正交设计优化附子煨制工艺的研究*

侯春久 苏 慧 曹 婧 何平平 林亮华

(江西中医药高等专科学校药学系，江西 抚州 344000)

附子的煨制方式是江西“建昌帮”具有地域特色的炮制方法，“建昌帮”以擅长传统饮片加工炮制、药材集散交易著称。炮制风格以工具辅料独特，工艺取法烹饪，讲究形色气味，毒性低，疗效高著称。作为古老药帮之一，繁荣数百年。在“建帮炮制十三法”中，以煨制法和炆制法最具特色[1]，其中煨制法乃“雷公炮炙十七法”之一，建昌帮之煨法不同于其他帮派的煨法，其保留着唐代以来用糠灰炮炙的古老技法，该法是将净药材置糠火中煨熟，在全国别具一格，典型代表药物就是建昌帮煨附片[2]。传统炮制方法操作复杂，且成品得率较低，不适合特色饮片的应用。本次研究探索一种现代煨制方法，并量化炮制终点生物碱含量的指标，为实现批量生产以及炮制成品质量提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 生附子(购于四川江油中坝饮片厂)。煨附片(传统煨制方法得到)，安捷伦1260高效液相色谱仪[安捷伦科技(中国)有限公司]。YL183H2高压蒸汽锅(浙江苏泊尔股份有限公司)；CSY-L2中药水分测定仪(深圳市芬析仪器制造有限公司)，优普超纯水机RWD-1(上海优普实业有限公司)，KQ-500DE超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司),温控煨制炉(自制)；XW-80A涡旋混合仪(海门其林贝尔仪器制造有限公司)。

1.2 试剂 乙醚、 乙酸乙酯、异丙醇、二氯甲烷、硫酸等有机溶剂均来源于西陇科学股份有限公司，均为分析纯。乙腈：色谱纯(美国天地有限公司)；乌头碱对照品(批号：20051918)、乌头原碱(批号：20060306)、新乌头碱(批号：20080210)、苯甲酰乌头原碱(批号：19103010)、苯甲酰新乌头原碱(批号：20022710)、次乌头碱(批号20052710)、苯甲酰次乌头原碱(批号：20033111)购于信阳莱耀生物科技有限公司。

2 方法与结果

2.1 煨附片传统炮制方法 选大个盐附子，清水漂洗至味微咸，晾干表皮水分。选避风处，砌一直径45 cm围灶，用筛净的糠灰铺平地面，约3 cm厚。将附子尾端朝下插入灰中，靠拢，依次覆盖薄片生姜、草纸、糠灰、干稻草、干糠。用稻草点燃煨制2～3 d，待糠烬灰冷，取出煨附片。敲之有声为好。筛净糠灰后置木甄内，隔水武火蒸3～4 h，至无或微有麻味，表面光泽时停火。日摊夜闷至六成干，切片或晒干后分次润软切片[3]。

2.2 炮制方法的选择 通过对建昌帮煨附片传统炮制工艺的研究发现，其炮制效果主要与煨制温度、生姜用量、煨制时间以及蒸制时间、蒸制温度等有关。 生姜的用量主要与附子和容器的大小有关，用量在1～1.2倍之间，对结果无影响。故本次优化试验主要选择煨制温度、煨制时间以及蒸制时间为因素。根据预实验选择3种不同的水平。因素水平见表1。以炮制成品物性参数量化值为考察指标，对炮制方法进行综合评价，正交试验设计及综合评价结果见表2。具体操作如下：选个大生附子置于小型均匀加热温控煨制炉中，依次铺糠灰，摆放附子，覆薄生姜片、草纸、糠灰。煨制完成后筛净糠灰置高压蒸汽锅中蒸制，烘干后切制成薄片即得成品。其成品见图1。

表1 因素水平表

表2 正交试验结果表

注：样1为传统炮制方法，样2、样3、样4为现代炮制方法。图1 煨附片成品

2.3 炮制成品的评定 观察饮片的性状，采用游标卡尺测量饮片厚度，量取多种饮片取平均值。将炮制所得成品置于同一环境下，通过多组中药学人员包括主任中药师、主管中药师、建昌帮传统炮制方法传承人以及本校中药学专业建昌帮班学生对饮片表面颜色、断面质地、气、味进行综合评价。建昌帮煨附片成品性状要求为灰棕色半透明，不规则卵圆型薄中片，断面光滑平整，微有光泽，有数个小孔隙，质脆，无臭，味微咸，不麻舌。根据以上特点，对不同等级状态进行赋值，根据与传统炮制方式的接近程度，采取百分制的原则，例如颜色为灰棕色 ，根据表面颜色灰棕色-灰色-棕色的等级区别赋值为15～0，并将最后所得的物性参数评分作为综合评价指标。

