溶血三项 网织红细胞及血清总胆红素联合检测对新生儿溶血病的诊断价值

夏帮坤 张杏杏 刘婷婷

作者单位： 236000 安徽阜阳 阜阳市人民医院输血科

新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)指由于母婴血型不合，母体产生的血型抗体通过胎盘与胎儿体内的血型抗原结合而发生的免疫性溶血病变，若不及时治疗，可能会诱发新生儿胆汁粘稠综合征等疾病，严重威胁患儿的生命健康[1-2]。目前，临床常通过溶血三项对HDN进行诊断，临床参考价值较高。研究[3-5]显示，因溶血三项易受血液抽取时间、存放条件等因素的影响，通过单一检测溶血三项诊断HDN存在一定的缺陷。网织红细胞、血清总胆红素水平为临床评估新生儿黄疸、进行性贫血的常用指标，有研究[6-7]发现，网织红细胞、血清总胆红素对HDN的诊断具有一定的积极作用。本文以136例疑似HDN的新生儿为研究对象，探讨溶血三项、网织红细胞及血清总胆红素三者联合检测对HDN的诊断价值，旨为临床探寻便捷、有效的HDN诊断方法提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析阜阳市人民医院2020年2月至2021年12月收治的136例疑似HDN的新生儿患者的临床资料，其中男患儿74例，女患儿62例；日龄2 h～20 d，平均(6.91±1.85)d；血型：A型61例，B型44例，O型31例；以临床诊断为标准，分为HDN组(102例)和非HDN组(34例)，HDN组：男患儿52例，女患儿50例；日龄2 h～18 d，平均(6.83±1.62)d；非HDN组：男患儿22例，女患儿12例；日龄2 h～20 d，平均(7.16±1.94)d；两组基线资料对比，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：HDN患儿符合临床诊断标准[9]：依据溶血三项检测结果并结合临床黄疸、贫血症状确诊；男患儿日龄<28 d；母亲血型均为O型RhD阳性，且新生儿血型与母亲血型不合；单胎妊娠；患儿家属对本研究知情同意。排除标准：颅内出血、头颅血肿史者；先天性胆/肝系统疾病；合并严重感染或重要脏器功能不全者。

1.2 方法 比较两组网织红细胞、血清总胆红素水平；绘制溶血三项、网织红细胞及血清总胆红素单检及三者联合检测诊断HDN的受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线，比较上述各指标的曲线下面积(area under the curve，AUC)。

1.2.1 溶血三项检测 抽取所有研究对象静脉血2 mL，采用酸放散法并使用抗人球蛋白检测卡、人ABO血型正/反定型及Rh(D)血型检测卡、专用检测卡离心机及37℃试剂卡孵育器依次行直抗试验、游离试验及释放试验，试剂盒均购于长春博迅生物技术公司；溶血三项判定HDN[8]：溶血三项检测结果均为阴性[直抗试验(-)、游离试验(-)、释放试验(-)],可判定为HDN；仅直抗或游离试验单项阳性，可判定为疑似HDN；释放试验阳性或任何两项或两项以上阳性，可判定为非HDN。

1.2.2 网织红细胞及总胆红素检测 采用全自动血液分析仪(型号：迈瑞bc-6900，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)检测网织红细胞计数。采用全自动生化分析仪(型号：XC8001，四川新健康成生物股份有限公司)检测血清总胆红素水平(重氮法)。

2 结果

2.1 溶血三项检测与临床诊断HDN结果比较 依据溶血三项检测结果，诊断HDN患儿103例，非HDN患儿33例。溶血三项诊断HDN的灵敏度、特异度分别为90.20%(92/102)、67.65%(23/34)。见表1、2。

表1 溶血三项检测结果

表2 溶血三项检测与临床确诊HDN结果比较

2.2 两组患儿网织红细胞、血清总胆红素水平比较 HDN组网织红细胞、血清总胆红素水平均高于非HDN组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组患儿网织红细胞、血清总胆红素水平比较

