砂仁酒制熟地黄不同炮制工艺与毛蕊花糖苷含量比较

马灵珍

(1.安徽省中医药科学院 亳州中医药研究所，安徽 亳州 236800；2.亳州职业技术学院，安徽 亳州 236800)

地黄为玄参科植物地黄(RehmanniaglutinosaLibosch.)的新鲜或干燥块根，其性甘、苦、寒，具有清热生津、凉血、止血的功效，临床用于热病伤阴、舌绛烦渴以及温毒发斑等[1]。地黄主产于河南、河北、陕西等地，主要成分为环烯醚萜类、紫罗兰酮类、三萜类等，具有免疫调节和抗衰老等多种药理活性。作为我国传统的滋补类中药，适应症广,近年又多用于保健食品,又因其生熟异用，在临床上使用较为广泛。

地黄的炮制方法有蒸制、酒炖、九蒸九晒、炒炭、砂仁制等，经炮制后地黄主要成分发生变化，从而影响其疗效。有文献报道[2]，不同地黄炮制品中梓醇含量依次为生地黄>熟地黄>酒熟地黄>蒸熟地黄>砂仁制地黄>生地黄炭>熟地黄炭。当前关于地黄炮制工艺的研究多集中于酒炖、九蒸九晒等，而砂仁酒制地黄的研究尚未见报道。砂仁酒炮制地黄的目的是抑制熟地黄的滋腻之性。但是该工艺却没有严格的、规范化的炮制工艺及质量标准，从而导致了市场上很少有砂仁炮制的熟地黄商品，严重影响了中医临床用药的优势。

本研究通过分析砂仁酒制熟地黄不同炮制过程中主要成分毛蕊花糖苷变化规律及对其炮制工艺进行研究，从而使其在中医临床上发挥更大的作用。

1 材料与方法

1.1 供试材料

实验分析过程中所使用的试剂、样品及对照品包括：地黄、砂仁、黄酒、毛蕊花糖苷、纯净水、甲醇、乙腈、0.1%醋酸、环己烷以及乙酸乙酯等。

其中地黄及砂仁药材均由亳州职业技术学院提供，经安徽华善堂中药饮片有限公司质量副总郭庆老师鉴定为2020版《中国药典》收载正品来源。实验过程中用到的砂仁均为破碎过三号药典筛的粉末。

1.2 实验仪器设备

实验过程中所使用的仪器设备包括：电磁炉、蒸煮锅、水浴锅、高速多功能粉碎机、电热鼓风干燥烘箱以及双频数控超声波清洗器等。

1.3 不同炮制工艺制备砂仁酒制熟地黄

1.3.1 罐蒸制砂仁酒制熟地黄制备方法

取砂仁，按2020版《中国药典》挥发油测定法进行测定。砂仁挥发油含量为4.2%，符合2020版《中国药典》要求。

高潮回复一个“OK”的表情，应声道：好香啊，要抓住一个男人，只需抓住他的胃，这战术，老婆运用得咋跟颠鸾倒凤一般娴熟呢？

在硅胶G薄层板上，用毛细管吸取配置好的乙酸龙脑酯和砂仁样品各1 μL均匀点出1个对照品及1个样品的小点，放入展开槽中展开(环己烷-乙酸乙酯(22∶1)为展开剂)，结束后，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，放置烘箱中加热至斑点显色清晰。

将生地黄净制，再随机取样，取样800 g，加入10%的黄酒进行闷润，约30 min(药透水尽)后，转移至不锈钢蒸笼上，加水蒸制，电磁炉加热(220 ℃)，每3 h往蒸煮锅内补水，8 h后取出蒸制的地黄，放置室外晾至地黄表面黏液不沾手后，伴入收集的熟地黄汁液，取约250 g蒸制的地黄加入40%的黄酒及0.9%砂仁进行闷润后，转移至不锈钢蒸笼上，继续蒸制8 h后，取出室外晾至地黄表面黏液不沾手后，伴入收集的熟地黄汁液[3]，继续晾至地黄表面黏液不沾手后，装入自封袋并做好标记(得到16 h时间段)。其余蒸制的地黄加入10%的黄酒继续蒸制8 h，重复上述操作(依次得到24 h/32 h/40 h时间段砂仁酒制熟地黄，每个时间段黄酒总量均为50%，砂仁为0.9%)。另取生地黄200 g，把所取样放置到瓷盘中，加入50%的黄酒及0.9%砂仁进行闷润，约30 min(药透水尽)后，转移至不锈钢蒸笼上，进行蒸制8 h后，取出室外晾至地黄表面黏液不沾手后，伴入收集的熟地黄汁液，继续晾至地黄表面黏液不沾手(得到8 h时间段)[4]。将所有时间段的笼蒸砂仁酒制熟地黄装入自封袋并贴好标签进行含量研究。

