五味子水提物保护大鼠胃黏膜及抑制小鼠胃肠运动研究*

周心竹 刘施奇 孙婉婷 王馨珠 陶小军 徐志立

(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)

五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinesis(Turcz.) Baill.或华中五味子SchisandrasphenantheraRehd. et Wils.的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》，被列为上品，其性温，且温而不热不燥，归肺、心、肾经；具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效[1-4]。现代中药药理研究[5-7]表明，五味子具有保护肝免受损伤、调节免疫、镇静催眠、止咳平喘等作用。

为揭示五味子“酸涩收敛、涩精止泻”的药理作用及作用机制，本研究以乙醇诱发的大鼠胃溃疡模型及新斯的明所致小鼠胃肠功能亢进模型考察五味子水提物对消化性溃疡和胃肠运动功能的影响，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 昆明种小鼠，18～22 g，SD大鼠，180～220 g，雌雄各半，购自辽宁长生生物技术有限公司，许可证号：SCXK(辽)2020-0001。

1.2 实验药品 五味子，购自大连益春堂药房，由辽宁中医药大学药学院中药鉴定教研室王添敏教授鉴定为正品。奥美拉唑(悦康药业集团有限公司，国药准字H20056577)，新斯的明(哈尔滨市宏达动物药品厂，兽药字080021099)，颠茄片(大同市云岗制药有限公司，国药准字Z14021876)。

1.3 实验方法

1.3.1 五味子水提物的制备 取五味子，粉碎为粗粉，加8倍量蒸馏水，煎煮3次，每次40 min，合并煎液，旋转蒸发仪(上海力辰邦西仪器科技有限公司，型号：LC-RE-52AA)浓缩，制成18%的五味子水提物母液，用时以蒸馏水稀释为所需浓度。

1.3.2 半固体营养糊的制备 取5.0 g羧甲基纤维素钠(南京百慕达生物科技有限公司)，溶解在100 mL蒸馏水中，然后向溶液中加入 8 g 奶粉、4.0 g淀粉、4.0 g蔗糖和1.0 g炭末，边搅拌边加热，即可配制150 g/150 mL的半固体营养糊。放入4℃冰箱中冷藏备用。

1.3.3 乙醇诱发胃溃疡大鼠模型中胃壁损伤的测定 将大鼠随机分为6组，分别为正常对照组，模型对照组，五味子水提物高、中、低剂量组，奥美拉唑阳性对照组，每组10只。五味子水提物3个剂量组分别以1.4 g/kg、0.7 g/kg、0.35 g/kg的量灌胃，正常对照组、模型对照组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃，奥美拉唑阳性对照组以20 mg/kg的量灌胃。每日1次，连续给药10 d。参考文献报道[8]采用乙醇诱发大鼠胃溃疡模型，末次给药前禁食不禁水过夜，末次给药3 h后，除正常对照组外，各组大鼠灌胃无水乙醇[天津富宇精细化工有限公司，批号：(津)XK 13-011-00034)](1.5 mL/只)，2 h后处死大鼠，解剖出胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，滤纸吸干，平铺于滤纸上，观察胃黏膜的损伤程度，采用Image J软件测量溃疡面灰度，计算溃疡抑制率。溃疡抑制率(%)=(模型对照组溃疡面灰度-给药组溃疡面灰度)/模型组溃疡面灰度×100%。称取给药后1 d、5 d、10 d后，各组大鼠的体质量，并做统计学分析。剪取各组大鼠胃壁病变部位，4%多聚甲醛(上海碧云天生物技术有限公司)固定、石蜡包埋、切片，HE染色，观察病理改变。

