原发性肾病综合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表达及相关性*

吴际, 赵静瑜, 李晓勇, 王乃平, 赵盼, 赵二丽

开封市中心医院 1血液透析室，2肾病风湿免疫科(河南开封 475000)

原发性肾病综合征是一种由肾小球损伤而引起的肾脏疾病，肾小球是肾脏的过滤单位，其无法过滤蛋白质，导致蛋白质漏入尿液，出现蛋白尿、低蛋白血症和水肿等[1-2]。原发性肾病综合征的病因和发病机制目前尚未有定论，其早期若不能得到及时治疗，随着病情发展，可能会导致急性肾功能衰竭等并发症，影响患者的生活质量和身心健康[3]。寻找相关指标用于指征原发性肾病综合征疾病状态或预测疾病恶化，可能对降低各类并发症的发生风险有重要意义。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)是硫氧还蛋白系统中的成员，可调节体内氧化应激水平[4]。微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)在炎症反应中发挥抗炎作用，且同时参与了机体炎症反应中的适应性免疫和固有免疫[5]。研究显示，TXNIP、miR-146a-5p均与肾脏病变有一定的相关性[6-7]。此外，miR-146a-5p/TXNIP轴通过抑制相关信号通路的自噬来减轻肠缺血再灌注损伤[8]。然而，有关二者对原发性肾病综合征的影响尚不清楚。因此，本研究通过检测原发性肾病综合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表达情况，分析二者表达相关性，以期为临床治疗原发性肾病综合征提供新的参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入2019年10月至2022年2月本院收治的85例原发性肾病综合征患者为肾病综合征组，男64例，女21例，年龄32～76岁，平均(54.24±9.57)岁。同期纳入85例健康体检者为对照组，男62例，女23例，年龄35～74岁，平均(53.26±8.78)岁。收集研究对象年龄、性别、体质指数(BMI)、吸烟、饮酒、糖尿病、高血压、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等资料，经对比，两组差异无统计学意义，具备可比性。见表1。本研究经本院临床伦理委员会审批通过(批号：KFZX-KYLL-2019285)，患者及家属知情同意，并自愿签署同意书。

表1 肾病综合征组与对照组一般资料比较

纳入标准：(1)原发性肾病综合征诊断符合相关标准[9]；(2)近1个月内无急慢性感染者；(3)患者资料完整。

排除标准：(1)合并有恶性肿瘤、恶性心律失常或其他器官功能损害者；(2)先天性肾脏疾病或继发性肾脏病变者；(3)合并严重内分泌疾病及自身免疫系统疾病者。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-146a-5p水平检测 抽取健康体检者体检时及原发性肾病综合征患者入组时(治疗前)静脉血5 mL，静置30 min后以3 000 r/min转速离心15 min，收集上层血清，置于-80℃冰箱待检。按照RNA提取试剂盒(上海羽哚生物科技有限公司)说明书提取血清中总RNA，检测其完整性后按照逆转录试剂盒(上海科敏生物科技有限公司)说明书对RNA进行逆转录操作以合成cDNA，此后采用美国Applied Biosystems公司生产的V115896型实时荧光定量PCR(qRT-PCR)仪检测血清miR-146a-5p水平，内参为U6，所用引物经软件设计后由北京鼎国生物科技有限公司合成，序列见表2。qRT-PCR反应体系共20 μL，反应程序为：94℃ 5 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，40个循环。血清miR-146a-5p相对表达量采用2-ΔΔCT法计算，每个样本各进行3次重复。

表2 qRT-PCR引物序列

1.2.2 血清TXNIP及肾功能指标检测 采用武汉益普生物科技有限公司生产的酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测血清TXNIP水平，采用德国西门子公司生产的Atellica CH930型全自动生化分析仪检测肾功能指标血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿酸水平。

2 结果

2.1 肾病综合征组与对照组肾功能指标比较 肾病综合征组BUN、Scr、尿酸水平显著高于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 肾病综合征组与对照组肾功能指标比较

2.2 肾病综合征组与对照组血清TXNIP、miR-146a-5p表达比较 肾病综合征组血清TXNIP表达显著高于对照组(P<0.05)，miR-146a-5p表达显著低于对照组(P<0.05)。见表4。

表4 肾病综合征组与对照组血清TXNIP、miR-146a-5p表达比较

2.3 原发性肾病综合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表达与一般资料及肾功能指标的相关性 Pearson相关分析结果显示，原发性肾病综合征患者血清TXNIP与miR-146a-5p表达呈负相关(r=-0.524，P<0.05)；TXNIP与BUN、Scr、尿酸呈正相关(P<0.05)，与Alb呈负相关(P<0.05)；miR-146a-5p与BUN、Scr、尿酸呈负相关(P<0.05)，与Alb呈正相关(P<0.05)。见图1、表5。