1.4 砂仁酒制熟地黄蒸制程度考察

色谱结果见图3，砂仁样品与乙酸龙脑酯在相同位置上显出了相同颜色的斑点。由此可得，熟地黄炮制用砂仁为药典正品来源。

那日，王爷没有哭得“昏迷不醒”。甚至，在外人面前他似乎并没流多少眼泪。七十多岁的人了，眼泪像他的身体一样早就干枯了。或者，是倒流回他的身体里，涨得他身体难受却没有倾泄的缺口，只好一直那样涨着。

表1 砂仁酒制熟地黄蒸制程度

2 结果与分析

2.1 炮制辅料砂仁的鉴别

按照2020版《中国药典》法制得对照品和供试品溶液，待用。

1.3.2 笼蒸制砂仁酒制熟地黄制备方法

将上述不同炮制工艺及炮制时间得到的砂仁酒制熟地黄成品进行编号，观察蒸制结果。蒸制结果见表1。

2.2 炮制辅料砂仁的含量测定

先将地黄净制，再随机取样，取样1000 g，把所取的样品放置到瓷盘中，加入50%的黄酒及0.9%砂仁进行闷润，约30 min(药透水尽)后，转移至瓦罐中，封闭，放置不锈钢蒸煮锅中，加水约至蒸煮锅容积的三分之二处，电磁炉加热(220 ℃)，每3 h往蒸煮锅内补水，按照时间点取样(8 h/16 h/24 h/32 h/40 h),每个时间段约取250 g(蒸制后重量),再把药材放置于室外晾至地黄表面黏液不沾手后，装入自封袋并贴好标签(得到8 h/16 h/24 h/32 h/40 h时间段罐蒸砂仁酒制熟地黄)进行含量研究。

图1 毛蕊花糖苷色谱图

2.3 毛蕊花糖苷的含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性实验[5]

2.3.5 精密度实验

2.3.2 对照品溶液的制备

为考察实验现象是否具有重现性，精密称取编号为A1砂仁酒制熟地黄样品5份，按2020版《中国药典》熟地黄项下方法制成供试品溶液[7]，在其他实验条件不变的情况下，5个样品分别进样，测定熟地黄中毛蕊花糖苷含量。结果见表4。计算其RSD为2.40%。

海明威在其创作中一直遵循年轻时形成的“电报体风格”，在其作品《午后之死》中也正式提出了他在创作上的“冰山原则”。海明威以冰山为喻，表达了作者只应描写冰山露出水面的一小部分，而隐藏于水下的则应该通过文字的延伸由读者去想象补充这一主张。本文通过解读《老人与海》，分析小说的文体风格及人物塑造来探究“冰山原则”的独特之处。

取毛蕊花糖苷对照品，按照2020版《中国药典》规定制成每l mL含毛蕊花糖苷11.36 μL的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液制备

“喂，高河。”突然，杨年喜叫住了高河。高河停下了脚步，只听杨年喜怪里怪气地说：“高河，别忘了那天那晚。”

将已经编号(见表3)的砂仁酒制熟地黄用剪刀剪成2～3 mm的立方块，再放入电热鼓风干燥风箱内用120 ℃干燥30 min,取出晾凉后用粉碎机破碎，取最粗粉，放入自封袋并标记。每批样品做一平行样，按照2020版《中国药典》熟地黄含量项下供试品方法制备，即得A1-A2、B1-B2、C1-C2、D1-D2、E1-E2、a1-a2、b1-b2、c1-c2、d1-d2、e1-e2号供试品溶液[6]，待用。

2.3.4 稳定性实验

为评价HPLC的稳定性，精密量取编号为A1的砂仁酒制熟地黄溶液，在设定时间段进样测定，连续进6针样，测定砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷的含量。结果见表2，计算其RSD为1.57%。

另外，相关的调查数据显示，中国物流并购标的企业所在地主要集中在东部地区，其中以发达地区、沿海省份为主。这些地区或城市凭借着经济优势或地域优势成为近10年物流并购的热点地区，而且这些地区并购发生量占全国总并购数目的68%。

安捷伦C18(150 mm*4.6 mm)色谱柱，检测波长334 nm，流动相为0.1%醋酸-乙腈溶液(84∶16)，流速1.0 mL/min，柱温为30 ℃，进样量20 μL。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算不低于5000。毛蕊花糖苷的保留时间约为18 min(见图1)。

现代经济管理工作是在一系列数据的基础之上，用严格的推理得到结论的学科，过程需要严密的计算和逻辑推理。数学应用的好坏直接决定了经济学研究的成败，数学分析可以提供有效手段。例如函数、极限、推理与证明等内容都是基础的数学分析，要全面掌握才能很好理解经济原理中的各类数学模型，为学习打下坚实基础。分析师有着严密逻辑性的，可以探寻出事物内部发展的联系和规律，对未来趋势做出科学合理预测，指明正确发展方向。要将数学分析和现代经济管理工作有机结合在一起，这样会更加具有针对性，最大限度发挥出作用，从而不断优化效果。

