温和型猪瘟的诊断分析

2022-11-22傅建功

中国畜禽种业 2022年4期

傅建功

（山东省栖霞市动物疫病预防控制中心 265300）

近年发生一种以高热为主要特征的猪传染病，各种抗生素治疗无效，为弄清该病病原，以便更好地开展防治工作，我们做了一些试验诊断工作，经诊断该病是一种没有猪瘟特征、发病率和死亡率均较低的温和型猪瘟，现将流行情况、临床症状和诊断结果汇报于下。

1 流行情况

此病发生于圈养猪，多呈散发性，有的地方则呈地方性流行。个体饲养猪比规模饲养猪发病多，不同年龄的猪以15～50kg 的架子猪发病为多，哺乳仔猪、母猪、肥猪仅个别发病。流行扩散很快，但发病率不高。某镇养殖场在半个月内发病180 头，发病率为2.5%，死亡28 头，死亡率15.5%，另有11头较大的病猪因治疗无效进行无害化处理。发病地区的猪一般经过春季猪瘟弱毒疫苗防疫注射[1]。

2 临床症状

病猪常突然发生高温稽留在40～42℃，体温升高第1 天病猪食欲稍减，第2 天开始拒食或仅吃几口。嗜睡，鼻盘干燥，结膜潮红，大便多呈干球状带有白色黏液，个别带血，少数呈稀粪或糊状，口干喜喝清水、脏水和吃泥，病程较长的病猪有咳嗽、气喘等症状。严重者鼻孔流出含有泡沫状液体，肺部听诊有水泡音，病猪常因衰竭而死。病猪一般皮肤无出血充血现象。病程长短不一，短者几天，长者超过20d。

3 病理剖解

先后剖解5 头猪，其中2 头死猪，3 头病猪，除1 头初发病外，4 头病程均在6～7d。病变主要在淋巴结，肾脏和肺部。全身淋巴结有不同程度水肿，特别肺门淋巴结水肿更为严重。肾表面色泽较浅并有瘀血斑。气管黏膜充血，内有大量泡沫。肺瘀血，高度水肿，间质水肿，切面有多量液体流出，部分组织伴有气肿，其他脏器无明显肉眼变化。

4 细菌学检查

扑杀3 头病猪后，肝脏、肾脏、淋巴结、心血及有病变的肺组织分别用鲜血琼脂培养基、血清琼脂培养基、熟肉培养基等分离培养，结果均为阴性。上述试验组作抹片用瑞特氏，吉姆萨染色镜检均未发现可疑致病菌。

5 病毒学检查

5.1 仔猪人工感染和断代

（1）第一代用3 头猪病料，按照1:5 比例，给3 头10kg 左右的仔猪各肌注5ml，均于3d 后体温升高，稽留8d，在体温开始下降时扑杀，主要病变为全身淋巴结水肿，肾色泽较浅，第二代1 头猪在接种第一代病猪淋巴结1:5 悬液40h 后体温升高，达40.6～41.7℃，持续4d 扑杀，病变为全身淋巴结水肿，肾色泽较浅，有个别出血点。第三代用4 头仔猪，接种第二代病料后均于4h 体温升高，稽留9～10d，并于第9～10 天各死亡1 头。

（2）4 头猪剖解均表现典型的猪瘟病理变化：淋巴结大理石样出血，肾贫血，无论浆膜下，肾皮、髓质、肾盂均有大量出血点，膀胱胆囊黏膜均有小点出血，脾不肿大，边缘被膜下有隆起的小丘状出血。胃底和幽门部黏膜出血，肠弥漫性出血，回盲瓣附近有少数黄豆大的小溃疡。

（3）所有人工感染猪均于体温升高的第1 天减食，第2 天起拒食或仅吃几口，精神沉郁、嗜睡，病程较长者在颈部、四肢内侧和下腹部皮肤有出血斑点。7 头试验猪中有2 头病猪死前体温骤降，所有病猪的肝、肾、心血淋巴结做细菌培养均为阴性，血液检查出现白细胞降低和中性球左移现象[2]。

