蜜升麻配方颗粒的制备工艺和鉴别研究

张 鹏，冯佳怡，孙 浩，谭文红，刘 录

(1.云南中医药大学 中药学院，云南 昆明 650500; 2.华润现代中药(昆明)有限公司,云南 昆明 652200)

中药升麻的记载最早见于汉代《神农本草经》[1]，主产于四川、青海、陕西、云南、东北等地，是我国传统中药材.升麻又名绿升麻(湖北，云南)，为毛茛科升麻属植物大三叶升麻CimicifugaheracleifoliaKom、兴安升麻Cimicifugadahurica(Turcz.)Maxim或升麻CimicifugafoetidaL的干燥根茎.秋季采挖，除去泥沙，晒至须根干时，燎去或除去须根，晒干[2].其中除去酚酸类化合物及其衍生物外，升麻主要化学成分为三萜类化合物，还含有少量的色原酮、生物碱、挥发油及其他类成分[3-8].现代药理研究表明升麻具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤、抗骨质疏松等药理作用[9].升麻的炮制主要有炒制、蜜制、酒制及升麻炭等[10]，以升麻的蜜制最早在东晋时期《肘后备急方》[11]中有“蜜煎，并数数食之”的记载.升麻作为中药“生熟异治”的代表品种，现代临床应用中多以生品和蜜炙品入药，生品取其长于透疹解表、清热解毒之功，蜜炙品常用于中气虚弱的短气乏力、倦怠、脱肛、子宫脱垂等症状[2]，在缓和散风作用的同时增强提中气作用，并减少对胃的刺激[12].目前，有关蜜升麻配方颗粒的研究文献及期刊均较少，从临床应用范围上看，其有效成分、性味、归经、主治、功效和传统中药饮片完全一致，保持了传统中药饮片的全部特征，既能保证中医传统的君、臣、佐、使和辨证论治、灵活加减的特点，优于中成药，又免去了病人传统煎煮的麻烦，同时还可灵活的单味颗粒冲服，卫生有效，大大地促进中医急症医学的发展.然而中药配方颗粒[13-15]自问世以来，经过十多年的研究改进与临床应用，产品质量不断提高，并逐步趋于稳定.

为更好地开发与利用蜜升麻，同时发挥配方颗粒使用方便的优势，本实验通过现代工艺技术与方法，筛选出蜜升麻配方颗粒的最佳的制备工艺，并优化了提取、干燥等参数，利用TLC分析方法对蜜升麻提取物和配方颗粒进行了鉴别研究，为蜜升麻的质量控制提供依据.

1 仪器与材料

1.1 仪器

分析天平(赛多利斯BSA124S)；天平(上海菁海仪器有限公司FA2104N)；旋转蒸发仪(东京理华EYELA N-1100)；紫砂煎药壶(潮州市潮安区康雅顺45U2)；电子分析天平(岛津 AUW120D)；PL202-S型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；恒温水浴锅(HH-S24s数显恒温水浴锅)；冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司FD-1A-50)；循环水式真空泵(SHZ-D(Ⅲ) 巩义市英裕予华仪器厂)；数显恒温水浴锅(8002 北京水光明医疗仪器厂)；电热鼓风干燥箱(101-2ABA 天津市泰斯特仪器有限公司)；FA2104N天平(上海菁海仪器有限公司)

1.2 试剂

蜜升麻药材经煎煮2次后合并滤液，浓缩干燥即得蜜升麻配方颗粒提取物.蜜升麻配方颗粒提取物(20200801、20200802、20200803)，蜜升麻配方颗粒(2008001Y、2008002Y、2008003Y)，对照药材：升麻(兴安升麻)(批号：121182-201102，中国食品药品检定研究院)，环己烷、乙酸乙酯、冰醋酸均为分析纯，购自天津市风船化学试剂科技有限公司，水为超纯水.

1.3 试药

15批蜜升麻饮片由华润现代中药(昆明)有限公司提供，经云南中医药大学杨竹雅博士鉴定为毛茛科升麻属药用植物CimicifugafoetidaL的干燥根茎.

2 蜜升麻标准汤剂

2.1 蜜升麻标准汤剂制备

取蜜升麻饮片约 100 g，置砂锅中，加入 1 000 mL 去离子水浸泡 30 min，先武火煮沸，再文火煎煮 30 min，200目滤布趁热过滤，药渣再加 800 mL 去离子水，武火煮沸后，再文火煎煮 25 min，200目滤布趁热过滤，合并2次滤液，称取滤液重量；经减压低温(65 ℃)浓缩至料液比接近1∶1浓浸膏，置于冷冻干燥机中，冷冻干燥(-82 ℃，0 MPa)至干，取出，粉碎成粉末，称重，即得蜜升麻饮片标准汤剂(冻干粉).

