实验兔胸腺取材及检测方法*

方 慧 田岳凤

(1.运城第一医院康复医学科，运城 044000)(2.山西中医药大学第二临床学院，晋中 030619)

胸腺是T细胞发育成熟的关键，机体重要的中枢免疫器官之一。它还可以分泌多种胸腺激素及激素类物质，具内分泌功能。胸腺对于机体的健康有着十分重要的作用，一些免疫力功能低下或自身免疫疾病、肿瘤的发生及衰老等与胸腺密切相关[1]。兔在生物医学中应用广泛，主要用于免疫学、生物制品、发热解热和检测致热源、生殖生理和避孕药、眼科学、骨骼等多个方面[2]。目前兔在免疫学的应用中，关于其胸腺的论述较少，这可能与其退化和取材的困难性有关。因此本文就兔胸腺的发育退化过程及取材时的注意事项叙述如下，希望可以对一些研究有所帮助。

1 材料和方法

1.1 动物分组

清洁级大耳白兔8只，雌雄各半，体质量(2.18±0.23)kg，由北京昌扬西山养殖场提供【动物合格证号：SCXK(京)2016-0007】，饲养于山西中医药大学科研楼，实验室温度20～25 ℃，相对湿度45%～65 %，随机分为空白组、免疫抑制模型组，每组4只。

1.2 仪器和试剂

注射用环磷酰胺(江苏盛迪医药有限公司)(200 mg/瓶，国药准字H32020857)，恒温箱(三洋，MIR-262)，石蜡包埋机(孝感亚光，YB-6LF)，显微镜(奥林巴斯，BX51)。

1.3 造模及取材

实验以环磷酰胺制备免疫抑制模型，造模方法以60 mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺，连续造模7 d[7]，空白组连续腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液，饲养20 d后进行胸腺组织取材。

2 结果

2.1 一般形态结果

一般形态结果显示，胸腺多呈左、右双叶状，质地偏硬，与脂肪组织比更有韧性。其中空白组胸腺多呈淡粉色，环磷酰胺模型组胸腺多呈白色。

2.2 HE染色结果

图1 兔胸腺HE染色切片(×200)Fig.1 HE staining of thymus from rabbits (×200)

为了确定取材的结果及胸腺退化的程度，对其进行HE染色，如图1：空白组胸腺结构完整，皮髓界限清楚，皮质淋巴细胞密集；免疫抑制模型组胸腺失去正常结构，皮髓界限不清，皮质淋巴细胞减少，周围脂肪组织多。

3 讨论

3.1 兔胸腺发育退化过程

胸腺是机体重要的中枢免疫器官，动物和人的胸腺随着年龄的增长均会逐渐萎缩退化，主要表现为脂肪组织增多、体积变小和初始T淋巴细胞输出减少，从而导致机体免疫力下降，增加了患感染、肿瘤和自身免疫性疾病的风险。胸腺这种随年龄增长而发生的形态改变和功能退化被称为胸腺增龄性萎缩[3-4]。

兔胸腺起于颈部，分为左、右两叶，大部分位于胸腔前纵隔，在胸骨后面并紧靠心脏，表面有薄层结缔组织被膜(图2)。在兔的生长发育期间，幼兔的胸腺最为明显，长度约2.5 cm，宽2 cm，厚4 mm。重量为2.3～2.8 g，占总体质量的百分比也最高，但是随着年龄的增加，该器官也发生着明显的退行性变化, 主要表现为出现大部分脂肪组织，仅剩下极少的胸腺皮质或髓质，成兔的胸腺几乎全被脂肪和结缔组织填充[5]。

图2 兔胸腺的解剖位置Fig.2 Anatomical location of rabbit thymus

3.2 具体年龄对应的胸腺状况

兔从出生到断奶的时期称为仔兔期，一般为0～35 d；断奶当天至3月龄的时期称为幼兔期，整3月龄的家兔平均体质量在1.7～2.0 kg；满3月龄至初配前称为中兔期也称后备兔，这个时期的家兔4月龄平均体质量2.0～2.3 kg，5月龄平均体质量在2.5～2.8 kg。一般培养、毒性实验多使用45～90 d的幼兔，慢性实验使用90～180 d的兔[6]。就目前取材的胸腺发现：尚未开始退化的胸腺呈粉红色，开始退化之后的胸腺，颜色偏白，这与其大量的脂肪组织增多有关，可能颜色的变化能说明其退化的程度(图3)。

图3 兔胸腺组织Fig.3 Rabbit thymus tissue

3.3 取材要点及注意事项

(1)胸腺位置准确定位

将兔麻醉后仰卧位置捆绑固定于兔解剖台上，因为家兔的胸腺位于胸骨后面并紧靠心脏，基本位于第1～3肋骨处，所以我们找取胸腺时多用手术刀和手术剪沿腹白线向上打开胸腔，先暴露其心脏，发现心脏后继续向上剪开胸骨，注意此时的动作一定要小心，防止伤及胸腺。在胸腔充分暴露后，多数情况下会发现胸腺就覆盖在心脏上，呈左、右双叶状，还未出现退化情况的胸腺呈淡粉色，已退化的胸腺因组织中脂肪不断增多其颜色多偏白；还有一些情况会发现胸腺没有覆盖在心脏上而是紧贴于胸骨，但是也呈双叶状；此外有极少例可能是胸腺已经完全退化,并没有找到胸腺组织。

(2)明确胸腺的分布区域

用手术镊夹起覆盖于心脏上方或胸骨后方的胸腺，稍微向上挑起，会发现它起自于兔颈部的位置，肉眼仔细观察胸腺起始的这个区域，为之后的取材打下基础，防止取材到一半不知道这个部分是不是自己要的。因为胸腺与纵隔脂肪组织的真正界限比较难以确定，尤其是已经发生退化的胸腺组织。

(3)取材方法

因为胸腺表面有薄层结缔组织被膜，让其紧贴于心脏上方或胸骨后方，因此在取材的时候需要用小的手术剪将其分离，分离后的重点就在于胸腺和颈部连接的部位的处理，这个时候千万要小心，防止出血过多。这是因为胸腺血液供应主要来自于几条从胸腺四周穿越被膜进入小叶间隔的小动脉[8]。其血供虽然不是很丰富，但是如果不注意，沿着胸腺与颈部的连接部位随意处理，会引起一定的出血，而兔胸腺的颜色呈粉红色或者淡白色，着色浅而轻薄，这些出血会和胸腺组织的颜色发生变化，与周围组织难以区分，造成接下来分离的困难。

取材完毕后，将取下的标本放置于0.9%氯化钠溶液中，把表面的血液清洗后用滤纸擦拭干净。接下来，用手术镊和手术剪进行下一步的工作，因为已经发生退化的胸腺组织与纵隔脂肪组织的界限比较难以区分，如果对自己取到的组织不太确定可以用自己的双手的拇指和食指进行揉捏感受一下它的质地，正常情况下胸腺的质地偏硬比较有韧性，而脂肪组织的质地偏软，没什么韧性，可以根据此对取到的标本进行进一步的确认。

综上可知，随着年龄增长，兔胸腺会不断退化，有的甚至消失，并且经环磷酰胺制备的免疫抑制模型后，兔胸腺组织形态也发生明显的不可逆的改变。