检测外周血EB病毒DNA载量对感染性疾病患者病情评估的临床意义

陶秀珍

（广西医科大学附属武鸣医院检验科，广西南宁 530199）

感染性疾病属于临床常见疾病，指病原微生物入侵导致的身体受损症状和感染应答表现。EB病毒是双链DNA病毒，属于一类嗜人B淋巴细胞病毒，而EB病毒感染是临床常见的病毒性传染病，所引起的症状轻重程度不一，会对患者的身体健康造成严重威胁[1]。结合患者的临床症状和实验室检查结果有助于判断其病情并对其临床转归情况开展预测。有研究显示，外周血EB病毒DNA（EBV-DNA）载量检测能准确且灵敏显示患者的EB病毒感染状况，早期提示并预测其病变程度[2]。本研究分析检测外周血中EBV-DNA载量对评估感染性疾病患者病情的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2020年1月至12月广西医科大学附属武鸣医院收治的293例感染性疾病患者的临床资料，选取EBV-DNA检测结果为阳性的68例患者，根据病毒载量[（1.0×104）copies/mL[3]中位数]的不同分为低病毒载量组（38例）和高病毒载量组（30例）。低病毒载量组患者中男性23例，女性15例；年龄14～86岁，平均年龄（49.28±5.62）岁；体质量指数（BMI）18.4～26.8 kg/m2，平均BMI（21.86±1.32） kg/m2；病程 1～30 d，平均病程（12.42±2.16）d。高病毒载量组患者中男性18例，女性12例；年龄14～87岁，平均年龄（49.62±5.40）岁；BMI 18.5～26.9 kg/m2，平均BMI（21.74±1.28） kg/m2；病程 1～32 d，平均病程（12.68±2.05）d。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＜0.05），组间具有可比性。本研究经广西医科大学附属武鸣医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①符合《感染性疾病诊疗指南》[4]中感染性疾病的诊断标准；②年龄14～87岁；③依从性较好。排除标准：①确诊为肺炎支原体、腺病毒、巨细胞病毒、风疹病毒、肝炎病毒、柯萨奇病毒或者肠道病毒71型等病毒感染者；②免疫系统或者血液系统存在基础病者；③临床资料不完整。

1.2 研究方法 抽取所有患者清晨空腹外周静脉血2 mL，将血液注入至2 mL乙二胺四乙酸钠盐抗凝剂（江西洪达医疗器械集团有限公司）的采血管中，摇动5～10次使其充分混合摇匀，待静脉血和抗凝剂混合均匀后，置于4～8 ℃环境下保存。按照1∶1的比例将1 mL血样和1 mL浓度为0.9%的氯化钠注射液混合均匀，然后将其缓慢注入装有500 μL淋巴细胞分离溶液（武汉生物制品研究所，国药准字S10930007，规格：100 mL）的离心玻璃管内，采用医用离心机（德州博昂生物技术有限公司，鲁德械备20200189号，型号：TD-5M-i ）以2 000 r/min转速离心20 min，采用塑料吸管吸取中间的白细胞层，然后置入1.5 mL刻度的离心管内，以12 000 r/min转速离心5 min，弃去上清液，混合均匀沉淀物和50 μL的DNA提取液，置于恒温100 °C环境下保存10 min，以12 000 r/min转速离心5 min，提取DNA待用。将提取的DNA样本上清液2 μL加到装有43 μL酶反应液（广州达安基因股份有限公司）的PCR反应管内，以8 000 r/min离心数秒，置于荧光定量扩增仪（美国ABI，型号：Step One Plus）样品槽内，结合对应顺序设置阳性定量参考物、阴性质控物、标准曲线和待测样本，开展相应循环条件设置同时结合参数对结果进行分析。

1.3 观察指标 ①比较两组患者常规外周血指标。抽取两组患者清晨空腹静脉血2 mL置于抗凝置管内，予以瑞氏血细胞染色，采用血细胞分析仪（迈瑞，型号：BC-6800 Plus）检测两组患者血白细胞计数（WBC）、异常淋巴细胞比例、淋巴细胞计数（LYMPH）及比例（LYMPH%）、单核细胞计数（MONO）及比例（MONO%）、血小板计数（PLT）及血红蛋白（HGB）水平。②比较两组患者生化指标。抽取两组患者清晨空腹静脉血2 mL置于无抗凝剂的真空试管内，采用全自动生化分析仪（德国罗氏，型号：P800）检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LD）、总胆汁酸（TBA）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及乳酸脱氢酶同工酶（LDH）水平。③分析常规外周血指标、生化指标与EBV-DNA载量的相关性。④比较两组患者退热及住院时间。⑤比较两组患者有效率。显效：结束治疗后发热、咳嗽、咳痰等临床症状消失，且实验室检查结果恢复到正常状态；好转：结束治疗后各项临床症状减轻，实验室检查结果改善；无效：结束治疗后各项临床症状、实验室检查结果无任何好转甚至加重[5]。总有效率=（显效+好转）例数/总例数×100%。

1.4 统计学分析 采用SPSS 23.0统计学软件进行数据处理。计数资料以[例(%)]表示，组间比较行χ2检验；计量资料以（）表示，组间比较采用独立样本t检验；相关性分析采取Spearman检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者常规外周血指标比较 两组患者WBC、MONO、MONO%、PLT、HGB水 平 比较，差异无统计学意义（P＞0.05），高病毒载量组患者外周血内的异常淋巴细胞比例、LYMPH、LYMPH%水平均高于低病毒载量组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者常规外周血指标比较（）