2.2 标准汤剂指标检测方法

2.2.1 出膏率

取水煎液约 20 g，精密称定，置于已恒重的蒸发皿中，水浴锅蒸干，置 105 ℃ 电热鼓风干燥箱内干燥 3 h，移至干燥器中，冷却 30 min，称重.

计算水煎液含固量，并根据水煎液总重量和饮片重量换算出膏率.

2.2.2 浸出物

“标准汤剂冻干粉”为饮片经水提取、浓缩、干燥制备而成，其多含极性大分子成分，计划采用95%乙醇作为提取溶剂测定浸出物含量.参考《中国药典》(2020年版四部)通则2201 进行测定.

2.2.3 水分

检测方法：参考中国药典(2020年版四部) 通则0832 第二法.

2.3 标准汤剂应用研究

2.3.1 标准汤剂检测结果

将15批蜜升麻饮片制备成标准汤剂，每批饮片平行制备2份，测定15批次“标准汤剂”的得率，按“2.2.2 浸出物”测定浸出物，并按照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》的要求，规定“标准汤剂”得率范围.各批次饮片的得率以及浸出物，及规定的“标准汤剂”范围如下表所示.

由表1可知，标准汤剂实测平均得率在14.8%～27.0%之间，平均得率为19.6%，SD为3.1%，得率平均值±30%的波动范围为13.7%～25.4%.规定蜜升麻饮片标准汤剂(冻干粉)得率范围为14.0%～25.0%；蜜升麻标准汤剂“冻干粉”实测平均浸出物含量在37.6%～53.6%之间，均值为44.8%，SD为3.9%.浸出物平均值±30%的波动范围为31.3%～58.2%.规定蜜升麻标准汤剂(冻干粉)浸出物范围为31.0%～58%，符合《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》要求.

表1 15批次蜜升麻饮片标准汤剂 %

3 蜜升麻配方颗粒研究

3.1 蜜升麻标准汤剂小试工艺

以蜜升麻饮片标准汤剂的关键质量属性(出膏率，浸出物)为基准，对中间体提取物和颗粒成品的不同制备工艺进行全面评价，选择出合适的制备工艺，使得到得蜜升麻配方颗粒和蜜升麻饮片标准汤剂的关键质量属性基本一致.按照标准汤剂工艺选取20190517这一批次进行加热回流来模拟生产的封闭环境，将得到的数据列为表2.

表2 小试工艺 %

通过表2可知，模拟标汤煎煮工艺标准汤剂与该批次标准汤剂得出膏率17.25%相比较没有明显提升，考虑到浓缩干燥的过程的损耗，需进行煎煮时间考察.

3.2 蜜升麻煎煮时间考察

选取20190517批号地药材进行蜜升麻煎煮时间的研究，考察不同工艺下蜜升麻出膏率和浸出物含量(工艺1：60/60 min；工艺2：60/30 min).第1次加入饮片重量10倍的水，浸泡 30 min，之后开始加热到达微沸，沸腾 60 min，用200目的纱布过滤得到的滤液；第2次加入饮片重量8倍的水进行煎煮，达到沸腾，继续煎煮不同时间，用纱布过滤合并2次滤液,得到的数据列为表3.

表3 煎煮时间考察 %

通过表3可知， 蜜升麻 60 min 的出膏率高于 30 min 的出膏率；浸出物含量也是 60 min 高于 30 min，所以可以将蜜升麻的煎煮时间定为1煎 60 min；2煎 60 min.

3.3 蜜升麻配方颗粒提取工艺验证

对确定的蜜升麻配方颗粒提取工艺(取蜜升麻饮片 100 g，加入10倍量去离子水浸泡 30 min，加热提取 60 min，滤过，滤液备用，再加8倍量去离子水加热提取 60 min，滤过，合并滤液)进行验证，平行试验3次，并且检测各样品溶液出膏率、浸出物.检测结果如下表所示.

由表4研究数据可知，同一批饮片通过平行试验3次，得到的溶液的出膏率、浸出物的结果基本一致，说明了该提取工艺稳定可行，具有较好的重现性.

