地中海贫血血液学筛查与基因检测结果的一致性分析

陈晓静

（深圳大学总医院检验科，广东 深圳 518055）

0 引言

地中海贫血（简称“地贫”）是一组遗传性溶血性贫血疾病，该病好发于东南亚以及我国南方等地区，在我国尤其是广东、广西等地区发病率较高，给社会和家庭造成了很大的负担[1]。在广东和广西地区，α地贫缺失基因型比例较高的是 -α4.2、-α3.7和 -SEA[2]；而 β 地中海贫血，其突变型高达200多种，在中国人群中已被报道的大约有46种[3]。由于我国南方地区人口较多，且地贫基因检测成本相对较高，不太适合用于大规模筛查，因此，建立适应特定地区的地中海贫血血液学筛查指标很有必要。本研究以地贫基因检测结果为标准，评价平均红细胞体积（MCV）和平均红细胞血红蛋白量（MCH）等血液学指标与地贫基因结果的一致性，并通过受试者工作特征( ROC)曲线评估MCV和MCH在筛查地中海贫血中的价值。

1 资料与方法

1.1 资料来源

收集深圳大学总医院2018年6月至2022年1月确诊为地贫患者130例，为“地贫组”（其中“α地贫组”78例，“β地贫组”52例），男性 61例，女性69例，平均年龄27岁；另收集130例地贫基因阴性者，男性62例，女性68例，平均年龄30岁，有28例血清铁或者血清铁蛋白减低，临床诊断为缺铁性贫血，其余102例作为“对照组”。“地贫组”及“对照组”患者性别、年龄差异无统计学意义。

1.2 观察指标与检测方法

血常规五分类（包括MCV、MCH、RDW-CV等指标）检测使用Sysmex-XN9000全自动血细胞分析仪及相关配套试剂，血清铁蛋白检测使用罗氏Cobas 702 及相关配套试剂，地贫基因扩增使用仪器为ABI2720基因扩增仪，试剂来源为深圳亚能生物技术有限公司，操作严格按照实验室SOP及仪器操作规程，其中α缺失及β突变使用邦德胜的第三方质控品。

由于试剂盒检测局限性，某些临床少见β突变类型未设正常对照，检测结果不能区分纯合突变或杂合突变，故送深圳亚能生物技术有限公司进行测序，以确认基因型。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 地贫基因检测结果

130例地贫患者中， α-地中海贫血缺失型78例，其中 --SEA/αα占68%；β-地中海贫血突变型52例，其中654M和41-42M占比较大。

2.2 全血细胞分析结果

130例地贫基因阴性者中，有28例血清铁或者血清铁蛋白减低，临床诊断为缺铁性贫血，其余102例作为“对照组”。将“对照组”“α地贫组”和“β地贫组”进行比较，“地贫组”MCV和MCH均低于“对照组”（P＜0.05）；“地贫组”RDW-CV 均高于“对照组”（P＜0.05）；各血液学指标检测结果见表1、表2。其中MCV的正常值为80-100 fl， MCH的正常值为27-34 pg， RDW-CV的正常值为11.5-14.5%。

表1 各组MCV、MCH、RDW-SD及RDW-CV检测结果

2.3 MCV、MCH及RDW-CV单项检测

地贫的ROC曲线分析将“对照组”与“α地贫组”进行比较，再将“对照组”与“β地贫组”进行比较，对MCV、MCH及RDW-CV分别制作ROC曲线，结果显示，MCV筛查α地贫的最佳截断值为82.4 fl，ROC 曲线下面积（AUC）为 0.968；MCV 筛查β地贫的最佳截断值为77.2 fl，ROC曲线下面积（AUC）为1.00。MCH筛查α地贫的最佳截断值为 27.9 pg，AUC为 0.985；MCH 筛查 β地贫的最佳截断值为25,7 pg，AUC为0.991。RDW-CV筛查α地贫的最佳截断值为14.1，AUC为0.926;RDW-CV筛查β地贫的最佳截断值为14.1，AUC为0.997。

表3 MCV、MCH、RDW-CV诊断地贫的效能

图1 血液学指标MCV、MCH、RDW-CV的ROC曲线(对照组- a地贫组)

图2 血液学指标MCV、MCH、RDW-CV的ROC曲线(对照组- β地贫组)

