女贞子高压酒炖工艺的优化

栾茹乔， 赵 鑫， 张学兰,2*， 陈鑫凤， 刘阳阳， 王 玲， 杨雨思

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.山东省高校中药质量控制与全产业链建设协同创新中心，山东 济南 250355)

女贞子为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实，具有滋补肝肾、明目乌发的功效[1]。女贞子经酒制之后可缓和其凉滑之性，增强滋补肝肾作用，故女贞子古今入药均以酒女贞子为主。目前，女贞子的炮制方法主要有酒蒸和酒炖，酒蒸时间一般为2 h，酒炖时间为6～24 h，但缺乏客观的炮制工艺参数，无法运用到实际生产中。前期已优选出酒炖女贞子的最佳炮制工艺[2]，但目前采用的炖制工艺炖制时间长，生产效率低，饮片质量难以控制。

女贞子含苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类以及三萜类成分，其中环烯醚萜苷类成分有特女贞苷、橄榄苦苷、新女贞苷等，三萜类成分包括齐墩果酸、熊果酸等，而苯乙醇类成分有松果菊苷、红景天苷、酪醇、羟基酪醇等[3-4]。女贞子经酒制之后环烯醚萜苷类成分含量降低，苯乙醇类成分含量则升高[5-6]。女贞子中含有酯苷键的环烯醚萜苷类成分性质不稳定，经酒蒸或清蒸后水解生成其次级苷或者苷元，其中，oleonuezhenide、女贞苷G13水解生成特女贞苷和红景天苷，特女贞苷、女贞次苷水解生成红景天苷，橄榄苦苷水解生成羟基酪醇、女贞苷水解生成酪醇[7-8]。水解生成的苯乙醇苷或苯乙醇苷元较其原苷更利于机体吸收。红景天苷具有降血脂、抗肿瘤、抗肝纤维化作用[9-12]，羟基酪醇具有抗癌、降血糖、抗骨质疏松作用[13-15]，酪醇具有降糖、抗炎、抗肿瘤作用[16-17]。因此，本实验选用羟基酪醇、红景天苷、酪醇的总含量为考察指标，对酒女贞子高压炖制工艺进行研究，优选出女贞子高压炖制的最佳工艺参数。

1 材料

L-2000型高效液相色谱仪(配置DAD检测器，日本日立公司)；DS-T100型高速多功能粉碎机(上海市顶帅工贸有限公司)；AF240型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；WD-9415F型超声波清洗器(北京六一生物科技有限公司)；101-1ES型电热鼓风干燥箱(北京光明医疗仪器有限公司)；立式压力蒸汽灭菌锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。

红景天苷、酪醇、羟基酪醇对照品(成都克洛玛生物科技有限公司，批号分别为CHB-H-026、CHB180230、CHB180714，纯度均大于98%)。黄酒(山东即墨黄酒厂)；其余试剂均为分析纯；水为娃哈哈纯净水。

女贞子购于山东百味堂中药饮片有限公司，经山东中医药大学中药鉴定教研室李峰教授鉴定为木犀科植物女贞LigubtrumLucidumAit.的干燥成熟果实。

2 方法与结果

2.1 因素确定 选择加酒量(A)、加水量(B)、炖制温度/压力(C)、炖制时间(D)作为影响因素，采用L9(34)设计优化高压酒炖工艺，因素水平见表1。

表1 因素水平

2.2 酒制品制备 取净饮片100 g，共9份，按表1因素水平置于立式压力蒸汽灭菌锅中炮制，当压力降至常压后取出，置于热风循环干燥箱中，在50 ℃下烘干，取出，晾至室温，粉碎，过60目筛，即得，密封保存(编号1～9号)。

2.3 水分测定 将“2.2”项下酒制品粉碎后过2号筛，每份约取2.5 g，按2020年版《中国药典》一部附录项下通则0832第二法测定，结果为4.42%～6.76%。

2.4 含量测定

2.4.1 供试品溶液制备 取酒制品粉末约0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入20 mL 50%甲醇，密塞，摇匀，称定质量，超声提取30 min后取出，放冷，50%甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，微孔滤膜过滤，即得。

2.4.2 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相乙腈-0.1%磷酸(8∶92)；体积流量1.0 mL/min；柱温30 ℃；检测波长224 nm；进样量20 μL，色谱图见图1。

2.4.3 对照品溶液制备 精密称取羟基酪醇、红景天苷、酪醇对照品适量，50%甲醇溶解，制成质量浓度分别为0.101、0.376、0.196 mg/mL溶液，即得。