为评价HPLC的精密度，精密量取编号为A1的砂仁酒制熟地黄溶液，重复进样5次，测定熟地黄中毛蕊花糖苷的含量。结果见表3。计算其RSD为0.93%。

2.3.6 重现性实验

1.把烟戒了；2.高血脂好了；3.以前打架没帮手,现在随时能招呼一群兄弟；4.第一次住上了政府提供的免费房屋；5.第一次享受了免费医疗；6.第一次享受了免费教育；7.终于掌握了一门手艺；8.同屋有个局级贪污犯每天帮他搓背，真正享受了公仆的服务。

伴随着新一轮全球科技革命和产业革命，以云计算、大数据、物联网、人工智能等为代表的新经济正在茁壮成长，以大数据为核心的第四次工业革命正引领人类社会由工业经济时代进入数字经济时代。高等教育的发展与技术的进步是密不可分的，每一次技术的革新都会给高等教育带来创新性的发展，但最能对高等教育的发展产生革命性影响的数据却常常在变革中遭到忽视。当前，中国高校虽然已经认识到教育大数据将要产生的价值，但是目前还未能够对数据进行有效的应用，尚未引起办学者的足够关注。

2.4 笼蒸砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷的含量测定

笼蒸以蒸制次数分批(8 h)进行取样。每批笼蒸砂仁酒制熟地黄按2020版《中国药典》熟地黄含量项下方法进行制备和操作，测定笼蒸砂仁酒制熟地黄样品中毛蕊花糖苷的含量。图2(A1—E2)为HPLC色谱图。

大多数宝宝在心肌炎发病前的1～2周常有感冒等呼吸道感染史，常见症状有明显乏力、苍白、多汗、心悸、气短、胸闷、头晕、心前区疼、手足凉、肌肉痛等，去医院检查就会发现心脏扩大，心音低钝或心律不齐等体征。个别患病的宝宝会以心源性休克或心脑综合征（心脏病变中有脑部症状）起病，以急剧腹痛起病时常被误诊为急腹症。

表2 笼蒸砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷含量

由表5可知不同蒸制次数砂仁酒制熟地黄毛蕊花糖苷平均含量符合2020版《中国药典》不得少于0.020%的规定。

2.5 罐蒸砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷的含量测定[8]

罐蒸制按时间段(8 h)进行取样。每时间段按2020版《中国药典》熟地黄含量项下方法进行制备和操作，测定罐蒸砂仁酒制熟地黄样品中毛蕊花糖苷的含量。图2(a1—e2)为HPLC色谱图，结果见表8。

表3 笼蒸砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷含量

由表6可知采用罐蒸砂仁酒制熟地黄不同时间段毛蕊花糖苷平均含量低于2020版《中国药典》不得少于0.020%的规定[9]。

图2 毛蕊花糖苷含量测定色谱图

罐蒸砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷从蒸制8 h到40 h时间段，毛蕊花糖苷含量逐渐降低，其中在24 h时间段有一反弹，但整体呈下降趋势。

3 结语

地黄作为我国传统的滋补类中药，适应症广,近年又多用于保健食品,又因其生熟异用，在临床上使用较为广泛。砂仁酒炮制地黄的目的是抑制熟地黄的滋腻之性。但是该工艺却没有严格的、规范化的炮制工艺及质量标准，从而导致了市场上很少有砂仁炮制的熟地黄商品，严重影响了中医临床用药的优势。

本实验主要研究熟地黄采用砂仁和黄酒作为辅料的不同炮制方法。根据实验结果得出，当砂仁酒制熟地黄采取不同的炮制工艺及炮制时间时[10]，砂仁酒制熟地黄中毛蕊花糖苷的含量变化明显。此外，采用笼蒸制时，从一蒸(8 h)一晒、二蒸(16 h)二晒、三蒸(24 h)三晒、四蒸(32 h)四晒、五蒸(40 h)五晒后的砂仁酒制熟地黄中的毛蕊花糖苷均达到2020版《中国药典》规定的要求，依次分别为0.048%、0.063%、0.077%、0.055%、0.032%。采用罐蒸制8 h、24 h后的砂仁酒制熟地黄中的毛蕊花糖苷含量达标，依次为0.042%、0.021%，而罐蒸制16 h、32h、40h后的砂仁酒制熟地黄中的毛蕊花糖苷含量不达标，依次为0.010%、0.010%、0.004%。值得一提的是无论是笼蒸还是罐蒸24 h时间段毛蕊花糖苷均有一次反弹，具体原因，有待于进一步论证。

实验过程中熟地黄蒸制工艺操作过程所用设备较为简单，操作方法方便、可控，所蒸制的熟地黄毛蕊花糖苷含量符合药典要求，为砂仁酒制熟地黄蒸制工艺提供了科学参考。