血浆mSEPT9检测与胃功能三项检查在胃癌及胃癌癌前状态筛查中的应用价值比较

柴宝霞

（桂林医学院附属医院消化内科，广西 桂林 541001）

胃癌是一种发病率较高的消化系统恶性肿瘤。此病患者的预后与其病情确诊的时间有着密切的联系。越早对胃癌患者进行诊治其预后越好，生存时间越长。因此，探寻更加简便、安全、特异、敏锐的指标来对胃癌进行筛查具有重要的临床意义。现阶段，血浆Septin9 基因甲基化（mSEPT9）与恶性肿瘤发生、发展的关系已得到临床上的重视。mSEPT9有可能成为恶性肿瘤诊断的新靶点。最近几年，临床上已将mSEPT9 运用于结直肠癌的早期筛查和诊断中。mSEPT9 与胃癌尤其是胃癌癌前状态的关系，目前很少有文献报道。近年来人们发现外周血中胃蛋白酶原（PG）作为胃黏膜改变的标志物，在早期胃癌的筛查中有特异性表现，具有较高的诊断价值。研究报道，胃蛋白酶原Ⅰ（PG Ⅰ）和胃蛋白酶原Ⅱ（PG Ⅱ）能反映胃黏膜的状态[1-2]。胃泌素-17（G-17）也叫小胃泌素，是胃窦细胞分泌的重要激素之一，其作用是刺激胃酸分泌及胃肠道运动。血清G-17 水平的异常升高可诱发高胃泌素血症，并进一步引起胃黏膜癌变。现阶段，胃功能三项（PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17）检查（又被称为“血清学活检”）已在胃癌的早期筛查中得到应用，相关研究也证实了血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17 可作为临床上早期筛检胃癌的灵敏指标[3-4]。胃癌癌前状态包括慢性萎缩性胃炎、胃息肉、中重度肠上皮化生、低级别上皮内瘤变等[5]。本文主要是比较血浆mSEPT9 检测与胃功能三项检查在胃癌及胃癌癌前状态筛查中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2020 年1 月至2022 年1 月在我院行胃功能三项检查及血浆mSEPT9 检测的患者各100 例作为研究对象。其纳入标准是：年龄≥18 周岁，性别不限；既往身体健康；采血当天未饮酒，未服用质子泵抑制剂（PPI）；自愿参与本研究，并签署了知情同意书。其排除标准是：患有其他严重的内科疾病；有精神疾病史；对行胃镜检查存在禁忌证。在行胃功能三项检查的100 例患者中，有男性47 例，女性53 例，其平均年龄为50.79 岁。在行mSEPT9 检测的100 例患者中，有男性70 例，女性30 例，其平均年龄为47.96 岁。

1.2 方法

1.2.1 胃功能三项检查 采集患者的空腹静脉血2 ～3 mL，置于促凝管中，以3000 r/min 的转速行5 ～10 min 的离心处理，分离出血清。将试剂条编号，用移液器吸取80 μL 样本垂直滴入检测卡的加样孔中。开始计时，保持软件样本编号和试剂条相符。15 min 后用HIT 型荧光免疫分析仪分别检测样本中血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17 的水平。试剂盒和HIT 荧光免疫分析仪均购自biohan 生物技术有限公司/ 必欧瀚生物技术有限公司。参考范围：血清G-17 ≤5.7 pmol/L，血清PG Ⅰ＞70 μg/L，血清PG Ⅱ≤11 μg/L。

1.2.2 mSEPT9 检 测 仪 器 与 试 剂：ABI 7500 荧 光PCR 扩增仪（由美国ABI 公司生产），人Septin9 基因甲基化检验试剂盒﹝由博尔诚（北京）科技有限公司生产）﹞。检测方法：1）血样的采集与制备。用BD Vacutainer K2EDTA 10 mL 采血管采集患者的外周静脉血10 mL，采血后需立即对标本进行处置。2）检验方法。依据试剂说明书依次制备洗液A、B，行血浆中DNA 提取及亚硫酸盐转化处理，即行融化、裂解、DNA 结合、DNA 洗涤、洗脱、DNA 储存、亚硫酸盐化、结合、3 次洗涤、干燥、洗脱、亚硫酸盐化、DNA 储存处理。3）聚合酶链式反应（PCR）。完成PCR 预反应液的制备、PCR 反应板的准备，加入样本DNA，采用Applied Biosystems 7500PCR 仪进行检测。4）结果判读。检测样本FAM 荧光通道的Ct 值若≤41.1，则判定检测结果呈阳性；检测样本FAM 通道的Ct 值若无数值，则判定检测结果呈阴性；检测过程中内标检测若无数值或Ct 值＞41.1，样本DNA 纯度或浓度很低，则表示检测结果无意义，需重新采血检测。

1.3 观察指标

观察并比较对200 例患者进行mSEPT9 检测及胃功能三项检查的结果，并与其胃镜检查结果进行比较分析。

1.4 统计学方法

用SPSSAU 软件处理本研究中的数据，计数资料用% 表示，计量资料用均数± 标准差（±s）表示，分别采用χ² 检验及非参数检验（Kruskal-Wallis 检验），P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