5.2 病毒分离

用原始病料和第三代病料接种鸡胚尿囊腔，不引起死亡，尿囊液无血凝性，接种地鼠和小白鼠均无异常。

接种地鼠肾单层细胞，观察7d，未引起细胞病变，在猪肾传代细胞PR15 上，育传6 代，每代均有部分细胞管发生病情，但尚未有规律性，用盖片上培养的细胞作吖啶橙染色感染细胞原浆内有火红色颗粒，在对照细胞原浆内虽也有黄色颗粒，但数量较少。

6 猪瘟试验诊断

6.1 兔体交叉免疫试验

（1）用3 头混合的病料和人工感染第三代病料分别接种3只试验兔，14d 后用猪瘟兔化毒1:20 乳剂，每兔静注1ml:另3只未接种过病料的健兔接种同样剂量的兔化毒作为不免疫对照，另一家兔曾以兔化猪瘟冻苗接种，观察1 周末的体温变化，也同时接种新鲜兔毒，作为免疫对照。

（2）结果未免疫对照的3 只兔子均出现定型热反应，免疫对照的1 只兔子无热反应，接种原始病料的3 只试验兔，除其中5 号兔呈轻型热反应外，余2 只兔均无反应。接种第三代病料的3 只试验兔攻毒后均无反应[3]。

6.2 猪体免疫试验

（1）4 头健康未经猪瘟疫苗注射的体重0～15kg 断乳仔猪。其中2 头用猪瘟兔化弱毒苗1:20 稀释，每头肌肉注射1ml。观察13d 均无反应。另2 头未免疫对照猪。用病猪第二代肝、肾和淋巴结等量混合磨细，用含有青、链、庆大霉素的液体作1:5 稀释，经3000r/min，远心分离3min，取上清液，每头肌肉注射3ml。

（2）结果发现，经猪瘟兔化疫苗免疫的2 头猪观察15d 无体温反应，精神食欲均无异常。而2 头未免疫的猪均于第3 天体温升高，食欲停止，精神委顿。未免疫对照猪1 头于接种后第6 天体温骤降而致死，病变：肾色泽较浅有少数瘀血斑，胃底出血，小肠出血，其他器官变化不大，另1 头猪体温稽留2d后恢复正常，但食欲和精神至发病后18d 恢复正常。

6.3 新城疫病毒强化试验

（1）猪瘟病毒能加强病毒在猪睾丸细胞上的复制，称为新城疫病毒强化现象，现已成为测定猪瘟病毒及其抗体的有效方法，为了证明猪高温病是否为猪瘟，用猪肾传代细胞进行新城疫病毒强化试验。

（2）猪肾传代细胞，营养液加等量0.5%乳蛋白水解物，犊血清15%，含青、链霉素100 单位/ml，庆大霉素40 单位/ml。维持液成分同前，唯犊血清减为5%。

（3）已形成单层的猪肾传代细胞倾去维持液，每瓶加入无菌0.02%eDTA 溶液，使其盖满细胞面，平放置37℃消化15～30min，轻轻振摇使细胞层脱离瓶壁，吸出并混合于无菌离心管内，1500r/min，5min 后弃上清。沉压的细胞加入少量营养液吹吸冲碎，按每瓶可分装3～4 瓶计算，将细胞悬于所需营养液中，分装无菌小瓶，每瓶1ml，在分装细胞的同时接种2 株待试病毒，一株猪野毒，一株猪瘟兔化弱毒，所有病毒材料均稀释为1:100，1:1000 两个稀释度，每个稀释度各接种细胞培养分瓶，每毫升0.1ml，余分瓶不接种作为对照，于37℃培养4d，细胞已长成单层。在更换维持液时，每组各取3 瓶接种新城病毒(1:1000、1ml)，另两瓶不接种新城病毒做对照。继续培养4d，每天观察病变。

