三黄胰瘅膏对重症急性胰腺炎模型大鼠肠黏膜屏障功能及血清内毒素、二胺氧化酶、D-乳酸的影响

向 未，陈 辉，姜朝丽，蒋亚玲，王天刚，王星月，刘菊容

（西南医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000）

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是一种病情危重、进展极其凶险的常见消化内科急症，病死率高达30%～50%［1］。肠道是危重疾病应激反应的中心器官之一，现已证实SAP早期即可发生肠屏障功能障碍（IBFD），而IBFD则是SAP诱发和加重并发症，且是死亡率高的原因所在［2-4］。前期临床研究表明［5］，我科治疗胰腺炎的外用协定处方三黄胰瘅散（药物组成同三黄胰瘅膏）治疗急性胰腺炎有显著效果，能缩短急性胰腺炎患者的腹痛消失时间、血清炎性指标恢复正常时间及住院时间。本课题采用牛磺胆酸诱导大鼠SAP模型，观察三黄胰瘅膏对SAP大鼠肠黏膜屏障以及血清内毒素、二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）的影响，观察三黄胰瘅膏治疗SAP的可能作用机制，从而为其治疗SAP提供实验室证据。

1 材料与方法

实验动物：清洁级健康SD大鼠60只，全为雄性，体质量300±50g，鼠龄9～10周，购于南医科大学动物实验中心［实验动物许可证号SYXK（川）2019-202］，于西南医科大学动物实验中心动物房饲养，温度17℃～23℃，相对湿度50%～70%，室内通风良好，每日光照9～12h，适应性喂养1周。动物实验方法符合西南医科大学动物实验伦理规程。

实验药物：三黄胰瘅膏由生大黄、栀子、白芷、白及、乌梅、薄荷、生黄芪、连翘、甘遂、皂角刺组成（西南医科大学附属中医医院制剂室提供），外敷腹部（大鼠剑突到耻骨联合，两腋前线之间），厚度约5mm（剂量0.65g/kg）。

主要试剂与仪器：①10%水合氯醛，美国Sigma公司；3.5%牛磺胆酸溶液，美国Sigma 公司；葡聚糖试剂盒，上海酶联生物科技有限公司；MTL ELISA，美国DAB公司；脂多糖检测试剂盒，北京普博斯生物有限公司。②全自动珊顿切片机，Thermo Electron Corporation；50i双目显微镜，尼康；全自动珊顿脱水机，Thermo Electron Corporation；珊顿组织石蜡包埋机，Thermo Electron Corporation，全自动珊顿组织切片染色机 Thermo Electron Corporation。

造模与给药：选取体质量相当的雄性SD大鼠60只，随机分为模型组、治疗组和假手术组各20只。适应性喂养1周，给予以下处理：模型组、治疗组制备SAP模型，造模方法参考改良AhoHJ法［6］。造模成功后，治疗组给予三黄胰瘅膏外敷腹部，日1次；假手术组，开腹后仅翻动肠管，不制备SAP模型，只注射生理盐水。

3组动物均禁食、不禁饮。

标本采集与检测：①血清淀粉酶测定：各时间点处死大鼠前行心脏取血，送西南医科大学附属中医医院检验科检测；②血清内毒素测定：各时间点处死大鼠前行心脏取血，按革兰氏阴性菌检测试剂盒说明操作检测；③血清DAO及D-LA浓度测定：各时间点处死大鼠前行心脏取血，采用ELISA双抗夹心法检测。

统计学处理：使用SPSS 22.0统计软件。计量资料以（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间用t检验，作差异显著性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清淀粉酶的影响见表1。

表1 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清淀粉酶的影响 （±s）

表1 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清淀粉酶的影响 （±s）

注：与假手术组比较，#P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05。

组别 6h 12h 24h 48h假手术组 1678.10±124.14 1682.21±103.45 1102.34±67.46 972.16± 59.45模型组 8656.43±1267.53# 14643.20±1346.47# 19769.50±1493.64# 9543.34±914.32#治疗组 8942.24±900.37* 2454.65±287.54* 1357.39±102.42* 998.43± 69.39*

三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清内毒素的影响见表2。

表2 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清内毒素的影响 （±s）

表2 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清内毒素的影响 （±s）

注：与假手术组比较，#P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05。

组别 6h 12h 24h 48h假手术组 0.22±0.09 0.22±0.08 0.22±0.10 0.22±0.07模型组 1.12±0.11#2.67±0.15#3.98±0.28#4.74±0.23#治疗组 0.88±0.10*2.02±0.12*2.95±0.13*3.06±0.15*

