ICSI周期中卵母细胞滑面内质网聚集体异常与胚胎发育及妊娠结局

王小飞 周 燕 涂铵素 钟 影*

1.四川省成都市锦江区妇幼保健院(610016)；2.四川省成都西囡妇科医院

卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗中，胚胎质量是影响妊娠结局的重要因素[1]。研究显示[2]，卵母细胞的形态学指标，例如胞浆滑面内质网以及中央胞浆颗粒化均会影响胚胎形成和胚胎质量。因此，在临床治疗中，卵母细胞形态学评估对预测不孕症治疗效果以及妊娠结局有积极意义。卵母细胞内滑面内质网聚集(sERC)是卵母细胞胞浆内的一种异常滑面内质网聚集体，主要表现为卵母细胞内出现大聚集体，外形呈圆形或扁平型。既往研究证实[3-4]，卵母细胞出现sERC可引起受精、胚胎发育异常，导致妊娠率降低以及出现新生儿异常。2011年欧洲人类生殖与胚胎学会专家建议[5]舍弃sERC异常的胚胎。但目前临床对于sERC异常的胚胎细胞还未形成统一认识。研究显示[6-7]，43%的治疗中心未舍弃sERC异常的卵母细胞，且sERC异常的卵母细胞行胚胎移植后仍可分娩正常健康的新生儿。因此，sERC异常的卵母细胞是否会造成胚胎发育以及妊娠结局异常，有待进一步研究[8]。本研究通过分析sERC对胚胎发育及妊娠结局的影响，为临床治疗提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用回顾性研究，以2020年1月—2020年7月本院行ICSI助孕治疗的患者作为研究对象。纳入标准：①符合ICSI助孕治疗；②新鲜取卵周期；③年龄30～40岁。排除标准：①常规行IVF治疗；②行睾丸或附睾穿刺取精；③多囊卵巢综合征；④术前遗传学筛查。患者均签署知情同意书，本研究经院伦理委员会论证通过。

1.2 研究方法

1.2.1控制性促排卵及取卵所有患者按照促排方案，使用GnRH激动剂(果纳芬，瑞士Merck Serono公司)75～225 IU/d以及GnRH拮抗剂(西曲瑞克，意大利Merck KGaA公司)0.25 mg/d皮下注射，再次使用卵泡刺激素刺激患者卵泡，根据B超监测和血清雌二醇水平适当调整药物剂量。当患者主导卵泡直径达到18～20mm，行人绒毛膜性腺刺激素(艾泽，意大利Merck KGaA公司)250 μg皮下注射，38h后行阴道卵泡穿刺获取卵母细胞[9]。

1.2.2sERC异常评估获取卵细胞2h后，使用80IU/ml透明质酸酶(美国Irvine Scientific公司)对颗粒细胞进行消化，培养箱培养2h，行ICSI操作。在倒置显微镜下对卵母细胞形态进行评估，在高倍显微镜下在细胞胞浆内呈现圆形以及扁平的盘状物但内未见液体，折光性相对较弱[10]为sERC阳性。在行ICSI操作中避免将精子注射到sERC中。

1.2.3观察指标①胚胎发育，获卵数、成熟卵率、受精率以及优胚率；②临床结局，囊胚形成率、种植率、临床妊娠率、流产率以及活产率；③活产婴儿畸形情况，主要包括多发畸形以及心血管畸形。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般情况

共纳入患者120例，年龄(35.3±2.4)岁，不孕(4.4±3.0)年，Gn用量(29.4±2.6)支，基础促黄体生成素(LH)4.11±1.20U/L。在获得患者卵母细胞后，根据卵母细胞内是否出现sERC分为sERC阳性组及sERC阴性组，两组患者年龄、不孕周期、Gn用量及基础LH水平无差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组基线资料比较

2.2 两组胚胎发育情况

两组获卵数、成熟卵率、受精率以及优胚率均未见差异(均P>0.05)。见表2。

表2 两组胚胎发育指标比较[例(%)]