2.4.4 线性关系考察 精密吸取不同体积对照品溶液，50%甲醇稀释，在“2.4.2”项色谱条件下进样测定。以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)进行回归，结果见表2。

1. 羟基酪醇 2. 红景天苷 3.酪醇1.salidroside 2.hydroxytyrosol 3.tyrosol

表2 各成分线性关系

2.4.5 重复性试验 平行称取同一批酒制品6份，按“2.4.1”项下方法制备供试品溶液，在“2.4.2”项色谱条件下进样测定，测得羟基酪醇、红景天苷、酪醇峰面积RSD分别为 0.75%、0.27%、1.19%，表明该方法重复性良好。

2.4.6 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在“2.4.2”项色谱条件下进样测定，测得羟基酪醇、红景天苷、酪醇峰面积RSD分别为 1.19%、1.36%、1.57%，表明溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液适量，在“2.4.2”项色谱条件下进样测定6次，测得羟基酪醇、红景天苷、酪醇峰面积RSD分别为1.49%、1.74%、1.46%，表明仪器精密度良好。

2.4.8 加样回收率试验 称取6份各成分含量已知的酒制品粉末，每份约0.1 g，精密加入0.101 mg/mL羟基酪醇对照品溶液2 mL、0.376 mg/mL红景天苷对照品溶液3 mL、0.196 mg/mL酪醇对照品溶液1 mL，按“2.4.1”项下方法制备供试品溶液，在“2.4.2”项色谱条件下进样测定，计算回收率，结果见表3。

2.4.9 样品含量测定 精密吸取供试品溶液20 μL、对照品溶液10 μL，在“2.4.2”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表4。

2.5 工艺优化 采用加权评分法对各工艺参数进行量化分析，计算相应综合评分Y(红景天苷、羟基酪醇、酪醇为女贞子炮制后的增量成分，根据增量程度赋予三者权重系数分别为50%、20%、30%)，公式为Y=(红景天苷测得含量/最高含量)×50+(羟基酪醇测得含量/最高含量)×30+(酪醇测得含量/最高含量)×20，结果见表5，方差分析见表6。

由此可知，最优工艺为A3B1C3D2；炖制温度/压力(C)是最主要的影响因素，其次是炖制时间(D)、加酒量(A)、加水量(B)；因素A对饮片质量无影响，故选择其作为误差，而且从节省辅料、润透的原则考虑选择A1。最终确定，最优工艺为A1B1C3D2，即取净女贞子于不锈钢容器中，加20%黄酒与80%水，拌匀，密闭，置于立式压力蒸汽灭菌器中，蒸汽加热(123 ℃/0.12 MPa)，炖制6 h。

表3 各成分加样回收率试验结果(n=6)

表4 各成分含量测定结果(mg/g)

表5 试验设计及结果(n=2)

表6 方差分析

2.6 验证试验 按“2.5”项下优化工艺条件制备3批酒制品，进行验证试验，结果见表7，可知该工艺稳定可控。

表7 验证试验结果(n=3)

2.7 不同炮制方法下各成分含量比较

2.7.1 炮制方法

2.7.1.1 生品 取净药材100 g，除去杂质，洗净，干燥。

2.7.1.2 常压炖制 取净药材100 g，除去杂质，洗净，加20%黄酒闷润2 h，置于适宜容器中，加80%水，密闭，蒸24 h，取出，晾干。

2.7.1.3 高压炖制 取净药材100 g，加其20%黄酒、80%水，置于不锈钢容器中，拌匀，密闭，置于立式压力蒸汽灭菌器中，蒸汽加热(123 ℃/0.12 MPa)，炖制6 h，取出，晾干。

2.7.2 结果分析 按“2.4”项下方法测定各成分含量，结果见表8。由此可知，炖制后各成分含量均有不同程度的升高，并且高压、常压下无明显差异。

表8 不同炮制方法下各成分含量(%)

3 讨论

酒女贞子高压炖制的最佳炮制工艺为取净女贞子，加20%黄酒、80%水，于不锈钢容器中，拌匀，密闭，置立式压力蒸汽灭菌器中，用蒸汽加热(123 ℃/0.12 MPa)，炖制6 h。其中，对酒女贞子质量产生影响的因素主要是炖制温度/压力与炖制时间。同时还针对加水量、闷润时间进行分析，这两项因素对酒女贞子的质量无影响。

中药含有多种有效成分，对多成分进行测定具有重要意义。本研究以多指标代替单一指标来考察酒女贞子的炮制工艺，其结果更具科学性和适用性。可对酒女贞子的质量控制标准提升和创新提供依据，为质量标准提供参考，有效保障临床用药质量。