丹参-檀香不同配比抗心肌缺血的作用

严慧婕 何金美

(广州中医药大学第三附属医院药剂科，广东 广州 510360)

心肌缺血是以心脏供氧供血不足，能量代谢异常所导致心脏无法正常工作的疾病状态，在中医学中属于“胸痹”的范畴[1]，病机为气机凝涩、血脉不畅。根据“通则不痛”“气行则血行，气滞则血瘀”的原则，治疗本病多选用活血、化瘀、行气之药，以行气促进活血、化瘀之功效，三者相互为用，气血双调，使行气活血、通络止痛的功效更为显著。丹参-檀香药对具有极大的抗心肌缺血损伤的潜力。广州中医药大学第三附属医院临床运用丹参-檀香药对治疗心肌缺血时，发现不同配比的丹参-檀香对心肌缺血患者的药效差异较大。结合临床使用的实际情况，本文采用胶囊的给药形式，以心肌缺血再灌注损伤大鼠的治疗效果为依据筛选丹参-檀香药对的最优配比。

1 材料与方法

1.1 仪器 酶标仪(美国伯腾仪器有限公司，型号：Elx800TSUVI)；SAR-1000型小动物呼吸机(上海玉研科学仪器有限公司)CBGT-48高速组织研磨机(常州德杜精密仪器有限公司)；XS-02型多功能高速粉碎机(上海兆申科技有限公司)。

1.2 试药 肌酸激酶(CK)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒以及丙二醛(MDA)试剂盒均购于南京建成生物工程研究所，批号分别为A032-1、A020-1、A001-1、A005-1、A003-1；生理盐水(上海百特医疗用品有限公司，国药准字H20013250)；注射用苯巴比妥钠(上海新亚药业有限公司,国药准字H31020501)；复方丹参滴丸(天津天士力制药集团股份有限公司,国药准字Z10950111)。

1.3 方法

1.3.1 药物的准备 (1)取30 g丹参，粉碎机粉碎，取过2号筛，未过3号筛的粉末备用。(2)取15 g檀香，粉碎机粉碎，取过2号筛，未过3号筛的粉末备用。

1.3.2 动物分组 取60只雌雄各半的SD 大鼠，体质量为(250±10) g，随机分为6组，每组 10 只，雌雄各半，分为假手术组、模型组、阳性对照组、丹参-檀香给药5 g∶5 g组(a组)、10 g∶5 g组(b组)、15 g∶5 g组(c组)。

1.3.3 模型的建立 大鼠腹腔注射0.1 mL苯巴比妥麻醉后，仰卧位固定好，将21 号聚乙烯针套插入声门，接呼吸机，参数设为潮气量 0.4～0.8 mL，吸呼比 1∶1～1∶1.2。胸大肌下面脱毛处理，之后沿着大鼠左侧胸大肌下缘做一斜向大鼠左上肢的斜行皮肤切口，先用线将切口处缝上，但不闭合皮肤切口，待操作完成后再闭合。用镊子钝性分离肌肉组织后用开胸器进行支撑，使心脏暴露，将心包剪开；以心大静脉作为标志，从其末端分叉点上方的1～2 mm、偏左 0.5～1 mm 处进针，从心脏的右侧出针，使静脉末端分叉点大概位于进针点和出针点的中间位置，结扎，可见心肌变紫，活动低下，缺血时间为 30 min。心电图ST 段抬高，说明心肌缺血状况出现；将结扎的活结拉起，松开后完成再灌注，当大鼠心电 ST 段波峰下降至原高度 50%左右时，提示再灌注损伤模型建立成功。在术中术后应保持适宜的温度，并将大鼠置于无菌环境中进行恢复。假手术组造模方法与手术组一致，但开胸之后只穿线不结扎[2-4]。

1.3.4 不同比例丹参-檀香粉末给药方案 造模前14 d，用生理盐水将混合粉末进行混悬，按照2 mL/100 g大鼠体质量灌胃给药，假手术组和模型组给予生理盐水，阳性对照组给予约8 μg/100 g的复方丹参滴丸，不同配比丹参-檀香组大鼠给药量见表1。在末次给药 1 h后，进行手术造模，选择造模成功且没有死亡的大鼠进行后续实验。