表4 提取工艺验证中样品各指标检测结果 %

3.4 蜜升麻配方颗粒制备工艺

取蜜升麻饮片 3 000 g，加水煎煮2次，第1次加10倍水浸泡 30 min，煎煮 60 min，滤过，第2次加8倍水，煎煮 60 min，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.06～1.12 g/mL(65±5)℃的流膏，干燥(干浸膏出膏率为14.0%～25.0%)，加辅料适量，混匀，制粒，制成 1 000 g，分装，即得.

3.5 蜜升麻配方颗粒干燥工艺考察

3.5.1 干燥辅料比例考察(流膏制备及检测)

选取20190517批号的蜜升麻饮片 200 g，进行煎煮；第1次加入饮片重量10倍的水，浸泡 30 min，之后开始加热到达微沸，沸腾 60 min，用200目的纱布过滤得到的滤液；第2次加入饮片重量8倍的水进行煎煮，达到沸腾，继续煎煮 60 min，用纱布过滤合并2次滤液，滤液浓缩，取浓缩液，精密称定，置已恒重蒸发皿中，水浴蒸干后，置 105 ℃ 烘箱中干燥 3 h，取出置干燥器中冷却 0.5 h，迅速称定重量.将得到数据列为表5.

表5 理论出膏率

3.5.2 不同干燥辅料比例考察

由于蜜升麻饮片流膏出膏率较高并且有一定含糖量，在干燥时必须添加一定的辅料才可以顺利干燥，确保干燥出的配方颗粒提取物粉末的质量.中药配方颗粒制备工艺一般使用辅料麦芽糊精，因此对蜜升麻流膏干燥添加辅料量进行考察.

将上述剩余的浓缩药液平均分成3份，分别加入0 %、5 %、10 %的麦芽糊精，精密称定，置已恒重蒸发皿中，水浴蒸干后，置105 ℃烘箱中干燥 3 h，取出置干燥器中冷却 0.5 h，迅速称定重量，将得到的数据列为表6；干燥过程检测结果列为表7.

表6 干燥添加辅料量试验结果

表7 干燥辅料考察结果

由上表可知，添加辅料后浸出物含量不断下降.结合干燥辅料考察结果，因此暂定干燥添加6.3%辅料.

3.5.3 干燥工艺验证考察

选取20190517批号的蜜升麻饮片，按照干燥工艺考察结果进行3批验证.辅料添加比例为6.3%，具体结果见表8.

表8 蜜升麻配方颗粒干燥工艺验证浓缩液检测数据 %

由以上数据可知，干燥添加6.3%辅料，干粉状态较好，出膏率和浸出物含量与考察结果基本一致，表明干燥工艺可行.

3.5.4 蜜升麻配方颗粒干燥工艺的确定

根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》，结合华润三九医药股份有限公司以往配方颗粒生产的浓缩工艺参数，最终确定蜜升麻配方颗粒生产过程中，干燥方式为喷雾干燥，干燥过程中添加辅料比例为6.3%，即：流膏密度1.06～1.12 g/mL，喷雾干燥参数(喷雾干燥进口温度160～200 ℃，出口温度80～110 ℃)

4 蜜升麻薄层鉴别

4.1 蜜升麻配方颗粒提取物薄层鉴别方法

结合文献方法与《中国药典》蜜升麻【鉴别】项下方法，建立蜜升麻配方颗粒提取物的薄层鉴别方法.方法如下：

取本品 0.2 g，加甲醇 50 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1 mL 使溶解，作为供试品溶液.另取升麻对照药材1 g，加水 50 mL，煮沸 30 min，滤过，滤液蒸干，同法制成对照药材溶液.照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以(体积比)环己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=8∶4∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰.供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点.

4.2 溶液的配制

4.2.1 供试品的制备

取本品 0.2 g，加甲醇 50 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1 mL 使溶解，作为供试品溶液.

4.2.2 参照物的制备

另取升麻对照药材 1 g，加水 50 mL，煮沸 30 min，滤过，滤液蒸干，同4.2.1方法制成对照药材溶液.

4.2.3 阴性对照溶液的制备

取麦芽糊精粉末 0.2 g，同4.2.1方法处理，作为阴性对照溶液.

4.2.4 不同点样量考察和专属性考察

按照上述薄层色谱条件，分别吸取蜜升麻配方颗粒提取物溶液1、3、5及 7 μL，对照药材和阴性对照 5 μL，点于薄层板上，按上述薄层色谱展开、取出、晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰,实验结果见图1.

