紫外分光光度法测定凝胶中葡萄糖酸氯己定含量

2022-12-09杨素珍陈玉荣

食品与药品 2022年6期

苏淮，禹柳，杨素珍，陈玉荣，张辉

（山东福瑞达生物股份有限公司，山东济南 250101）

氯己定（也称为洗必泰）属胍类消毒防腐剂，其中醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定因其良好的溶解性、广谱的抑菌性能，在药品中常作为防腐剂使用，对革兰阴性菌和革兰阳性菌都有效，用于滴眼剂、凝胶剂等剂型的防腐，使产品保持良好的微生物限度水平[1-3]。

葡萄糖酸氯己定的含量测定方法，目前在中国药典（2020年版）、胍类消毒剂卫生要求（GB/T 26367-2020）等国家标准中均有收载，如紫外分光光度法、滴定法、高效液相色谱法等，但在凝胶剂型中，由于增稠剂的存在，对葡萄糖酸氯己定的含量测定存在一定影响[4-5]。本研究采用紫外分光光度法，消除了增稠剂的影响，准确测定了葡萄糖酸氯己定的含量，具有经济、准确的优点。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-610S紫外/可见光分光度计（上海元析仪器有限公司）；Agilent 8454紫外/可见光分光度计（安捷伦科技中国有限公司）；ME204电子天平[梅特勒托利多仪器（上海）有限公司]；KQ-500E超声波仪（昆山市超声仪器有限公司）；LAB DANCER S000旋涡混合器（德国IKA）；DHG-9023烘箱（广东泰宏君科学仪器股份有限公司）。

1.2 试药

醋酸氯己定对照品（中国食品药品检定研究院，纯度：96.9 %，批号：1TN6-YNOQ）；葡萄糖酸氯己定凝胶（自制，浓度：0.5 %）；乙醇（国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20201222）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20190724）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备取醋酸氯己定对照品约10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，振摇均匀，备用。

2.1.2 供试品溶液制备取凝胶样品4份，每份约2 g（含葡萄糖酸氯己定约10 mg），精密称定，分别置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液至刻度，分别按以下方式处理：（1）室温2800 r/min振摇10 min，得溶液1；（2）常温超声（40 kHz）提取30 min，得溶液2；（3）40 ℃水浴加热60 min，得溶液3；（4）室温，2800 r/min 振摇3次，每次10 min，放置过夜（约16 h），得溶液4。4种溶液分别精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，分别得供试品溶液1～4，备用。

2.1.3 空白辅料溶液制备按凝胶处方制备不含葡萄糖酸氯己定的空白凝胶，取约2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液稀至刻度，按2.1.2项下方法处理。精密量取处理后溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得空白辅料溶液1～4。

2.2 葡萄糖酸氯己定含量测定

精密称取样品2 g（相当于醋酸氯己定对照品10 mg），置100 ml量瓶中，加入1.5 mol/L的醋酸溶液溶解并稀释至刻度，按2.1.2项下方法（1）处理，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，260 nm波长处测定吸光度。按下式计算样品中葡萄糖酸氯己定的含量。

式中，X为样品中葡萄糖酸氯己定的含量（g/kg），m为醋酸氯己定对照品的质量（mg），A1为醋酸氯己定对照品溶液的吸光度值，A2为供试品溶液的吸光度值，m0为供试品质量（g），1.4348为醋酸氯己定与葡萄糖酸氯己定的换算系数。

2.3 波长的选择

以醋酸-乙醇溶液为空白，取2.1项下的对照溶液、空白辅料溶液1及供试品溶液1，200～400 nm范围内扫描。对照溶液1及供试品溶液1在260 nm处有最大吸收峰，空白溶液1在260 nm处无吸收干扰。采用同样的方法重复扫描供试品溶液2～4，均可得出相同结论，因此确定260 nm为检测波长。

图1 紫外扫描光谱

2.4 线性关系考察

取醋酸氯己定对照品约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，摇匀，精密量取1，2，3，4，5 ml，分别置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。以乙醇为空白，在260 nm处测定吸光度。以对照品溶液的吸光度（A）对浓度（C）做标准曲线，线性方程为：A=0.03101C+0.09813（r=0.9998）。结果表明，醋酸氯己定在4～20 µg/ml范围时浓度与吸光度呈线性关系。

2.5 精密度试验

2.5.1 重复性取0.5 %葡萄糖酸氯己定凝胶，按2.1.2项下方法平行制备6份供试品溶液，分别测定。供试品溶液1，2，3，4的含量RSD分别为4.22 %，2.27 %，2.71 %，1.52 %。其中方法4的重复性最佳。

2.5.2 中间精密度在不同时间，由研究室另一名试验人员，按2.1.2项下供试品溶液4的处理方式，配制6份供试品溶液，使用不同厂家及型号的仪器进行检测。供试品溶液含量RSD值为0.90 %，表明方法中间精密度良好。

2.5.3 仪器精密度取2.1.1项下对照品溶液，平行测定6次，计算RSD。结果，6次测定平均吸光度为0.4101，RSD为0.47 %，表明仪器的精密度良好。

2.6 耐用性

2.6.1 稳定性取对照品溶液及供试品溶液，分别于配制后0，1，2，4，8 h，在260 nm处检测吸光度，结果表明对照品溶液及4种供试品溶液8 h内吸光度RSD值分别为1.79 %，1.14 %，1.22 %，0.81 %，0.95 %，表明溶液稳定性良好。

2.6.2 提取液浓度影响精密称取12份样品，每份2 g，分别置100 ml量瓶中，分为3组，每组4份，组1、组2、组3分别加1.45，1.50，1.55 mol/L醋酸溶液至刻度；每组4份样品分别按2.1.2项下4种方法处理后，分别精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，260 nm波长处测定吸光度，见表1。结果显示，提取液浓度改变对4种供试品溶液的含量检测数值影响不大。

表1 提取液浓度影响试验结果

2.7 回收率

按处方制备不含葡萄糖酸氯己定的空白凝胶。取空白凝胶9份，每份约2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，分别加入葡萄糖酸氯己定对照品溶液，使其终浓度达0.4 %，0.5 %，0.6 %，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，按2.1.2项下方法处理。精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别测定，结果见表2。由表2可见，采用方法4处理，葡萄糖酸氯己定回收率最佳。