定时人工授精技术在湖羊繁殖中的应用

褚玲娜，韩 强，蒋晓莉，王争光

(1.长兴县畜牧兽医站，浙江 长兴 313100； 2.浙江大学动物科学学院)

湖羊原产于太湖流域的浙江、江苏等地，终年舍饲，是江南唯一的优良地方绵羊品种。湖羊性成熟早、四季发情，二年三胎，繁殖力强、泌乳性能高，早期生长快，适应性强，耐受湿热高温，也适应各地不同气候，因此湖羊从太湖流域已经扩展到全国各地饲养。目前我国湖羊规模化养殖处于快速发展阶段，大型规模化羊场逐步发展，日趋成熟。但母羊发情不集中，非繁殖季节发情率低、常规人工授精受胎率低等已成为规模化产业发展的制约。为此，羊定时人工授精技术的研究与应用已列入国家重点研发计划。定时人工授精技术包括同期发情技术和人工授精技术，该技术用在生产中，可免去试情这一环节，在撤栓后的固定时间内进行输精，提高了配种效率，加快了羊群繁育速度，为种质资源的规模化生产发挥重要作用。本文综述了国内湖羊定时人工授精技术的应用现状，为湖羊繁殖技术的应用研究提供参考依据。

1 定时人工授精技术

定时人工授精技术(TAI)是指采用一些外源性生殖激素来调控母羊的发情周期,使母畜的发情具有可控性和同步化，在预定时间、使母羊集中发情并排卵，然后进行人工授精[1]。定时输精技术包括同期发情技术和人工授精技术，该技术大大提高了优秀种公羊的利用率和母羊的受胎率，加速了羊群的改良进程，同时减少了疾病的传播。

2 同期发情

2.1同期发情原理 下丘脑-垂体-卵巢轴是一个完整而协调的神经内分泌体系，在神经内分泌和生殖激素的共同作用下，促使母畜发情和排卵。在自然状态下，初情期后或产后母羊的发情活动呈现周期性，卵巢黄体的形成与退化反复出现。在绵羊的发情环节中有两种途径可以实现同期发情。一是对一群母羊使用孕酮等外源激素，母羊受到高浓度孕酮对卵巢功能的抑制作用，卵泡发育停止，并处于一个类似的人工黄体期。当统一解除孕酮的抑制作用后，其卵泡活动恢复正常，形成优势卵泡。此时生长卵泡会集中分泌大量的雌激素，集中出现发情，最终成熟而排卵。二是利用前列腺素及其类似物,作用于黄体，待其溶解消退后，孕酮水平也随之降低，解除对中枢神经系统的抑制，使得下丘脑GnRH得以释放，卵泡发育恢复正常，形成优势卵泡并排卵，实现同期[2-3]。

2.2同期发情应用 我国绵羊同期发情试验开始于20世纪80年代，先后采用了前列腺素(PG)注射、孕酮埋植以及其他中草药催情进行同期发情试验{4}。目前,同期发情采用最多的方法是孕酮阴道栓法(CIDR)，此外还有注射前列腺素(PG)法、耳皮下埋植法、注射孕酮法、口服孕酮法等。据统计，国内外羊同期发情处理方法中，阴道栓缓释法所占的比例在80%以上[5]。

3 操作要点

3.1动物及物品准备

3.1.1湖羊选择 通常选择7月龄以上的后备母羊、断奶后未配种的空怀母羊、分娩后40 d以上的哺乳母羊以及长期不发情的母羊作为同期发情处理备用母羊。采集体质健康、符合种用标准、年龄在2-5岁的种公羊精液或引进外场优良种公羊精液作为人工授精用精液[6]。

3.1.2物品准备 孕酮激素(P4)、马绒毛膜促性腺激素(eCG)、氯前列醇钠注射液(PG)、一次性导管式阴道栓；止血钳、小喷壶、生理盐水、新洁尔灭、润滑剂等。人工授精所需设备：羊假阴道、羊输精枪、羊内窥镜、羊精液稀释液、专用恒温加热器、电子显微镜等。

3.2主要操作流程

3.2.1放栓 用喷壶将含0.05%新洁尔灭的生理盐水配成的消毒剂喷洒在母羊外阴部，之后用清洁纸巾擦干；逐支取出一次性导管式阴道栓，用止血钳夹住外导管的后端，然后在外导管的前端喷洒少量润滑剂。左手分开阴门，右手持止血钳将导管插入阴道，插入深度为外导管后端比阴门深1～2 cm, 左手拇指将推杆推到底，然后右手持止血钳将外导管和推杆一起抽出。放栓后，连续3 d在母羊采食时巡查是否脱栓，正常情况下有2%～3%的脱栓率。对脱栓母羊进行补放。

