气相色谱-质谱技术定性确证水产品中精神类药物残留

祝伟霞，郁 露，张淑霞，邢荣花，师子豪

（郑州海关技术中心，河南郑州 450009）

精神类药物能直接作用于中枢神经系统，干扰神经物质分泌，在临床具有广泛的应用[1]。滥用精神药类药物能够产生类似药物成瘾的效果，危害人类健康，为经济发展和社会公共安全带来威胁[2]。淡水中水生动物中精神类药残留源于两种途径，一方面养殖企业为提高经济效益，违规将精神类药物添加至饲料中，添加镇静类药物可缩短生长周期，减少动物维持体能营养物质消耗达到增长体重目的；另一方面，医疗行业和违规吸毒的人类活动会直接污染水环境[1,3]。为保障动物源食品质量安全，我国农业部176号公告禁止在饲料和动物饮用水中使用精神类药物。为监控水产中精神类药物残留现状，建立一种水产品中精神类药物残留分析方法是非常必要的。

目前精神类药物的检测方法有免疫法[4]、红外光谱法[5]、拉曼光谱法[6]、气相色谱-质谱法(GC-MS)[3,7]、高效液相色谱法-质谱法[2,8]、液相色谱-高分辨质谱法[9]等检测方法，已报告的研究主要用于药物、体液、污水中精神药物的测定，很少有关水生动物组织中精神类药物残留的报道。本文以鲤鱼为分析对象，采用分散固相萃取净化方法，建立了气相色谱质谱法分析4种精神类药物残留的确证方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

GCMS-QP2020NX型气相色谱-质谱仪（配电子轰击源，日本岛津公司）；Multi Reax涡旋振荡器（德国Heidolph公司）；S22H超声波清洗剂机（厦门致微仪器公司）；CT-6E型离心机(日本日立公司)。

乙腈和丙酮（美国Fisher公司，色谱纯）；填料PSA和填料C18（美国Agilent公司）；正己烷、氯化钠和硫酸钠为市售分析纯试剂，硫酸钠使用前于650℃灼烧4小时。

安眠酮、仲丁比妥、艾司唑仑、唑吡坦标准溶液（100μg/mL，天津阿尔塔科技有限公司）；标准工作溶液的配制：分别量取100μL标准溶液，用丙酮定容至10mL，配制成质量浓度为1μg/mL的标准工作溶液。标准工作曲线的配制：量取适量的标准工作溶液，配制成质量浓度为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL，临用前配制。

1.2 实验方法

取鲤鱼样品的可食部位，采用组织捣碎机制备成均匀的样品，于-18℃条件下保存。称取制行样品5.0g（精确至0.001g）置于50mL离心管中，加入5.0g氯化钠，搅拌使其均匀分散，加入20mL乙腈，超声萃取30min，涡旋混合5min，置于8000r/min转速下离心10min。转取全部上清液，加入5mL乙腈饱和的正己烷液液萃取，离心后移去正己烷层，样液中加入100mg PSA和填料150mg C18进行分散固相萃取净化，离心后转移上清液，并于50℃氮气流下吹干，加入1mL丙酮定容残渣，经0.22μm有机相滤膜过滤后，进行GC-MS测定。

1.3 GC-MS测定条件

色谱柱为5%苯基-95%甲基聚硅氧烷毛细管柱DB-5MS（柱长30m×0.25mm,0.25μm）；程序升温条件：初始温度140℃，保持3min，再以15℃/min的速率升至230℃，保持5min，以25℃/min的速率升至305℃，保持10min；载气为氦气；载气流速为1.0mL/min；进样口温度280℃：进样量1μL；进样方式 为不分流进样，溶剂延迟2min。

电子轰击离子源在选择离子模式监测，电离能量为70eV；离子源温度为230℃；安眠酮特征离子（235*、250、91、65）、仲丁比妥特征离子为（156、141、98、55）、艾司唑仑（259、205、294、239）特征离子为、唑吡坦（235、307、92、219），带*为定量离子，图1列出4种分析物的气相色谱-质谱总离子流图。

图1 4种精神类药物的气相色谱-质谱总离子流图

2 结果与讨论

2.1 提取方法的优化

精神类药为弱极性化合物，易溶于有机溶剂[10]，对比了采用甲醇、乙腈、二氯甲烷、丙酮的提取效果。结果表明采用甲醇和乙腈进行提取时，蛋白沉淀完全，基质中干扰少，二氯甲烷和丙酮干扰峰多，甲醇提取液需要多次的溶剂转移后可进行GC-MS测定，实验繁琐，本方法选用乙腈提取鱼肉中精神类药物。

试验对比了氯化钠和无水硫酸钠提取4种分析物时的盐析效率，结果表明采用氯化钠时的提取效率为85.4%～93.4%，无水硫酸钠的提取效率为76.8%～95.6%，方法选用氯化钠作为盐析试剂。

2.2 样品定容液的选择

样品经过前处理净化后，采用不同的定容液可对GC-MS响应产生影响。比较了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正己烷作为定容液的响应值，甲醇和乙腈溶剂极性强，进行GC-MS测定时响应弱，丙酮响应最高，如图2所示，方法选用丙酮进行定容。

图2 不同有机溶剂作为定容液时相对响应强度的变化

2.3 进样口温度的选择

分别对比了进样口在260℃、280℃、290℃、300℃下的信号强度，试验结果表明仲丁比妥在280℃比260℃时信号提高了15.7%，另3种精神类药物信号强度未发生变化，因此本方法的进样口温度设定280℃。

2.4 方法验证

采 用 丙 酮 配 置 质 量 浓 度 为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的标准溶液，在优化的方法条件下进行测定，以质量浓度x对分析物面积y作图，在该浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数均≥0.9994，线性方程和见表1。以信噪比≥3为方法检出限，以信噪比≥10为方法定量限，方法检出限为4μg/kg，定量限为10μg/kg，分别添加LOQ、2*LOQ、5LOQ，平行测定6次，计算方法回收率和精密度，结果在表。

表1 方法验证参数

收集农贸市场13份鲤鱼，样品制备完成后，按本方法所述进行测定，13份鱼鲤鱼中均未检出安眠酮、仲丁比妥、艾司唑仑、唑吡坦残留。

3 结论

本文以鱼肉中安眠酮、仲丁比妥、艾司唑仑、唑吡坦4精神药物残留为目标物，样品在氯化钠的盐析的作用下，乙腈进行提取，正己烷除脂，加入PSA和C18固相萃取填料净化，GC-MS选择离子模式监测。通过优化不同的前处理和仪器条件，证明本方法测定水产品中精神类药物，特异性强、定性准确，可以高通量测定鲤鱼中4种精神类药物残留。