2.3 溶血三项、网织红细胞及血清总胆红素单检及三者联合检测对HDN的诊断价值 绘制溶血三项、网织红细胞及血清总胆红素联合检测诊断HDN的ROC曲线[病理诊断为HDN以1表示，病理诊断为非HDN以0表示；溶血三项检测结果为真阳(病理诊断为HDN，溶血三项检测结果也为HDN)用1表示，真阴用0表示(病理诊断为非HDN，溶血三项检测结果也为非HDN)，假阳用0表示(病理诊断为HDN，而溶血三项检测结果为非HDN)，假阴(病理诊断为非HDN，而溶血三项检测结果为HDN)用1表示]，结果显示，网织红细胞与血清总胆红素对HDN早期诊断的最佳截断点分别为5.06 %、200.43 μmol/L，溶血三项、网织红细胞与血清总胆红素三者联合的灵敏度、特异度及AUC分别为96.08%、88.24%和0.937。见图1、表4。

图1 溶血三项、网织红细胞与血清总胆红素联合检测诊断HDN的ROC

表4 溶血三项、网织红细胞及血清总胆红素联合对HDN诊断的ROC分析

3 讨论

HDN是致使新生儿病理性黄疸常见病因，病因主要为妊娠或分娩过程中母亲免疫球蛋白G抗体由胎盘进入胎儿体内而引发机体免疫反应，致使红细胞生理结构被破坏[10-12]。临床多依赖溶血三项试验结果诊断HDN，但单一依据溶血三项诊断的准确度有待提高[13]。研究[14]发现，网织红细胞、血清总胆红素均与HDN的发生发展有关。本文探讨溶血三项联合网织红细胞、血清总胆红素检测对HDN的早期诊断价值，旨为提高临床早期诊断HDN的思路及提高诊断准确性提供参考依据。

本研究显示，溶血三项诊断HDN的灵敏度、特异度分别为90.20%、67.65%，提示溶血三项检测结果中存在假阴性情况，有漏诊风险，与江蓝玉等[15]研究结果相近，分析原因可能是由于血液抽取时间、抽血后样本保存时间、检测操作等因素的影响[16]。本研究发现，HDN组网织红细胞、血清总胆红素水平均高于非HDN组(P<0.05)，表明HDN患儿网织红细胞、血清总胆红素水平明显偏高。分析原因：网织红细胞为一种不成熟的细胞，其水平可直接反映骨髓红细胞的生成能力，且还与HDN的发生具有一定的相关性[17]。HDN早期症状多表现为黄疸，新生儿机体中血清总胆红素可明显升高；同时新生儿出生后由于自身清除胆红素的能力较低，致使血液中胆红素未能得到及时清除而聚集，近而致使HDN血清总胆红素水平异常偏高[18-19]。ROC分析显示，网织红细胞与血清总胆红素对HDN早期诊断的最佳截断点分别为5.06%、200.43 μmol/L，溶血三项、网织红细胞与血清总胆红素三者联合检测的灵敏度、特异度及AUC分别为96.08%、88.24%和0.937，提示溶血三项、网织红细胞及血清总胆红素联合检测诊断HDN有较高的诊断价值。此可能是溶血三项主要包括直抗试验、游离试验及释放试验，其中释放试验为三项中较为重要的，由于其采用间接的检测方法具有较高的准确度，阳性即可诊断[20]。网织红细胞为血液中新生红细胞的标志，能够反映骨髓红系的生成状态，同时也是新生红细胞的标志[21]。在新生儿期过高的血清总胆红素水平可致使胆红素在体内蓄积，并透过血脑屏障沉积于神经系统中，其毒性常会致使基底神经节、海马、及下丘脑神经核坏死，且可对中枢神经系统的髓鞘造成一定的损伤，同时还可能严重影响神经元的正常能量代谢[22]。

综上所述，溶血三项联合网织红细胞与血清总胆红素对HDN早期诊断效能较高，可作为临床HDN早期诊断的重要参考指标，建议在临床中对疑似HDN患儿进行溶血三项检测的同时，还应加强对网织红细胞、血清总胆红素，以提高临床诊断的准确性。由于本研究样本量不大，对结果可能有一定的偏倚，拟在后续的研究中扩大样本量，对本结果进行近一步的验证。