乳腺癌T 淋巴细胞及CD68+肿瘤相关巨噬细胞浸润的临床病理观察

徐钢

肿瘤微环境对乳腺癌发生、发展有重要作用,其中T 淋巴细胞、肿瘤相关巨噬细胞(tumour-associated macrophages,TAM)一直备受关注［1］。T 淋巴细胞是主要免疫效应细胞,TAM 是丰富的免疫细胞,可抑制T 细胞免疫功能［2］。本文就本院2019 年8 月～2020 年12 月初治乳腺癌患者为例,分析术后组织标本检测情况、T 淋巴细胞与CD68+TAM 浸润等临床病理价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象为2017 年8 月～2020 年12 月本院的60 例初治乳腺癌患者,患者中,年龄最小35 岁,最大73 岁,平均年龄(50.50±6.50)岁；肿块直径：≤3 cm 患者35 例,＞3 cm 患者25 例。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：①患者未行新辅助治疗；②伦理委员会批准；③患者知情同意。排除标准：①血液疾病患者；②其他恶性肿瘤患者［3］。

1.3 方法 免疫组织化学法检测T 淋巴细胞、CD68+TAM、Ki-67 蛋白,组织标本以多4%聚甲醛固定液固定、脱水、石蜡包埋,连续切片。二甲苯脱蜡,柠檬酸缓冲液进行抗原修复,3%过氧化氢溶液浸泡10 min,磷酸缓冲液(PBS)冲洗3 次,恒温箱孵育30 min。分别滴加鼠抗人CD3、CD68 以及Ki-67 单克隆抗体,室温孵育1 h。PBS 洗3 次后滴加二抗工作液,室温20 min。PBS 洗3 次,DAB 显色。评估染色结果,细胞膜上黄色、棕黄色T 淋巴细胞为阳性细胞。CD68+染色阳性,即细胞浆有黄色、棕黄色巨噬细胞。安排2 名经验丰富、责任心强的病理科医师,显微镜高倍镜视野下选取表达集中视野计数,取平均值,中位值为标准,分为高于、低于中位值的高、低表达。Ki-67 结果评估,胞核染色呈棕黄色。选取高倍视野,显微镜下计数肿瘤细胞,计算胞核染色细胞占例。

1.4 观察指标 比较不同Ki-67 增殖指数患者的T 淋巴细胞、CD68+TAM 表达情况,分析T 淋巴细胞数和CD68+TAM 数与临床特征的关系。

1.5 统计学方法 采用SPSS21.0 统计学软件对数据进行处理。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同Ki-67 增殖指数患者的T 淋巴细胞、CD68+TAM 表达情况比较 Ki-67 增值指数≥14%、≥20%、≥30%患者的T 淋巴细胞低表达率比较差异无统计学意义(P＞0.05)；Ki-67 增殖指数≥50%患者的T 淋巴细胞低表达率85.71%高于Ki-67 增值指数≥14%患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)；Ki-67 增殖指数≥14%、≥20%、≥30%、≥50% 患者 的CD68+TAM低表达率对比差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 不同Ki-67 增殖指数患者的T 淋巴细胞、CD68+ TAM表达情况比较［n(%)］

2.2 T 淋巴细胞数和CD68+TAM 数与临床特征的关系分析 不同年龄、组织学分级、HER2(-或+)患者的T 淋巴细胞数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；肿块直径≤3 cm 患者的T 淋巴细胞数高于＞3 cm 患者,淋巴转移阴性患者的T 淋巴细胞数高于阳性患者,ER+患者的T 淋巴细胞数高于ER-患者,PR+患者的T 淋巴细胞数高于PR-患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)。不同肿块直径、ER(-或+)、PR(-或+)患者的CD68+TAM 数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；年龄≤51 岁患者的CD68+TAM 数高于＞51 岁患者,组织学分级Ⅲ级患者的CD68+TAM 数高于Ⅰ～Ⅱ级患者,淋巴转移阳性患者的CD68+TAM 数高于阴性患者,HER2+患者的CD68+TAM 数高于HER2-患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 T 淋巴细胞数和CD68+ TAM 数与临床特征的关系分析(±s,个/HPF)

表2 T 淋巴细胞数和CD68+ TAM 数与临床特征的关系分析(±s,个/HPF)

注：与同项内其他类别比较,aP＜0.05

3 讨论

近几年随着生活、工作压力加大等,导致乳腺癌的发病率呈递增趋势［4］。临床工作中发现,肿瘤免疫微环境会影响乳腺癌的进展［5］。T 淋巴细胞是肿瘤浸润淋巴细胞的主要类型,可以直接杀死肿瘤细胞、改善免疫功能［6］。但于肿瘤微环境中处在被抑制状态,导致肿瘤浸润T 淋巴细胞活性低,如何实现功能正常、数量稳定是改善肿瘤微环境的重要条件。TAM 是肿瘤免疫微环境中最丰富的免疫细胞,可促进肿瘤进展、免疫逃逸［7］。TAM 表面表达多种特异抗原在乳腺癌浸润免疫细胞中比例高,能促进乳腺癌疾病进展。CD3+是糖蛋白受体,表达于成熟T 细胞表面［8］。T 淋巴细胞是炎症反应、肿瘤免疫效应细胞,具有杀伤肿瘤细胞的价值。乳腺癌情况下,肿瘤细胞启动了细胞免疫应答机制,阻碍了肿瘤细胞增殖,延缓肿瘤疾病恶化。CD68+表达于巨噬细胞表面,组织内代表总TAM［9］。结合本文研究,乳腺癌浸润T 淋巴细胞越少则Ki-67增值指数越高,CD68+TAM越多则Ki-67增值指数越高,Ki-67 是判断肿瘤增殖的主要标志。相关研究指出,乳腺癌浸润CD68+TAM 与乳腺癌进展关系密切,助于预测乳腺癌生物学行为、免疫治疗潜干预靶点,促进乳腺癌患者早期治疗、预后［10］。

综上所述,乳腺癌浸润CD68+TAM 与乳腺癌进展具有密切关系,可以根据患者病情状况开展治疗,促进患者预后。