表5 原发性肾病综合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表达与一般资料及肾功能指标的相关性

图1 原发性肾病综合征患者血清TXNIP与miR-146a-5p表达的相关性

2.4 影响原发性肾病综合征发生的多因素logistic回归分析 以是否发生原发性肾病综合征为因变量，以TXNIP、miR-146a-5p、Alb、BUN、Scr、尿酸为自变量进行多因素logistic回归分析，结果见表6。

表6 影响原发性肾病综合征发生的多因素logistic回归分析

3 讨论

研究显示，肾病综合征的病理生理学涉及滤过屏障损伤，滤过屏障主要由足细胞、肾小球内皮、肾小球基底膜组成[10]。相关研究显示，肾病综合征患者体内存在不同程度的促炎状态、内皮功能障碍及氧化应激增加[11]。原发性肾病综合征的治疗形势目前仍十分严峻，无特异性用于治疗原发性肾病综合征的药物，而部分患者对传统治疗方案敏感性差，最终容易进展为终末期肾病[12]。原发性肾病综合征治疗方案可能会随着对其相关靶分子的深入认识而改变。

研究显示，活性氧簇(ROS)在维持细胞正常代谢和信号传导中发挥重要作用，ROS积累量超过体内抗氧化能力时，可诱发氧化应激反应，而TXNIP相关系统是机体内最重要的氧化应激调控机制[13-14]。TXNIP可通过抑制硫氧还蛋白的抗氧化功能来调节ROS的生成[15]。Dai等[16]研究显示，TXNIP介导的氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性激活的表观遗传调节有助于加重糖尿病肾病。本研究结果中，原发性肾病综合征患者血清TXNIP表达上调，且与肾功能指标BUN、Scr、尿酸均呈正相关。推测原发性肾病综合征患者体内处于高炎症反应及氧化应激状态，使得体内大量炎症因子和ROS生成并释放，进而诱发肾脏等脏器进一步产生更严重的损伤，同时TXNIP被激活后可抑制硫氧还蛋白的抗氧化功能，调节细胞氧化还原状态，进一步促进氧化应激反应。

许多研究显示，miRNA的异常表达在肾脏疾病中发挥着重要作用，且有望作为肾脏疾病的治疗靶点[17-18]。Li等[19]研究表明，人尿源性干细胞通过靶向miR-146a-5p在大鼠肾缺血/再灌注损伤模型中发挥保护作用。李莉等[20]研究显示，miR-146a-5p对高脂饮食/链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠肾组织具有保护作用，且其过表达能抑制炎症反应并改善肾小球损伤。本研究结果中原发性肾病综合征患者血清miR-146a-5p表达下调，且与TXNIP及肾功能指标均呈显著负相关。推测miR-146a-5p表达下降后，其调控生理生化指标以及改善肾小球滤过的功能降低，无法抑制炎症反应对肾脏的损伤。且鉴于TXNIP与miR-146a-5p表达的相关性，考虑miR-146a-5p可能同时通过负向调控TXNIP，使其表达水平升高，加重肾脏损伤。此外，本研究中多因素logistic回归分析结果显示，TXNIP、miR-146a-5p均是原发性肾病综合征发生的影响因素。进一步提示TXNIP、miR-146a-5p可能参与疾病发病机制，在原发性肾病综合征疾病进展中发挥重要作用，二者有望成为疾病治疗靶点，有待进一步基础研究深入探究具体调控机制。

综上所述，原发性肾病综合征患者血清TXNIP表达上调，miR-146a-5p表达下调，二者呈显著负相关，且均与肾功能指标呈显著相关性。血清TXNIP、miR-146a-5p检测可能对原发性肾病综合征疾病治疗具有潜在应用价值，且有望成为其治疗靶点。然而本研究病例数不足，入选研究对象有一定的随机性，无法完全排除部分系统误差和实验误差的干扰。且鉴于肾脏结构的特殊性，部分患者未能取肾脏组织进一步检验，造成研究较为单一。今后将扩充样本量，以获得更科学、客观且更具临床价值的结论。

利益相关声明：所有作者均声明不存在利益冲突。

作者贡献说明：吴际是本研究的实验设计者和实验研究的执行人，完成数据分析，论文的写作和修改；赵静瑜、李晓勇、王乃平、赵盼参与实验设计和试验结果分析；赵二丽数据分析；全体作者都阅读并同意最终的文本。