由图1可见，蜜升麻配方颗粒提取物供试品色谱中，在与升麻对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰.根据斑点的分离度及清晰度，确定蜜升麻配方颗粒提取物供试品溶液、升麻对照药材溶液的点样量均为 5 μL.

图1 不同点样量考察结果

4.2.5 不同温度、湿度、厂家薄层板考察

分别吸取蜜升麻配方颗粒提取物供试品溶液、升麻对照药材溶液各 5 μL，点于不同温度、湿度、不同厂家的硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，考察本品在不同温度、湿度、不同厂家条件下薄层展开情况，实验结果见图3.

由图3可见，不同温度、湿度、厂家生产薄层硅胶板，蜜升麻配方颗粒提取物色谱在与蜜升麻对照药材色谱相应的位置显相同颜色的斑点，且色谱斑点分离效果都较好，实验结果表明，不同温度、湿度、厂家薄层板对蜜升麻配方颗粒提取物薄层鉴别无显著影响，该薄层鉴别方法的耐用性良好.

4.3 蜜升麻配方颗粒薄层鉴别

参考蜜升麻配方颗粒提取物薄层方法，建立蜜升麻配方颗粒的薄层鉴别方法.

4.3.1 溶液的制备

1) 供试品溶液的制备 取本品 0.2 g，同4.2.1方法制备供试品溶液.

2) 参照物溶液的制备 另取升麻对照药材 1 g，加水 50 mL，煮沸 30 min，滤过，滤液蒸干，同4.2.1方法制成对照药材溶液.

3) 阴性对照溶液的制备 取麦芽糊精 0.2 g，加甲醇 50 mL，超声处理 30 min，同4.2.1方法操作，作为阴性对照溶液.

图2 蜜升麻不同温度、湿度、厂家薄层板鉴别色谱图

4.3.2 不同点样量考察和专属性考察

按照上述薄层色谱条件，分别吸取蜜升麻配方颗粒供试品溶液1、3、5及 7 μL，对照药材和阴性对照 5 μL，点于薄层板上，按上述薄层色谱条件展开、取出、晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰.实验结果见图3.

由图3可见，蜜升麻配方颗粒供试品色谱中，在与升麻对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰.根据斑点的分离度及清晰度，确定蜜升麻配方颗粒供试品溶液、升麻对照药材溶液的点样量均为 5 μL.

图3 不同点样量考察结果

4.3.3 不同温度、湿度、厂家薄层板考察

分别吸取蜜升麻配方颗粒供试品溶液、升麻对照药材溶液各 5 μL；点于不同温度、湿度、不同厂家的硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，考察本品在不同条件下薄层展开情况，实验结果见图4.

图4 蜜升麻不同温度、湿度、厂家薄层板鉴别色谱图

由图4可见，不同温度、湿度、厂家生产薄层硅胶板，蜜升麻配方颗粒色谱在与蜜升麻对照药材色谱相应的位置显相同颜色的斑点，且色谱斑点分离效果都较好，实验结果表明，不同温度、湿度、厂家薄层板对蜜升麻配方颗粒薄层鉴别无显著影响，该薄层鉴别方法的耐用性良好.

5 结语

本研究优化了蜜升麻配方颗粒制备涉及的提取、干燥和制剂等工艺的参数.得到了各操作的单元的最佳工艺条件，其中蜜升麻配方颗粒的制备的最佳工艺为：煎煮前浸泡30 min，连续煎煮2次，60 min/次，加水量为第1次 1 000 mL、第2次 800 mL，添加的辅料比例为6.3%，完成蜜升麻配方颗粒的制备.同时本研究是在《中国药典》2020年版一部中升麻鉴别方法基础上的改进，在开展研究前，笔者对药典方法进行了反复验证，药典方法中展开剂为(体积比)环己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=7∶2∶1，本研究方法中展开剂为(体积比)环己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=8∶4∶0.5，显色剂为碘蒸气，改善了薄层色谱分离效果，显色后斑点清晰，无扩散现象.在此基础上，研究还考察了不同厂家的薄层板、不同的供试品点样量、环境温湿度对薄层色谱的影响.结果发现，该鉴别对薄层板无选择性，环境温度以 25 ℃ 为宜，湿度控制在30%～60%均可.

本次实验对蜜升麻配方颗粒制备工艺的探索试验，并对蜜升麻配方颗粒进行了TLC鉴别，有效控制了蜜升麻配方颗粒质量.为进一步更好地开发与利用蜜升麻配方颗粒，奠定了良好的研究基础.