缺氧缺血性脑病新生儿血浆硫化氢水平变化及意义

闵宇懿，刘 璇

1.广州市第八人民医院儿科，广东 广州 510000；2.南方医科大学，广东 广州 510515

新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是指围生期因羊水异常妊娠期高血压病、糖尿病、脐带绕颈等原因引起大脑部分或完全缺氧，脑部血流量减少，导致脑组织缺氧缺血性损伤［1］。HIE是新生儿期常见的一种疾病，发病率约为活产新生儿的0.3%～0.5%，轻者几乎不留神经系统后遗症，而重者可出现神经系统后遗症或致死，是儿童致残的常见原因之一［2］。硫化氢（H2S）作为一种新发现的气体信号分子，在人体组织中产生的含量相当高，甚至在脑组织中的浓度可达60～170μmol/L［3］。有研究报道，H2S能直接作用于中枢神经系统，具有清除氧自由基、减轻氧化应激、扩张血管、保护神经元等多种效能，并参与脑缺氧缺血再灌注的病理生理过程，现正成为一种有效的细胞保护剂，用于对抗多器官缺血性损伤［4］。本研究观察50例HIE新生儿血浆H2S水平变化，并探讨其与HIE的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

观察组选取2019年2月—2020年2月在广州市第八人民医院新生儿重症监护病房（NICU）收治的50例HIE新生儿，男性23例，女性27例，胎龄37～40周，出生时体质量为2 100～3 800 g；自然分娩29例，实施剖宫产21例。参照文献［5］标准，HIE新生儿病情分为轻、中、重度。其中轻度16例，中度23例，重度11例。对照组：选取同时期出生的健康足月新生儿50例，男性24例，女性26例，胎龄37～41周，出生时体质量为2 400～3 900 g；自然分娩27例，实施剖宫产23例。排除感染性疾病及神经系统发育异常者。两组新生儿在性别、胎龄、出生时体重及分娩方式等方面具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

（1）标本采集：两组患儿出生后24 h内，由专人取股静脉血3 mL（0.1%肝素抗凝），然后静置2 h，4℃下以3 000 r／min高速离心10 min，分离出血浆，然后将血浆保存于-70℃冰箱中，待测。（2）血浆H2S含量的测定：采用亚甲蓝分光光度法。首先取0.1 mL血浆，然后再加入0.1 mL5%醋酸锌，使之充分混匀形成醋酸锌胶体后加入5 mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液溶0.1 mL，于温度为-18℃的冰箱放置10 min，12 000 r/min速率离心10min，用吸管吸取上清液，然后加0.1 mL0.2%N-二甲基对苯二胺、0.1 mL20%三氯乙酸、加0.01 mL10%硫酸铁铵，生成亚甲基蓝络合物，用分光光度仪于酶标仪665 nm处检测其吸光度，最后根据标准曲线对H2S浓度进行测定。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用配对t检验、独立样本t检验及单因素方差分析。两因素相关分析采用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组与对照组新生儿血浆H2S水平分别为（36.75±4.85）μmol/L、（48.66±6.21）μmol/L，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。观察组病情轻度、中度、重度新生儿H2S（44.12±4.82） μmol/L、（35.11±3.61） μmol/L、（27.91±7.22）μmol/L，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。相关性分析显示，HIE新生儿病情程度与其血浆H2S水平呈负相关（r=-0.93，P＜0.05）

3 讨论

HIE是指围产期窒息导致大脑的缺氧缺血性损害，为新生儿期较严重的致死性和神经致残性疾病，一直是我国新生儿医学研究的难题。该病以意识状态、反射、肌张力异常为主要表现，严重可致昏迷或去大脑僵直状态［6］。由于新生儿HIE临床表现是隐匿的，因此，在早期阶段会被忽视。普遍认为HIE发病与大脑的缺氧缺血有关，并受到多种神经调节因子影响，最终导致新生儿大脑受到病理性损害。如果能在新生儿发病早期及时干预，采取有效措施改善大脑的缺氧缺血，就能大大降低大脑病理性损害，为患儿救助赢得时间。因此，早期诊断和准确的病情判断，并采取针对性措施进行干预，对患儿预后具有重要意义。

H2S为是一种有着臭鸡蛋气味的有毒气体，为继NO和CO之后发现的第三类气体信号传递分子，也是一种新型的神经调节因子。在人体组织中参与合成内源性H2S的关键酶有两种，一是胱硫醚-β-合酶，二是胱硫醚-γ-裂解酶。其中胱硫醚-β-合酶主要位于人体的海马、小脑、大脑皮层和脑干等中枢组织，而胱硫醚-γ-裂解酶大多分布于血管组织中，少量存在颅内［7］。研究表明［8］，中枢神经系统内H2S主要通过钙离子/钙调素路径活化胱硫醚-β-合酶催解L-半胱氨酸及α-丙戊二酸而生成。内源性H2S可以通过调节ATP敏感性钾通道舒张血管平滑肌，扩张脑血管，改善脑血流量；还可以下调丝裂原活化蛋白激酶的活性，抑制Bcl-2蛋白广泛表达，激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（MAPK）活性，阻止血管平滑肌细胞增殖，加速细胞凋亡，从而抑制血管重塑。同时，H2S可通过清除氧自由基、抗氧化应激及KATP/PKC/ERK1/2/Hsp90途径参与中枢神经元的保护［9］。研究报道［10］，使用外源性H2S可防止大脑缺氧缺血时的神经元损害，改善大脑循环，对中枢神经元具有保护作用。这可能为大脑缺氧缺血引起损伤的患者提供一种新的治疗方案。

当颅脑损伤后，机体就会处于应激状态，胱硫醚-β-合酶的底物半胱氨酸就会处于相对生成不足状态，导致胱硫醚-β-合酶生成不足，而胱硫醚-β-合酶则是中枢神经系统产生H2S的关键酶，因此脑内生成H2S含量就会明显减少。颅脑损伤后，H2S在参与抗氧化应激、炎症和凋亡等保护作用作用过程中也会被消耗过多，实际上脑组织H2S含量减少。同时，当大脑受到损伤时就会产生大量NO，与胱硫醚-β-合酶的亚铁血红素结合，从而抑制胱硫醚-β-合酶酶的活性，最终导致H2S的生成减少［11］。

本研究表明，新生儿血浆H2S水平降低与HIE发病有关，其可能参与了HIE发病的病理生理过程。HIE新生儿出现神经细胞损害可能与血浆H2S明显降低有关。通过进一步分析发现，HIE新生儿病情程度与其血浆H2S均呈负相关，证实血浆H2S水平可反映HIE病情的严重程度，即血浆H2S水平可作为病情严重程度判断指标之一。

综上所述，HIE新生儿血浆H2S水平明显降低，血浆H2S水平可作为病情严重程度判断指标之一。通过对新生儿血浆H2S含量的检测，有助于早期诊断和病情判断，以便早期采取有效措施预防疾病进展及术后并发症的发生，对HIE防治具有一定意义。