表1 两组患者常规外周血指标比较（）

注：WBC：白细胞计数；MONO：单核细胞；LYMPH：淋巴细胞；PLT：血小板；HGB：血红蛋白。

组别 例数 WBC(×109/L) 异常淋巴细胞比例(%) MONO(×109/L) MONO%(%)高病毒载量组 30 12.14±3.50 6.48±1.25 1.14±0.32 9.48±2.52低病毒载量组 38 11.50±3.62 1.85±0.48 1.16±0.28 9.68±2.40 t值 0.734 20.990 0.284 0.334 P值 0.465 0.011 0.777 0.740组别 例数 LYMPH(×109/L) LYMPH%(%) PLT(×109/L) HGB(g/L)高病毒载量组 30 6.26±1.35 48.46±12.14 280.14±60.12 115.62±25.18低病毒载量组 38 4.28±1.02 37.98±10.24 275.62±58.40 116.85±24.32 t值 6.891 7.191 0.313 0.204 P值 0.036 0.041 0.755 0.839

2.2 两组患者生化指标比较 两组患者ALT和AST水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），高病毒载量组患者血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平均高于低病毒载量组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者生化指标比较（）

表2 两组患者生化指标比较（）

注：ALT：谷丙转氨酶；AST：谷草转氨酶；LD：乳酸脱氢酶；TBA：总胆汁酸；CK-MB：肌酸激酶同工酶；LDH：乳酸脱氢酶同工酶。

组别 例数 ALT(U/L) AST(U/L) LD(U/L) TBA(μmol/L) CK-MB(U/L) LDH(U/L)高病毒载量组 30 36.78±9.76 50.62±14.15 334.12±58.16 12.68±2.45 31.78±6.02 60.96±15.84低病毒载量组 38 35.98±9.65 48.56±12.60 279.25±50.65 7.75±1.62 23.05±5.42 48.76±12.35 t值 0.338 0.634 4.154 9.958 6.280 3.570 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 常规外周血指标、生化指标和EBV-DNA载量的相关性分析 外周血中异常淋巴细胞比例、LYMPH、LYMPH%与外周血中EBV-DNA载量呈正相关（P＜0.05），血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平与外周血中EBV-DNA载量呈正相关（P＜0.05），见表3。

表3 常规外周血指标、生化指标与EBV-DNA载量的相关性分析

2.4 两组患者退热及住院时间比较 高病毒载量组患者的退热及住院时间均长于低病毒载量组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 两组患者退热及住院时间比较（d，）

表4 两组患者退热及住院时间比较（d，）

组别 例数 退热时间 住院时间高病毒载量组 30 4.95±1.32 8.96±2.14低病毒载量组 38 3.10±1.02 5.78±1.32 t值 6.522 7.531 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.5 两组患者有效率比较 高病毒载量组患者的有效率低于低病毒载量组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表5。

表5 两组患者有效率比较 [例(%)]

3 讨论

感染性疾病通常是因细菌、病毒和真菌或衣原体、支原体感染导致，机体免疫力降低易出现各类感染性疾病，影响患者健康。确定感染性疾病患者的病情严重程度后及时予以进一步治疗对促进康复、改善预后有着重要意义。EBV-DNA载量检测在诊断EBV感染中有着方便、迅速和特异度较高等特点，有助于提升诊断准确度，目前已有多类方法被应用到EBV感染检测中，但普遍存在假阳性率较高及检测率较低等缺点。

荧光定量PCR属于检测EBV-DNA载量一类准确、可靠、灵敏的技术，可较好反映出患者感染状况，病毒载量高低能作为评定患者病情的一项重要指标[6]。本研究收集感染性疾病患者的外周血，后经荧光定量PCR对其单个核细胞内的EBV-DNA载量开展检测，检测结果显示，高病毒载量患者外周血异常淋巴细胞比例与LYMPH、 LYMPH%高于低病毒载量组，伴随EBV载量不断增加，患者临床症状更为明显，能于常规外周血指标中体现出来。感染EBV病毒后，异常的淋巴细胞和病毒会浸润机体中各个脏器，引发全身性的脏器病理学改变，从而出现各类临床症状及相应实验室指标异常[7-8]。研究发现，感染EBV患者伴随EBV-DNA载量不断升高，其肝功能及心脏功能等生化指标水平也有明显上升[9]。本研究发现，高病毒载量组患者血清LD、TBA、LDH以及CK-MB水平高于低病毒载量组，说明随着EBVDNA载量增加，患者脏器的受损程度也在不断加重。本研究的创新之处在于分析了常规外周血指标、生化指标和EBV-DNA载量的相关性：结果显示，外周血中异常淋巴细胞比例、LYMPH、LYMPH% 与外周血中EBV-DNA载量呈正相关，血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平与EBV-DNA载量也呈正相关。与胡杰等[10]研究结果一致。本研究结果显示，高病毒载量组患者的退热及住院时间均长于低病毒载量组，且高病毒载量组患者的有效率低于低病毒载量组，由此可见，EBV-DNA载量高低对判断患者的临床转归有着重要的指示作用。

综上所述，检测外周血中EBV-DNA载量在感染性疾病患者病情评估及预后判断中有着重要价值，能为临床医师开展诊疗工作提供一定参考依据。但本研究依旧有不足，如纳入的病例数较少，且病例全部来源于同一家医院，得出的研究结果存在局限性，还需未来开展大样本、多中心、长期试验，以进一步证实上述结论。