GC-MS法测定吡拉西坦氯化钠注射液中21种邻苯二甲酸酯类塑化剂

张迪，岳青阳，李尚颖，隋晓璠*（1.辽宁省检验检测认证中心，沈阳 110036；2.辽宁省药品检验检测院/国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室，沈阳 110036）

邻苯二甲酸酯类（PAEs）塑化剂是世界上应用最广泛的塑化剂。毒理学研究发现，PAEs 的急性毒性较小，但可以干扰人类和其他动物的内分泌，具有雌激素活性，对人类具有生殖毒性、胚胎毒性和发育毒性等危害，长期低剂量接触，其危害不容忽视[1-2]，欧盟、美国、中国已经先后将PAEs 列入优先控制污染物的黑名单[3-4]。

密封件一方面应满足包装系统对密封性的要求，另一方面还应与药品具有良好的相容性，即不可引入存在安全性风险的浸出物。生胶、橡胶颗粒、胶塞、聚丙烯塑料瓶和软袋的生产过程中常添加塑化剂，从而带来了塑化剂迁移入药物的风险，注射剂作为高风险制剂，有必要控制塑化剂的迁入。对产品塑化剂的迁移量考察是注射剂与其包材相容的要求，也为选择优良的胶塞和包装材料提供了参考。塑化剂现有的检测方法主要有HPLC 法[5-6]、HPLC-MS 法[7]和GC-MS 法[8-9]。本试验采用GC-MS 法同时测定吡拉西坦氯化钠注射液中21 种PAEs 的含量，为吡拉西坦氯化钠注射液的包材相容性研究提供参考，也为其他注射剂的塑化剂迁移测定提供了一种通用的检测方法。

1 材料

1.1 仪器

气相色谱-质谱联用仪（气相色谱仪：日本岛津公司GC2030，质谱检测器：日本岛津公司TQ8050）。电子天平（XP205 美国METTLER TOLEDO 公司，精度：0.000 01 g）。

1.2 试药

邻苯二甲酸二甲酯（DMP，批号：G163559，纯度：99.9%）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP，批号：G1006212，纯度：100%）、邻苯二甲酸二异丙酯（DIPRP，批号：G1020025，纯度：100%）、邻苯二甲酸二烯丙酯（DAP，批号：G165742，纯度：98.3%）、邻苯二甲酸二丙酯（DPRP，批号：G145205，纯度：99.5%）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP，批号：G141696，纯度：99.5%）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP，批号：G167183，纯度：99.4%）、邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP，批号：G165429，纯度：98%）、邻苯二甲酸二异戊酯（DIPP，批号：G141698，纯度：99.4%）、邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP， 批号：G146996， 纯度：99.7%）、邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP，批号：G168054，纯度：91.7%）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP， 批号：G159523， 纯度：98.9%）、 邻苯二甲酸二己酯（DHXP，批号：G141694，纯度：97.9%）、邻苯二甲酸丁基苄基酯（BBP，批号：G132280，纯度：98.5%）、邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP，批号：G168879，纯度：99.3%）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP，批号：G141690，纯度：98.7%）、邻苯二甲酸二庚酯（DHP，批号：G166356，纯度：99.2%）、邻苯二甲酸二（2-乙基）乙酯（DEHP，批号：G142368，纯度：99.3%）、邻苯二甲酸二苯酯（DPHP，批号：G795655，纯度：99.4%）、邻苯二甲酸二正辛酯（DNOP，批号：G124932，纯度：99.3%）、邻苯二甲酸二壬酯（DNP，批号：G132274，纯度：97.9%）（德国Dr.Ehrenstorfer 公司）。正己烷（色谱纯，美国Fisher 公司）。氦气（纯度＞99.99%）

31 批吡拉西坦氯化钠注射液，来自9 个生产企业，均为2021年国家药品抽验计划抽取的样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[8-9]