3.2.2撤栓 放栓当天计为0 d, 在放栓后第11 d上午注射eCG和PG，可将两种激素按比例混合后使用连续注射器进行颈部肌肉注射。在注射eCG和PG 24～30 h即放栓后的第12 d下午撤栓。

3.2.3采精 发情母羊集中在10∶00进行配种，采精前对假阴道、扩张器、输精枪枪头、量杯等器械进行酒精消毒, 水浴锅中蒸馏水恒温至30～31.5 ℃。采精时在种公羊爬跨母羊过程中，采精员戴一次性橡胶防护手套右手持假阴道、左手握阴茎先释放分泌物，然后将阴茎引入假阴道，待公羊前冲即表明射精。公羊射精完毕，取下假阴道，准备验精。1只种公羊1次取精量约为3 mL, 1天采集1次，可配母羊10～15只[7]。

精子收集后观察颜色、辨别气味，正常为乳白色，无脓、无腐败气味，肉眼能看到云雾状，可通过电子显微镜查看精子活力和密度。

3.2.4输精 在撤栓后48～52 h (即放栓后的第14 d下午)和60～64 h(即放栓后的第15 d早上) 用鲜精进行两次常规子宫颈输精，每次输精剂量为0.2 mL,前进运动精子数不少于5000万个。

4 统计指标

4.1不返情率 不返情率是指TAI后21 d内未出现发情的母羊数占试验母羊数的百分率。母羊配种后第14～21 d，每天用带试情布的公羊试情两次，将返情母羊挑出。记录可追踪到的母羊的不返情情况，并计算不返情率。

4.2受胎率 配种后50～60 d, 用便携式B型超声波仪经腹外壁进行妊娠诊断，统计受胎母羊数，并计算受胎率。TAI的受胎率是指TAI后50～60 d, 确认妊娠的母羊数占试验母羊数的百分率。

5 应用现状

5.1二次PG注射法 用二次PG注射法诱导本地绵羊同期发情,结果发现同期发情效果较为理想,达到82.97%[8]。桑润滋等[9]研究发现，河北细毛羊在第1次PG处理后，经过24～36 h,羊同期发情率为44.8%～75%；第2次PG处理后，羊同期发情率为86.2%～92.5%。

5.2P4-PG-eCG法 张长兴等[10]为了评估以P4-PG-eCG为基础的湖羊定时人工授精技术在规模化羊场中的应用效果。试验期TAI的受胎率达到82.0%(3874/4724)，累计TAI受胎母羊数和TAI后出现第一次返情并输精而受胎的母羊数，总受胎率达到91.7%(4332/4724)。季节因素与21 d不返情率相互独立(P>0.05)，季节因素对返情率无显著影响，而与TAI受胎率(P<0.01)和总受胎率(P<0.01)存在极显著的关联性，即发情季节TAI受胎率及总受胎率均高于乏情季节，分别为85.6%vs81.4%和94.4%vs91.2%。

5.3CIDR+孕马血清促性腺激素(PMSG)+PG法 采用CIDR+PG+PMSG法对湖羊和小尾寒做同期发情处理,研究其同期性和人工授精效果。在同期发情处理并撤栓后,湖羊组和小尾寒羊组的发情率分别为88%和87%[11]。

5.4输精技术 定时输精技术可有效提高优良种羊的利用率，同时提高母羊的繁殖效力。对发情的母羊分别采用不同的输精方法及输精时间，效果最好的是采用子宫角输精法，最佳输精时间为撤栓处理后的48 h[12]。

本文综述了湖羊定时人工授精技术的基本概念、操作要点及应用效果等，湖羊的同期发情研究主要是针对激素的种类和处理方法，一般不单独使用孕酮阴道栓，常常配合溶解黄体、促进卵泡发育及排卵激素来提高同期效果。同期发情的辅助激素包括孕酮激素、PMSG、PG、FSH、GnRH等，其中PMSG使用率最高。阴道栓和二次PG法的发情效果均好于一次PG法，阴道栓中的进口硅胶栓要好于国产硅胶栓和海绵栓。考虑到成本和发情效果，同期发情处理方法中CIDR+PMSG和二次PG较好，且较稳定[13]。定时人工授精技术，最佳的输精方式是子宫角输精，但是操作繁琐,成本高，易对子宫角造成损伤，规模化羊场普遍使用的子宫颈口输精，易操作、效率高。无论是子宫颈口输精还是子宫角输精，使用鲜精输精的受胎率都很高，最佳输精时间范围为发情后的48 h内，建议隔8 h复配1次。根据全国畜禽遗传资源改良计划(2021-2025)的要求,在规模羊场积极推广定时人工授精技术等繁殖技术，有利于推动湖羊种业自主创新和技术进步，提高遗传改良效果，助推湖羊产业向高效化、数字化、良种化方向发展。