1.3.4 正常小鼠胃肠运动功能的测定 参考文献[9-11]考察五味子水提物对正常小鼠胃肠运动的抑制作用。取50只小鼠，随机分为5组，即正常对照组，五味子高、中、低剂量组和颠茄阳性对照组。正常对照组等体积蒸馏水灌胃，颠茄组灌胃10 mg/kg颠茄溶液，五味子高、中、低剂量组给予相应浓度五味子水提物，分别以1.8 g/kg、0.9 g/kg、0.45 g/kg的量灌胃，连续5 d，每天给药1次。末次实验前禁食不禁水过夜，各组给药30 min后，灌胃半固体营养糊(0.8 mL/只)，20 min后，脱颈处死，剖腹，胃幽门及贲门迅速结扎后取出，滤纸拭干后称胃全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物，滤纸拭干，称取胃净重。胃残留率=(胃全重-胃净重)/0.8×100%。解剖出胃幽门至回盲部小肠，小肠自然伸直；胃幽门至盲端为小肠总长，幽门至营养糊前沿为推进距离。小肠推进率=(营养糊推进距离/小肠总长)×100%。

1.3.5 新斯的明所致胃肠功能亢进小鼠胃肠运动功能的测定 参考文献[9-11]考察五味子水提物对新斯的明所致胃肠功能亢进小鼠胃肠运动的抑制作用。取小鼠60只，随机分为6组，分别为正常对照组，新斯的明模型组，五味子高、中、低剂量组，颠茄阳性对照组。给药方法同1.3.4，新斯的明组与正常组小鼠均用等体积蒸馏水灌胃；末次给药30 min后，新斯的明模型组和各给药组小鼠以0.1 mg/kg的剂量腹腔注射新斯的明，正常对照组注射等体积生理盐水；30 min后小鼠灌胃半固体营养糊(0.8 mL/只)；20 min后处死小鼠，测量小鼠肠推进率与胃残留率。

2 结果

2.1 五味子水提物对乙醇诱发大鼠胃溃疡的保护作用 正常对照组大鼠胃组织结构完整，大小、形态正常，胃黏膜清洁。其余各组应用乙醇诱导胃溃疡模型后，各组大鼠胃黏膜均有不同程度的损伤。模型对照组出现明显灼烧后炎症和深黑褐色出血区域，甚至波及整个胃黏膜。给予五味子水提物或奥美拉唑后，各给药组虽然仍出现损伤，但出血区域小，黏膜损伤和出血点程度轻，其中五味子水提物高剂量组、奥美拉唑组胃体结构完好，胃壁厚度正常。见图1。各给药组溃疡抑制率均显著高于模型对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。表1结果亦显示，用药后，在乙醇诱发大鼠胃溃疡前，五味子水提物对于大鼠体质量增长无明显影响。

表1 五味子水提物对大鼠体质量及胃溃疡抑制率的影响

正常对照组大鼠胃壁鳞状上皮与腺上皮连接处无充血、水肿及炎细胞渗出。模型对照组大鼠胃壁鳞状上皮与腺上皮连接处上皮细胞变性坏死达全层2/3，上皮黏膜肌下明显充血、水肿；腺上皮多处黏膜全层凝固性坏死，其间见出血。五味子水提物高剂量组可见鳞状上皮与腺上皮连接处略水肿，未见出血及坏死。五味子水提物中、低剂量组胃壁鳞状上皮与腺上皮连接处的腺上皮层均可见不同程度的坏死，上皮下可见水肿。奥美拉唑阳性对照组大鼠胃壁鳞状上皮与腺上皮连接处未见充血水肿及炎细胞渗出，腺上皮表层黏膜偶见血管充血，未见出血及炎细胞渗出。见图2。

2.2 五味子水提物对正常小鼠胃肠运动的抑制作用 与正常对照组比较，五味子水提物高剂量组及颠茄性对照组的小肠推进率显著降低(P<0.05)，胃残留率显著升高(P<0.05)。见表2。

表2 五味子水提物对正常小鼠小肠推进率及胃残留率的影响

2.3 五味子对新斯的明所致胃肠功能亢进小鼠胃肠运动的抑制作用 与正常对照组比较，新斯的明模型组小鼠的小肠推进率显著增加，胃残留率明显降低(P<0.05)；与模型新斯的明组比较，颠茄阳性对照组，五味子水提物高、中剂量组小鼠的小肠推进率明显降低(P<0.05)，胃残留率显著升高(P<0.05)。见表3。