1.3.5 待测样品前处理 造模成功恢复血流灌注 1 h 后，大鼠腹主动脉采血静置2 h。颈椎脱臼处死大鼠，摘取心脏后，用锡纸包好冻存于-80 ℃冰箱中备用；冻存的心脏组织加入生理盐水[按照重量(g)∶体积(mL)=1∶9]，用干净的剪刀尽量剪碎组织，在低温下用组织FA25匀浆机( 上海洽姆仪器科技有限公司)匀浆心脏组织；以上制备的血清、心脏组织和心脏匀浆液，分别于4 ℃、3600 r·min-1，离心10 min，离心半径15 cm，分离血清，用5～50 μL移液枪,100～1000 μL移液枪[大龙兴创实验仪器(北京)有限公司]取血清至1.5 mL EP 管中，置-80 ℃冰箱保存，用于后续各项实验指标的测定。

1.3.6 心肌梗死面积测定 取出恢复再灌注 60 min 的各组大鼠心脏，用预冷的生理盐水将血冲洗干净，再用干净的滤纸吸去多余水分，于结扎线以下取左心室并均匀横切为 5 部分，进行氮蓝四唑(NBT)染色，切片采用多媒体彩色病例图文分析系统，以固定象距测量正常心肌及梗死心肌面积，计算心肌梗死区面积，心肌梗死率=梗死区面积/左心室总面积×100%。

1.4 观察指标 按照试剂盒说明步骤对血清中的CK和LDH，心肌组织中的MDA、GSH-Px和SOD的含量进行测定。

1.5 统计学方法 采用GraphPad Prism8.4.0软件进行数据分析和处理。计量资料以均数±标准差表示，经检验所有数据均符合正态分析，组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同比例丹参-檀香粉末对大鼠心肌梗死面积的影响 与假手术组相比，模型组的心肌梗死率显著升高(P<0.01)，说明造模成功。与模型组相比，阳性对照组和给药a、b和c组大鼠的心肌梗死率均显著下降(P<0.01)，其中给药组b、c心肌梗死率由小到大依次是c组0.05)。见图1。

2.2 不同比例丹参-檀香粉末对血清中CK和LDH含量的影响 模型组血清中的 CK 和 LDH 含量较假手术组显著升高，表明心肌细胞损伤严重，造模成功。除给药a组LDH的含量较模型组无差异外，给药组和阳性对照组均较模型组显著降低血清中CK和LDH的含量(P<0.01)；不同给药组大鼠血清中CK含量由小到大依次是b组0.05)。见图2。

2.3 不同比例丹参-檀香粉末对心脏组织中SOD、GSH-Px和MDA含量的影响 与假手术组相比，模型组心脏组织中的 SOD 和 GSH-Px含量显著下降(P<0.01)，MDA 含量显著升高(P<0.01)，说明造模成功。与模型组比较，阳性对照组SOD和GSH-Px含量显著升高(P<0.01)，各给药组的SOD和GSH-Px含量明显升高(P<0.05)；与模型组比较，阳性对照组的MDA含量显著降低(P<0.01)，各给药组的MDA含量明显降低(P<0.05)。各给药组大鼠心肌组织中SOD和GSH-Px含量随丹参量的增加而增加，MDA含量随丹参量的增加而减少，给药组两两之间CK、LDH和MDA含量差异无统计学意义(P>0.05)。见图3、图4。

综上，给药组治疗效果依次为c>b>a，即正常成年人服用最优剂量为丹参15 g，檀香5 g。

3 讨论

丹参-檀香是经典药对之一。丹参主活血，檀香主行气，二者配伍使用能增强行气活血的作用，在临床上常用于治疗心血管系统疾病[5-7]。《神农本草经》记载丹参“味苦，微寒。主心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚；破癥除瘕，止烦满，益气”，主要用于预防和治疗心脑血管疾病和高脂血症等代谢紊乱性疾病。檀香属于理气药，《本草择要纲目》记载檀香辛温无毒，阳中微阴，消风热肿毒。目前少有研究直接表明檀香对心血管系统疾病有治疗作用，但有研究[8-12]报道檀香对丹参有效成分如丹参素的吸收、分布、代谢可能会产生影响，具有协同增效作用。

依据2015版《中华人民共和国药典》[13]，正常成年人丹参日服用最大剂量为15 g，檀香日服用最大剂量为5 g。本实验结合临床应用经验，选择丹参5 g，10 g和15 g，分别与檀香最大剂量5 g配伍应用，通过心肌缺血再灌注损伤大鼠模型寻找丹参-檀香最佳配比。根据药效实验结果分析可得，给药b、c组效果好于给药a组，且实验组c效果比实验组b好，但b组和c组效果差异无统计学意义(P>0.05)。出于节约成本的考虑，选择实验组b的药材配比量为最佳配比，即丹参10 g，檀香5 g。