2.3 两组临床结局

两组种植率无差异(P>0.05)，sERC阳性组囊胚形成率、临床妊娠率、活产率均低于sERC阴性组，流产率高于sERC阴性组(均P<0.05)。见表3。

表3 两组临床结局分析[例(%)]

2.4 两组活产婴儿畸形情况

sERC阳性组发生活产儿多发畸形(1例，6.7%)以及心血管畸形(3例，20.0%)比例均高sERC阴性组(0例，0.0%)(1例，2.9%)(χ2=4.365，P=0.036)。

3 讨论

卵母细胞周围的颗粒细胞，在卵母细胞微环境的维持中发挥重要作用，对受精卵以及胚胎发育有重要作用[11]。有研究[12]证实，未成熟的卵母细胞以及周边的颗粒细胞发生基因突变对妊娠结局以及胚胎发育有显著意义。但在临床治疗中，对患者临床诊断需要对卵母细胞以及周围的颗粒细胞进行共同培养后才能判定。国外研究[13]，对sERC阳性表达对胚胎发育尚存在一定争议。有研究[14]分析sERC阳性异常表达为5.4%～23.1%；在卵母细胞sERC阳性分析，主要通过对患者卵母细胞的光学显微镜下观察，但较小的sERC阳性细胞不易被发现[15]。所以临床对sERC阳性异常表达分析存在一定误差。

目前临床对于sERC阳性异常表达机制尚不清晰。有研究认为[16]，造成sERC阳性异常表达是由于患者的卵巢过度刺激造成，在HCG日雌二醇水平与sERC阳性表达情况呈显著相关性。本研究中，两组患者胚胎发育指标中的获卵数、成熟卵率、受精率以及优胚率未见差异，取卵前LH水平未见差异，所以两组患者的胚胎发育情况并不存在差异。正常生理作用下，滑面内质网会对钙离子的释放进行调节，在卵母细胞的成熟受精以及早期胚胎发育过程中发挥重要作用[17]。而sERC表达水平异常可能会刺激钙离子的异常表达，导致受精率下降。本研究中两组临床结局分析显示，sERC阳性患者的种植率、临床妊娠率、流产率以及活产率均发生异常变化。国外研究[18]显示，sERC阳性的卵母细胞分裂过程中，有丝分裂以及减数分裂的错误率高于sERC阴性卵母细胞，所以卵裂的失败可能导致胚胎染色体异常。而卵裂失败的细胞在进行滋养细胞发育过程中会形成胎盘异常，如果这些细胞继续发育会造成不良妊娠结局。本研究中出生婴儿畸形情况sERC阳性组高于sERC阴性组。虽然2011年的欧洲人类生殖与胚胎学学会的指南明确指出[5]，不应对sERC阳性的卵子进行授精，但人们对SERa卵母细胞的看法，在丢弃与利用之间摇摆不定。相比自然周期，进行ICSI操作发生印迹缺陷风险升高；同样地，sERC阳性患者卵母细胞减数分裂及有丝分裂过程中产生的错误风险也升高。在临床操作中很难判断印记缺陷是由于实验方案造成，还是sERC阳性造成。因此，临床治疗中对相关指南[5]提出的舍弃sERC阳性卵母细胞的疑虑也具有一定依据。但就目前研究而言，sERC卵母细胞阳性患者的畸形情况呈升高趋势，基于此，我们建议在临床允许情况下，对sERC阳性的卵母细胞采取舍弃的措施。

本研究尚存在不足，包括样本数量太少，研究中可能存在一定的误差，同时纳入研究对象时未对母体情况及精子质量进行限制，不能排除母体影响妊娠结局的因素，因此还需要大样本、多中心研究和更加全面的纳入和排除标准来证实本研究结果。此外，sERC形成的分子机制以及对卵母细胞和胚胎的影响还有待于进一步研究, 对sERC阳性卵母细胞来源的婴儿发育情况和安全性还需进行多中心、长期随访观察。

综上所述，卵母细胞sERC异常表达对于胚胎发育及妊娠结局有一定影响，建议临床允许情况下，以舍弃sERC阳性的卵母细胞为宜。