三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清DA0浓度的影响见表3。

表3 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清DAO浓度的影响 （mg/L，±s）

表3 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清DAO浓度的影响 （mg/L，±s）

注：与假手术组比较，#P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05。

组别 6h 12h 24h 48h假手术组 0.34±0.08 0.33±0.07 0.35±0.08 0.32±0.06模型组 1.11±0.10#1.68±0.18#2.99±0.28#3.76±0.23#治疗组 0.98±0.10*1.02±0.16*1.43±0.13*1.06±0.15*

三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清D-乳酸（D-LA）浓度的影响见表4。

表4 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清D-LA浓度的影响 （U/L，±s）

表4 三黄胰瘅膏对SAP大鼠血清D-LA浓度的影响 （U/L，±s）

注：与假手术组比较，#P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05。

组别 6h 12h 24h 48h假手术组 1.12±0.04 1.13±0.03 1.15±0.04 1.10±0.05模型组 1.50±0.12#1.48±0.18#1.49±0.18#1.56±0.13#治疗组 1.28±0.10*1.22±0.16*1.23±0.13*1.26±0.15*

三黄胰瘅膏对SAP大鼠小肠黏膜的影响。光镜下观察显示：假手术组的小肠黏膜绒毛结构完整，黏膜绒毛上皮呈高柱状，无水肿、炎性细胞浸润。模型组小肠黏膜受损明显，且随着时间延长加重，可见小肠绒毛充血水肿明显伴出血，大量中性粒细胞浸润、杯状细胞减少，顶端上皮坏死、脱落，溃疡形成。第6、12h、24h、48h治疗组与模型组比较损害有所减轻。而治疗组与同时间点的模型组比较，随时间延长肠绒毛充血水肿、坏死、炎细胞浸润均有改善。表明了三黄胰瘅膏可降低SAP大鼠小肠黏膜损伤。

3 讨 论

SAP是一种内科疾病，根据本病病因、临床表现、病理变化特点，目前一些学者［7-8］提出，SAP可以看作“内痈”，中医可以按“内痈”论治。根据“内痈”理论及SAP的中医病机，中医外治治疗SAP以通里攻下、清热解毒、散瘀止痛、拔毒外出为治疗大法。

三黄胰瘅膏方中以大黄为君药。大黄苦寒，具有泻下攻积、清热解毒、活血化瘀的功效。黄栀子、连翘、甘遂为臣药。黄栀子苦寒，具有清热解毒、消肿止痛的功效，擅长清三焦之热；连翘苦、微辛，寒，具有清热解毒、消痈散结的功效，善治热毒疮痈、瘰疬，《珍珠囊》称之为“疮家圣药”。二药合用，增强大黄的清热解毒之功；甘遂苦寒，有小毒，具有泻水逐饮，消肿散结的功效，善行经隧之水湿，使体内潴留之水饮从二便排出，与大黄合用，增强了大黄的泻下攻积作用。皂角刺、黄芪为佐药。皂角刺辛温，能消肿排脓。黄芪甘，微温，具有补气升阳，利水消肿，托毒排脓，敛疮生肌之功。黄芪被被誉为“疮痈圣药”，反佐黄芪，增强机体的抗病能力，以“安先未受邪之地”。白芷辛，温，消肿排脓。乌梅酸涩，外敷消疮毒。白及苦涩，消肿生肌而截毒束毒。薄荷辛凉，芳香辛散，《新修本草》：“……主心腹胀满”。诸药合用，共奏通里攻下、清热解毒、散瘀止痛、拔毒外出之功。本方清温并用，旨在疏通血脉，调和气血，避免形成“气脉得寒则不行，瘀血得寒则不散，瘀肉得寒则不溃，新肉得寒则不生”的不良结局。

D-LA和内毒素均由肠道细菌产生，当肠黏膜屏障功能受到破坏损伤时，大量D-LA与内毒素才释放入血，因此D-LA和内毒素常作为肠黏膜屏障损伤的早期监测指标。DAO广泛存在于哺乳动物小肠黏膜绒毛上皮层，是小肠黏膜上皮细胞内高活性的酶，当在肠黏膜屏障功能受损时则会导致机体出现DAO慢性升高［9］。文献研究显示［10］，血清DAO与D-LA用于评估肠道功能有很好的价值。因此，本课题将DAO、D-LA、内毒素作为SAP大鼠肠黏膜屏障的损伤指标。本研究结果显示，外敷三黄胰瘅膏能够改善重症急性胰腺炎模型大鼠小肠黏膜损伤，降低血清淀粉酶，降低大鼠血清DAO、D-LA、内毒素含量。

综上所述，外敷三黄胰瘅膏治疗SAP大鼠模型，能够改善重症急性胰腺炎模型大鼠小肠黏膜损伤，降低血清淀粉酶，降低大鼠血清DAO、D-LA、内毒素含量，其可能的作用机制为降低大鼠血清DAO、D-LA、内毒素含量。