色谱柱为DB-5MS 毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）。柱温为程序升温：初始温度为60 ℃，维持1 min 后，以20℃·min－1的速率升至220 ℃，维持1 min，再以5℃·min－1的速率升至250℃，维持1 min，再以20℃·min－1的速率升至290 ℃，维持20 min；进样口温度为260℃；进样量为1 μL；载气为氦气，流速为1 mL·min－1；电离方式：电子轰击源（EI）；离子源温度：230 ℃；采集模式：MRM；离子源电压0.99 kV；溶剂延迟：3 min。21 种PAEs 定性定量离子见表1。

表1 21 种PAEs 定性定量离子表Tab 1 Qualitative and quantitative ions in the 21 phthalic acid ester plasticizer

2.2 对照品储备液的制备

取21种塑化剂对照品各约10 mg，精密称定，置100 mL 量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品100 mL，置分液漏斗中，精密加正己烷50 mL，振摇20 min 后，取正己烷层，40℃以下蒸干后，精密加正己烷2 mL 使溶解，摇匀，0.22 μm 滤膜滤过，即得。

2.4 系统适用性试验

精密量取混合对照品储备液适量，用正己烷稀释至质量浓度为200 ng·mL－1的溶液作为系统适用性溶液，以正己烷作为空白溶液，取系统适用性溶液、空白溶液供试品溶液，进样测定，记录色谱图，见图1。结果表明，溶剂不干扰21种PAEs 的测定。

图1 系统适用性溶液（A）、空白溶液（B）和供试品溶液（C）的混合离子色谱图Fig 1 Mixed ion chromatogram of the reference substance（A），blank solution（B），and sample solution（C）

2.5 线性关系考察

精密量取混合对照品储备液适量，用正己烷逐步稀释至5、10、20、10、200、500、1000、2000 ng·mL－1，进样测定，各组分的线性方程、相关系数与线性范围结果见表2。由表2 可知，各组分在相应质量浓度与峰面积线性关系良好。

2.6 检测限和定量限

精密量取混合对照品储备液，用正己烷逐步稀释，进样测定，记录色谱图，当信噪比（S/N）≈3 时，为其检测限，当S/N≈10 时，为其定量限，结果见表2。由表2 可知，各成分的检测限均在1 ～20 ng·mL－1，定量限均在3 ～60 ng·mL－1。

表2 21 种PAEs 线性关系、检测限和定量限Tab 2 Linear relationship，detection limit and quantitation limit of the 21 phthalic acid ester plasticizer

2.7 加样回收试验

分别取21 种PAEs 对照品约10 mg，置100 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液，分别取对照品储备液适量，精密加入吡拉西坦氯化钠注射液100 mL，按“2.3”项下方法进行处理，分别制得低、中、高质量浓度（分别为200、500、800 ng·mL－1）的加样回收率供试品溶液，进样测定，计算各浓度的回收率。结果表明，低、中、高质量浓度的加样回收率在90.4%～103.0%，RSD在1.5%～5.3%。

2.8 重复性

取本品，按“2.7”项下方法配制重复性试验样品溶液（50 ng·mL－1），共6 份，进样测定，将测定结果代入标准曲线计算21 种PAEs 含量。结果表明，各成分重复性良好，RSD为2.9%～4.6%。

2.9 稳定性

取重复性样品溶液，分别在0、2、4、8、12 h 时进样测定。结果表明，以正己烷为溶剂，21种PAEs 在12 h 内稳定，各成分峰面积的RSD为3.6%～5.3%。

2.10 测定结果

取本品，按“2.3”项下方法进行处理，进样测定。同时考察在40 ℃条件下倒置放置1 个月后样品中21 种PAEs 的含量。结果表明，31 批吡拉西坦氯化钠注射液中21 种PAEs 均小于检测限，40 ℃条件下倒置放置1 个月后，21 种PAEs 均未检出。

3 讨论

根据化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则，21 种PAEs 均按每日注射最大日暴露量（PDE）1.5 μg·d－1计，对应的分析评价阈值（AET）为1.5 μg·d－1。31 批样品在40 ℃条件下倒置放置1 个月后，21 种PAEs 均未检出。说明吡拉西坦氯化钠注射液中的塑化剂无安全风险。