对患者进行胃镜检查的结果显示，其中患有慢性萎缩性胃炎、慢性非萎缩性胃炎的患者分别有45 例、27 例。45 例慢性萎缩性胃炎患者与27 例慢性非萎缩性胃炎患者的胃功能三项指标（血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17）相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。在行胃功能三项检查的患者中有75 例患者自愿接受胃镜检查，其中经胃镜检查被诊断患有慢性萎缩性胃炎、胃息肉、胃黏膜肠化、胃癌、胃溃疡的患者分别有45 例、7 例、12 例、1 例、1 例；在行mSEPT9检测的患者中有38 例患者自愿接受胃镜检查，其中经胃镜检查被诊断患有慢性萎缩性胃炎、胃息肉、胃癌、胃黏膜肠化的患者分别有5 例、3 例、1 例、2 例，但mSEPT9 阳性患者中经胃镜检查检出1 例慢性萎缩性胃炎患者、1 例胃息肉患者。与mSEPT9 检测相比，胃功能三项检查对慢性萎缩性胃炎、胃息肉、胃黏膜肠化的检出率均更高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与mSEPT9 检测相比，胃功能三项检查对胃癌的检出率略低，组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。mSEPT9 检测结果的阳性率仅为6%，其对慢性萎缩性胃炎、胃息肉及胃黏膜肠化的检出率偏低。

表1 胃功能三项检查结（± s）

表1 胃功能三项检查结（± s）

注：*与慢性非萎缩性胃炎患者相比，P ＞0.05。

组别 例数PG Ⅰ（μg/L）PG Ⅱ（μg/L）G-17（pmol/L）慢性萎缩性胃炎45139.95±65.809*21.507±13.264*15.441±19.531*慢性非萎缩性胃炎27145.627±73.25020.721±14.40921.877±24.625合计72142.079±68.23821.212±13.60917.854±21.640

表2 胃功能三项检查、mSEPT9 检测对胃癌及胃癌癌前状态检出率的比较

3 讨论

胃癌是一种起源于胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤。早期胃癌患者多无典型的临床表现，部分患者仅有轻微的消化不良症状，故早期胃癌的诊断率较低，多数胃癌在发现时已处于中晚期。相关的研究表明，胃癌癌前状态的早发现及早治疗能显著降低胃癌的发病率，改善患者的预后[6]。目前，胃癌的确诊主要是依靠内镜检查+ 病理组织学检查，然而我国的内镜筛查率偏低，活检率则更低。究其原因主要是人们对内镜检查引起的不适有较为严重的恐惧感，加之内镜检查存在一定的侵袭性，患者常担心检查后出现医源性感染。以血清学生物标志物为基础的胃癌筛查方法风险较小，且更为方便快捷，更适合大规模胃癌筛查的开展。作为一种新型的肿瘤筛查手段，mSEPT9 检测具有简单、快捷、方便等优点。研究指出，通过检测正常青年人（18 ～49 岁）外周血中的mSEPT9，只有6%（6/98）的人出现阳性结果，但Septin9 基因的甲基化程度可随着肿瘤组织学分级的进展而逐步增加[7]。Fu 等[8]发现，结直肠癌患者血浆mSEPT9 的水平与肿瘤大小、组织学分级与组织学类型有关，因此血浆mSEPT9 可能是一种有效的肿瘤生物标志物。相关的研究表明，mSEPT9 对肿瘤远处转移的敏感性高，但mSEPT9 对晚期腺瘤的敏感性则非常低，这使其临床效用有限[9-10]。除结直肠癌外，mSEPT9 也可用作胃癌的潜在生物标志物。结直肠癌和胃癌都属于消化系统恶性肿瘤，二者具有一些共同的分子特征，包括微卫星不稳定性（MSI）、高甲基化和基因突变等[11]，但需要通过更大样本的研究来证实mSEPT9 对胃癌的诊断价值。G-17 是由胃窦G 细胞合成及分泌的多肽类激素，有促进胃黏膜细胞分化和增值的作用，其主要生理功能是促进胃酸的分泌，并可提示胃窦发生萎缩[12]。G-17 在健康人血液中的水平明显低于胃癌患者，其水平的高低与胃癌的发生部位及临床分期有一定的关系，因此该指标可应用于胃癌的筛查及诊断中。PG 是天门冬氨酸蛋白酶前体，有PG Ⅰ、PG Ⅱ两种亚型，可反映人体胃黏膜的状态[13]。PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17均为胃细胞形态学指标，可用于识别慢性萎缩性胃炎及明确胃黏膜萎缩的程度[14]。胃癌的发生需要经过长期、多阶段的逐步演变，由萎缩性胃炎、肠上皮化生、低级别和高级别不典型增生等癌前状态最终发展为胃癌[15-16]。因此，早期发现胃癌癌前状态并进行相应的干预及严密随访，能有效降低患者胃癌的发生率。

综上所述，与mSEPT9 检测相比，胃功能三项检查在胃癌癌前状态筛查中的应用价值更高，二者在胃癌筛查中的应用价值相当。由于血清学诊断具有便捷性、可行性、适合大规模人群筛查等优点，因此若能将胃功能三项检查联合血浆mSEPT9 检测运用于胃癌及胃癌癌前状态的筛查中，既能减少人们行胃镜检查的次数，又能阻止良性胃病进展为胃癌，有助于提高我国胃癌的早期诊断率和治疗率。本研究也存在一定的局限性，包括：1）样本量小，其中有一部分受检者行胃功能三项检查、血浆mSEPT9 检测后不愿意再行胃镜检查，导致病例脱落；2）缺乏病理诊断的支持。在未来的临床实践中，仍需依据大样本数据进行研究统计，以期进一步探索出早期胃癌筛查的可行途径。