2.4 罕见型别送测序分析

确定基因型本实验室遇到一例带有CD14-15突变的患者，由于该型别为临床少见突变类型，检测系统未设正常对照，检测结果不能区分纯合突变或杂合突变，故送测序分析确认最终基因型为CD14-15杂合突变。测序结果见图3。

图3 “CD14-15杂合突变”测序结果图

3 讨论

地中海贫血是一种人类单基因疾病，同时也是常染色体隐性遗传病。α-珠蛋白基因簇定位于16号染色体16p13.3位点，β-珠蛋白基因簇定位于11号染色体11p15.3位点。地中海贫血主要是由于珠蛋白链不平衡所致，正常血红蛋白不能形成，使红细胞易被破坏，寿命缩短。其中α地中海贫血大多由于α珠蛋白基因的缺失所导致，而β地中海贫血主要是由于β珠蛋白基因的点突变引起的，影响的是β链的合成。静止型地中海贫血一般无明显临床表现，或见轻度贫血；中间型地中海贫血表现为轻度至中度贫血；重型地中海贫血则会出现贫血、肝脾肿大、黄疸等症状。

根据α链和β链数量的不平衡程度，可以将地中海贫血分为地中海贫血基因携带者、中间型地中海贫血和重型地中海贫血三类。血液学表型发生变化是地中海贫血患者的一个特征，主要表现为MCV、MCH等指标的改变，轻型地中海贫血患者可能其表型变化不大，但中间型和重型地中海贫血，其临床表型的变化则较大。所以在实验室诊断中，血液学表型分析是一线筛查指标，而基因分型因则是确诊指标[4]。

有相关文献报道，在广东地区，α-地中海贫血基因的携带率约为8.19%，β-地中海贫血的检出率约为2.54%[5]。由于我国南方地区（尤其是广东省和广西省）人口较多，且地贫基因检测成本相对较高，不太适合用于大规模筛查，所以建立适应特定地区的地中海贫血血液学筛查指标是很有必要的，但仍需优化筛查组合，且对于筛查异常者还是建议进一步做基因检测。

MCV 是反映红细胞平均体积大小的指标，MCH是反映红细胞内所含血红蛋白平均量的指标，RDW-CV 是反映红细胞大小均一度的指标，这3个指标均对地中海贫血具有一定的筛查价值。而ROC曲线是一种全面评价试验价值的有效方法,它以“敏感度”（即真阳性率）为纵坐标、“1-特异度”（即假阳性率）为横坐标，依据分组测定的数据，计算敏感度及特异度并连接成曲线。通过计算ROC曲线下面积（AUC）来评价试验的准确性，并找出最佳截断值[6-8]。

本研究中的数据表明，α地贫组和β地贫组MCV和MCH均低于对照组，RDW-CV均高于对照组。基于本研究的数据，在α地贫中，MCV＜82.4 fl和（或）MCH＜27.9 pg是最佳截断值；在β地贫中，MCV＜77.2 fl和（或）MCH＜25.7 pg是最佳截断值。但由于本研究样本量较少，还有待样本量多时再作进一步统计分析。

缺铁性贫血是最常见的贫血之一，是一种小细胞低色素性贫血，它是由于机体内缺乏铁导致 Hb合成障碍而引起的[9]。缺铁性贫血与地贫均属于小细胞低色素性贫血，两种贫血患者的血常规结果相似，所以需要血清铁来进行鉴别诊断。

地贫筛查和确诊的常用标本类型为外周血，但羊水也能作为标本来源来检测地贫基因，这在避免重症地贫患儿的出生，实现优生优育方面有着重要的作用。由于本实验室所用试剂盒检测的是比较常见的23种地贫基因缺失和突变，所以有可能出现一些罕见型别无法检出，或者部分少见的突变类型试剂盒里没有设正常对照，检测结果不能区分纯合突变或杂合突变，需进一步测序分析以确认基因型，而测序结果的补充更好地为患者提供了准确结果。

对于一些常规检测方法仍不能明确基因型的地贫，必要时进行产前诊断，采用基因测序等技术进一步检查，以防止漏检一些罕见未知的缺失、突变[10]。随着后基因组时代的到来分子诊断技术正朝着准确、高通量和经济方向发展。在王珂等的研究中发现，运用高通量测序技术筛选α地贫和β地贫的漏诊率会大大降低，将有利于及早发现和诊断疾病[11]。