5种红托竹荪母种培养基的筛选

唐玲,杨珍,杨仁德,陈波,王晓敏,张钦语,张邦喜

（贵州省土壤肥料研究所，贵州 贵阳 550006）

红托竹荪（Dictyophora rubrovolvata）隶属于担子菌门（Basidiomycotina）鬼笔目（Phallales）鬼笔科（Phallaceae）竹荪属（Dictyophora）［1］，是我国名贵的山野珍馐，其形态秀美、清香宜人、味道鲜美、口感脆嫩，深受人们喜爱。红托竹荪具有很高的营养价值和药用价值，富含多种氨基酸和矿质元素，高蛋白、低脂肪［2］，具有增强机体免疫力，抗肿瘤［3］、抗氧化［4］、耐缺氧、降血糖、延缓衰老［5-6］以及保护肝脏［7］的作用。红托竹荪现已成为贵州省特色珍稀食用菌，可实现人工大规模栽培，但在栽培过程中也存在一些问题亟需解决，例如菌种生长周期长，一般母种至原种再至栽培种的培养周期大约需要7个月［8-9］，且菌丝容易老化变红，这是制约红托竹荪产业快速发展的一个主要因素。为寻找适宜其快速生长且菌丝长势良好的培养基配方，对5种红托竹荪母种培养基进行比较，筛选出最佳培养基配方，以期能缩短制种周期，节约生产成本的同时还能获得优质菌种，从而促进红托竹荪产业的进步与发展。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株试验所用菌株采自贵州不同地区栽培的红托竹荪子实体，通过组织分离纯化而来，菌株编号和采集地信息见表1。

表1 红托竹荪各菌株信息

1.1.2 培养基配方

配方一：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、水1 000 mL。

配方二：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氢钾0.3 g、硫酸镁0.15 g、维生素B110 mg、琼脂20 g、水1 000 mL［10］。

配方三：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂18 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸镁0.5 g、酵母粉2 g、水1 000 mL。

配方四：松针36 g、马铃薯250 g、琼脂29 g、葡萄糖25 g、蛋白胨5 g、磷酸二氢钾3 g、水1 000 mL［11］。

配方五：竹叶50 g、马铃薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氢钾0.3 g、硫酸镁0.15 g、维生素B110 mg、琼脂20 g、水1 000 mL。

1.2 试验方法

按1.1.2中培养基配方配制培养基，121℃高压灭菌30 min，灭菌结束后于超净工作台中分装至直径6 cm或直径9 cm的培养皿中，冷却凝固备用。在超净工作台中用无菌接种针挑取菌种块转移至上述培养皿中，用封口膜密封后置于25℃恒温培养箱中暗置培养，待菌丝萌发后观察菌丝生长情况，并用十字划线法进行划线，每个处理3个重复，菌丝生长速率用下式进行计算：

菌丝生长速率（cm/d）＝菌落直径（cm）/菌丝生长天数（d）

2 结果与分析

2.1 红托竹荪在配方一、配方二和配方三中的菌丝生长情况

选取采自同一地点同一菌种不同子实体通过组织分离而来的红托竹荪H8、H9菌株，比较其在配方一、配方二和配方三3种培养基中的菌丝生长情况（图1），2个菌株在3种培养基中均能正常生长，但菌丝生长速度较慢，菌丝前期洁白浓密，培养20 d左右，菌丝开始变红。比较其在不同培养基中的菌丝生长速率（图2），H8和H9均在配方二中菌丝生长速率最高，分别为0.09 cm/d和0.14 cm/d。说明配方二适宜红托竹荪菌丝生长。

图1 H8与H9在不同培养基中的菌丝生长情况（标尺=2 cm）

图2 H8与H9在不同培养基中的菌丝生长速率

2.2 不同红托竹荪菌株在配方二中的菌丝生长情况

将收集到的不同红托竹荪菌株在配方二种培养，30 d后各菌株菌丝生长情况如图3所示，表明不同菌株在同一培养基中菌丝生长情况差异明显，根据生长情况可将菌株分为3类，其中H3、H4、H7和ZJZS-2菌株菌丝长势较好，H1、H5和H9菌株菌丝长势中等，H2、H6和ZJZS-1菌株菌丝生长速度极慢，基本不吃料，培养30 d几乎还未生长，说明配方二还需继续优化以促进菌丝生长。

图3 不同菌株在配方二中的菌丝生长情况（标尺=2 cm）

2.3 不同红托竹荪菌株在配方四中的菌丝生长情况

红托竹荪培养基中添加松针可促进其生长［11］，因此，将不同菌株接种于配方四培养基中进行培养，30 d后各菌株菌丝生长情况如图4所示，红托竹荪不同菌株在配方四的培养基中菌丝生长极慢，培养30 d菌丝还处于刚萌发状态，几乎没有生长，说明红托竹荪菌丝不适宜在添加松针的培养基中生长，这也可能与选用的松针材料有关。

图4 不同菌株在配方四中的菌丝生长情况（标尺=2 cm）

2.4 红托竹荪在配方二和配方五中的菌丝生长情况

红托竹荪菌株在配方二中菌丝生长速率最快，但是生长至后期菌丝极易变红。研究发现，在培养基中添加竹叶煮汁可以明显抑制红托竹荪菌丝变红现象，因此，在配方二中加入竹叶煮汁得到配方五。选取在配方二中长势较好和长势中等的2个菌株H4和H1，比较其在2种培养基中的菌丝生长情况。结果表明，红托竹荪菌丝在配方五中培养35 d后依然保持洁白（图5），而且菌丝生长速度明显快于配方二中的菌丝（图6），H1、H4菌丝在配方五中的生长速率在0.13～0.21 cm/d，显著（P＜0.05）高于配方二。说明，添加竹叶煮汁不仅能避免菌丝变红现象，还能使菌丝生长速度加快，且菌丝更加浓密，长势更好。

图5 H1与H4在不同培养基中的菌丝生长情况（标尺=2 cm）

图6 H1与H4在不同培养基中的菌丝生长速率

3 结论

红托竹荪5种母种培养基配方试验结果表明，配方五中菌丝长势和生长速度最佳，菌丝生长速率为0.13～0.21 cm/d，菌丝浓密，生长35 d后依然保持洁白。在培养基中添加适量磷酸二氢钾和硫酸镁可以提供菌丝生长所需的矿质元素，添加维生素B1可以提供菌丝生长所需的营养，添加竹叶煮汁可以避免红托竹荪菌丝变红现象，且能使菌丝更加浓密。表明，培养基配方五是红托竹荪母种的最佳培养基，即竹叶50 g、马铃薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氢钾0.3 g、硫酸镁0.15 g、维生素B110 mg、琼脂20 g、水1 000 mL。

由于供试菌株均由栽培的子实体进行组织分离纯化而来，在培养过程中发现，即使是从同一地点采集的不同子实体，分离获得的菌株在同一培养基上进行培养时，菌丝生长也存在明显差异，说明同一菌种不同菌株之间也存在生长差异，在以后的生产栽培过程中应注重菌种的选择。目前，红托竹荪生产中使用的菌种质量参差不齐，大多是通过组织分离而来，菌种稳定性弱，后续应对优良资源进行定向选育，以获取可稳定遗传的菌种，促进红托竹荪产业健康稳定发展。