电热板,黄骅菲斯福实验仪器有限公司。
1.2 试剂
钙标准物质、硝酸、磷酸二氢氨、氧化镧、76%高氯酸＋67%硝酸（1＋1），所用试剂均为分析纯；实验用水为去离子水。
1.3 方法
按照GB 5009.92—2016《食品安全国家标准食品中钙的测定》第一法火焰原子吸收光谱法进行检测。
1.3.1 钙标准工作溶液制备
吸取1.00 mL标准储备液（10 g/L），置于100 mL量瓶中，用2%HNO3溶液定容至刻度，摇匀，得标准中间液（100 mg/L），再分别吸取标准液0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.00 mL、6.00 mL置于100 mL 容量瓶中，另在各容量瓶里加入5 mL镧溶液（20 g/L），用2% HNO3 溶液定容至刻度，混匀，得到质量浓度分别为0.0 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、6.0 mg/L 的标准工作液。
1.3.2 线性考察
将钙标准系列溶液按照质量浓度由低到高的顺序分别导入火焰原子雾化器，测定其吸光度值，以质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制作标准曲线。
1.3.3 原子吸收仪工作条件
原子吸收仪工作条件见表1。
表1 原子吸收仪的工作条件
1.3.4 供试品、质控样品及空白溶液制备及检测
1.3.4.1 试样处理
准确称取已混合均匀的待测试样0.5 mL，置于25 mL 烧杯中，加硝酸15 mL，样品加盖静置过夜，置于电热板按程序消解(100 ℃升温,130 ℃消解)，消解完全后，180 ℃赶酸至1 mL 左右。取下放冷，用水转移至25 mL 纳氏比色管中，稀释至刻度，并在稀释液中加入一定体积的镧溶液（20 g/L），使其在最终稀释液中的质量浓度为1 g/L，混匀，即得待测溶液，也可根据实际测定需要再稀释。同样条件作试剂空白试验。
1.3.4.2 测定
在与测定标准溶液相同的试验条件下，将试样溶液导入火焰原子雾化器，测定吸光值，与标准系列比较而定量。
2 方法学验证
2.1 线性考察
钙标准溶液的标准曲线见图1。
图1 钙标准曲线图
由图1 可知，在钙标准溶液质量浓度0.0 mg/L～6.0 mg/L 范围内，钙溶液吸光度值与质量浓度呈良好的线性关系，线性方程为Y=0.060 21X+0.001 96（R2=0.999 81）。
2.2 重复性试验
取样品6 份平行处理，测定，计算样品含量及RSD值，测定结果见表2。由表2可知，重复性试验的RSD值为8.58%，符合方法精密度＜10%的要求。
表2 重复性试验结果
2.3 精密度试验
取样品1 份，测定6 次，计算样品含量及RSD值，测定结果见表3。由表3 可知，重复样品间结果误差小，相对标准偏差0.36%，说明方法精密度较好。
表3 精密度试验结果
2.4 回收率试验
按照试验设计进行加标回收试验，试验按高、中、低3 水平进行，每个浓度水平平行制备3 份样品，测定含量并计算回收率和相对标准偏差，获试验结果见表4。由表4 可知，3 种水平加标回收率范围92.42%～111.74%，RSD 范围1.55%～1.69%，符合GB/T 27417—2017《合格评定化学分析化学分析方法确认和验证指南》中回收率和RSD的要求。
表4 样品回收率试验结果
2.5 检出限
平行制备试样空白20份，测定吸光度值，计算空白值标准偏差（Sb），检出限公式为：
CL=3Sb/b，
式中：CL—方法检出限；
Sb—空白值标准偏差；
b—方法校准曲线的斜率。
测定结果表明，若取样量为0.5 g，定容体积10 mL，则最小检出限为0.45 mg/kg，方法定量限为1.42 mg/kg，符合GB 5009.92—2016 中检出限0.5 mg/kg，定量限1.5 mg/kg的要求。
3 结论
经验证，在钙标准溶液质量浓度0.0 mg/L～6.0 mg/L 范围内线性良好，线性方程为Y=0.060 21X+0.001 96（R2=0.999 81），重复性试验RSD 为8.58%，精密度试验RSD为0.36%，3 种水平加标回收率范围92.42%～111.74%，RSD范围1.55%～1.69%，该方法线性和范围、检出限、定量限、回收率、精密度以及重复性的试验结果均满足GB/T 27417—2017 和GB 5009.92—2016 的相关要求。该方法线性良好、易操作、重现性良好、测量结果准确，满足实验室检测需求。