表3 五味子水提物对新斯的明所致亢进小鼠胃肠运动的影响

3 讨论

消化性溃疡(Peptic ulcer)为主要发生在胃和十二指肠的慢性溃疡，即胃溃疡(Gastric ulcer, GU)和十二指肠溃疡(Duodenal ulcer, DU)，是全球性常见病。正常生理情况下，胃和十二指肠黏膜具有一系列的防御和修复机制，在酸性环境及各种有害物质侵袭下足以抵抗胃酸、胃蛋白酶的侵蚀。当某些因素损害了胃、十二指肠黏膜的防御和修复机制，则可能导致胃酸、胃蛋白酶侵蚀黏膜，发生溃疡。

胃溃疡病因复杂，为更深入研究其发病及治疗机制，药理学家运用物理因素、化学因素、机械性因素、精神因素、复合因素等多种设计方法造模。乙醇致胃损伤模型，动物表现为黏膜充血、水肿、糜烂、出血，严重时则发生溃疡[8]。这种情况的原因与乙醇的直接毒性及乙醇所致黏膜血流紊乱、能量合成障碍、细胞钙超载等因素有关，且乙醇可增强细胞膜的通透性, 破坏胃黏膜屏障而致溃疡形成[8]。本研究发现，五味子水提物能显著减少乙醇所致大鼠的胃溃疡面积，组织病理学检查可见胃溃疡大鼠胃壁病变严重程度减轻，组织损伤范围明显减少，炎性细胞浸润程度减轻，表明五味子水提物对大鼠乙醇型胃溃疡具有明显的保护作用。

消化性溃疡患者多数同时发生胃肠动力异常。在临床治疗中，由于该病患者常无明显临床症状，临床医生将主要治疗方法聚焦于溃疡的愈合和症状的改善，对胃肠动力改变缺乏足够重视[12,13]。有关消化性溃疡治疗方药的研究也多集中于对胃黏膜的保护，抑制胃酸分泌等[12,13]。对于改善消化性溃疡患者胃肠动力障碍的方药的研究较少。而对于改善消化性溃疡患者胃肠动力障碍的方药的研究较少，究竟是消化性溃疡引起胃肠动力紊乱，还是胃肠动力异常导致了消化性溃疡，二者主次关系目前仍有争议，但学界普遍认可胃肠动力异常是消化性溃疡的结果[13]。胃排空速度受多种因素影响。研究[14]发现，胃溃疡位于近端胃则胃排空加快，病灶位于远端胃则排空延迟。同时，胃肠动力障碍可加重幽门螺杆菌或非甾体抗炎药对黏膜的损害。调节胃肠运动功能的药物可以用于治疗消化性溃疡，例如甲氧氯普胺、多潘立酮等促胃肠动力药可加速胃排空、减少促胃液素分泌、减轻胃酸对胃黏膜的损害，可用于治疗消化性溃疡伴消化不良或胃潴留。

小鼠胃排空、肠推进实验常用于考察药物对胃肠功能的影响。新斯的明具有抗胆碱酯酶作用，使乙酰胆碱蓄积，对胃肠道平滑肌可以产生类似乙酰胆碱的M 样作用，促进平滑肌收缩。胃排空实验可反映胃运动能力，进食一段时间后测定胃残留率，胃残留率越低，说明胃排空能力越强，反之越弱。肠推进率可判断小肠的动力情况，推进率越高，说明推进能力越强，反之越弱。本实验结果表明，五味子水提物可抑制小鼠胃排空及肠推进，尤其对新斯的明致胃肠功能亢进小鼠的抑制作用更为明显，说明五味子水提物对痉挛状态胃肠功能的选择性更强。

本研究结果显示，五味子水提物不仅可以抑制胃酸分泌、保护胃黏膜，同时对过亢的胃肠功能具有抑制作用，因此可为伴有腹泻、胃肠痉挛的消化性溃疡提供新的治疗思路与用药选择。