（4）新城疫病毒强化试验结果表明，无论原始病料或经人工感染的第三代毒均与猪瘟野毒一样能强化新城疫病毒，证明这些病料中均含有猪瘟病毒。猪瘟兔化毒由于本身能引起PR15 的细胞病变，均未能判定其是否能强化新城疫病毒。

（5）为了测定原始病料的3 头病猪是否均含猪瘟病毒，进一步用3 头病猪的病料分开进行净化试验，也均获得了阳性结果。

7 讨论

（1）猪高温病经多次细菌学检查均未分离出致病菌，结合临床应用抗生素无效可以排除细菌性传染病。因此，本实验室进行病毒学检查。

（2）病料经鸡胚接种，不能引起鸡胚病变和死亡，冻死后采尿囊液作鸡红血球凝集试验均为阴性；感染地鼠、小白鼠均无异常，地鼠肾单层细胞上不出现病变，说明本病毒非粘病毒，副粘病毒和其他容易人工培养的病毒。

（3）鉴于本病在流行病学、临床症状和病理剖解等方面都不像猪瘟，因此，开始时并未考虑作猪瘟诊断，但当原始病料在易感仔猪体内传至第3 代时出现了明显的体温反应、临床表现、病理变化和白细胞减少，左移等血象变化均与猪瘟极为相似，均在以后着重进行了猪瘟试验诊断。

（4）兔体交叉免疫试验是较常应用的猪瘟试验诊断方法，其特异性和敏感性较高，缺点是兔个体差异大。本试验中3 只未接种病料的对照兔均出现标准的定型热反应，而接种原始病料的3 只试验免在兔化毒攻击后除其中1 只兔有轻度热反应外，其余5 只兔均无热反应(其体温波动均在正常范围以内)。接种试验兔和接种兔化毒的阳性对照兔，在攻毒后的体温更为稳定。所有试验兔与事先未接种的阴性对照兔的差异明显，而与阳性对照结果符合，证明原始病料中含有猪瘟病毒。

（5）猪体免疫试验是诊断猪瘟的最可靠方法。用兔毒免疫的猪接种病料后不出现任何可见反应，证明接种的病料中不含猪瘟以外的其他病毒。而未经猪瘟免疫的猪接种该病料后出现了典型的猪疫症状及病理变化，证明该病料中所含的病原体是猪瘟而不是其他病毒。虽然用以接种的病料采自实验室继代的2 代猪，而不是采自原始病料，但2 代猪所接种的病料是直接采自3 头病猪的混合物，如有2 头不是猪瘟只有1 头混有猪瘟，那么非猪瘟的病原在第二代猪体中也应有所繁殖，以之注射于猪瘟免疫的仔猪后至少也应出现反应。推断采来的3 头病猪的材料中只有猪瘟病毒而不含其他病原。

（6）新城疫病毒强化试验在方法上还需要进一步摸索，试验表明，原始毒和猪瘟野毒一样均能强化新城疫病毒，特别是后一次试验，将3 头原始病料分开进行强化试验，结果均为阳性，这样就进一步排除了猪瘟继发或并发的可能，因3 头病猪来自不同养殖户，全部继发或并发猪瘟的可能性是不存在的。

（7）所流行的猪高温病发病率比通常发生的猪瘟低，病情缓和，死亡率也较低，可能是由一株毒力上开始减弱的猪瘟病毒所引起，但在实验室人工继代3 代就可见毒力明显壮复，可知该病毒的毒力尚在变异中。

（8）关于抗原性的变异，从兔体免疫试验看，原始免疫的兔有1 只呈轻型热反应，其余2 只体温波动较大，兔攻毒后体温较稳定，这是一个迹象，另外，在猪体免疫试验中，免疫猪所用兔化毒的剂量远较常规应用者大，故用毒攻毒后全保护，但在流行病学调查中发现有不少病猪是打过猪瘟兔化毒的，由这些迹象分析，所流行的毒力开始减弱的猪瘟病毒在抗原方面也有可能发生一些变异。