3 生物碱类成分的含量测定

3.1 滴定分析测定总生物碱 按照酸碱滴定法[4]测定供试品中总生物碱的含量，将滤过制得的供试品溶液转移置25 mL容量瓶中，精密加入0.01 mol/L硫酸滴定液10 mL，加水至刻度，放置20 min，滤过，精密吸取续滤液10 mL于三角烧瓶中，加甲基红指示剂1滴，用0.02 mol/L浓度的NaOH滴定液，滴至黄色，记录所消耗的NaOH量，并换算成被反应的硫酸滴定液的量。其中以乌头碱表示总乌头碱的含量，每1 mL滴定液相当于12.6 mg乌头碱。

3.2 标准品的制备 精密称取对照品新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱，加入异丙醇-三氯甲烷(1∶1)混合溶液于100 mL容量瓶中，涡旋混合仪震荡溶解，定容至100 mL,制备成约50 mg/mL的标准混合溶液。

3.3 供试品的制备 精密称定煨附片粗粉2 g，置具塞锥形瓶中，采用《中华人民共和国药典》[5]附子中供试品制备方法制备得到煨附片供试品。

3.4 酯型生物碱的含量测定 色谱柱：Agilent Zorbax-C18柱(5μm，4.6 mm×250 mm)，G1314A型VWD检测器，流速为1.0 mL/min，进样量 20 μL，柱温为 30 ℃，检测波长 235 nm。流动相配比和梯度洗脱条件按照《中华人民共和国药典》[5]附子含量测定项下的条件进行。

3.5 饮片含量测定 按照3.4项下的色谱条件进行测定，平行测定3次，计算生物碱含量，结果见表3。

通过正交设计的直观分析表可以看出，根据R值，对结果影响较大的因素排名依次是A>C>D>B。根据K值选择的最佳炮制条件是A1C1D2B3。选取最佳炮制条件进行验证性试验。试验重复性较好。

表3 生物碱的含量测定 (%)

现代炮制方式所得到的成品煨附片所得生物碱含量相对稳定，且均符合《中华人民共和国药典》[5]对附子饮片的质量要求，与传统炮制方法得到的煨附片所含生物碱含量无明显差异。

4 讨论

利用现代工艺和方法对传统技术进行研究，一直是中药研究者的研究热点。特别是对具有炮制特色的中药饮片。本研究在保持了建昌帮煨制附子特点的基础上，保留了糠灰，并沿用了生姜覆盖的特点，采用电加热的方式进行煨制附子的火制部分的现代化研究。经过反复试验发现，若不加入糠灰作为传导热量的载体，所得煨附片的颜色较深，不具有半透明的特点，易出现炮制过品，且在含量检测的时候，发现单酯型生物碱的总量会有所下降。原炮制方法采用生姜覆盖附子再煨制，在研究过程中选择用生姜汁浸泡附子后再进行煨制。发现所得的双酯型生物碱的含量有所升高，成品颜色较浅，易出现炮制不及品，炮制效果不理想。对蒸制进行研究的过程中发现，采用高压蒸制的方式，蒸汽保持持久。和普通蒸制方式相比，没有明显的颜色和生物碱含量差别。从以上实验结果可以看出，糠灰在炮制方式中不仅仅是传热介质的作用，其可以作为辅料，对附子的减毒增效发挥作用。生姜覆盖在附子表面，通过热量的传递，将生姜当中的成分慢慢渗入到附子中。而改为生姜汁浸泡，热量传递过程在生姜浸泡之后，生姜对附子减毒的炮制影响明显变小。故在现代化煨制附子的过程中，需要注意，保持糠灰的存在，并且煨制温度不能过高，需要保持一段煨制时间，生姜需要覆盖在附子之上，这些关键的步骤直接影响了炮制效果和建昌帮煨制特色。糠灰及生姜作为辅料的炮制机制还需要进一步的研究。高压蒸制过程保证了蒸汽环境，可以缩短传统蒸制的时间。在炮制过程中，为了提高收率，可以检测煨制过程中火制之后中间品的质量，主要通过含量测定进行。根据含量测定的结果，缩短或延长蒸制的时间。

建昌帮煨制附子的现代工艺研究所得到的煨附子成品虽不能和传统手工炮制得到完全一致的试验结果，但可以避免传统炮制存在的临时在户外砌的围灶中用慢速燃烧的谷糠火的取热方式进行煨制带来的弊端。传统炮制均有经验判断，收率较低，若经验不足，收率只能在10%左右。传统方式炮制记载损耗在70%～75%之间，现代炮制工艺的损耗较少，收率较高，在进一步深入研究的基础上可以作为规模型生产的参考。