生姜多糖对雏鸡外周血淋巴细胞体外增殖的影响

刘 迎，张雨晴，郝星惠，何 欣，李树鹏

（1.河北交通职业技术学院 050091；2.河北农业大学动物医学院 071001）

生姜是多年生草本姜（Zingiber officinale Rose）的根茎，因其营养丰富，口味独特，在我国有较大的种植面积。生姜富含多种化学物质，已有文献记载的成分超过200 种，其中糖类约占8.5%，是含量最高的活性成分[1-3]。近年来，植物多糖已引起人们的广泛注意，因大多具有良好的免疫增强效果、天然无污染、低毒副作用等，被视为“替抗”的最佳物质，在生产中的应用越来越广泛[4-6]。

目前对生姜中活性多糖成分的抗氧化作用有少量报道[7,8]，但对其增强动物免疫机能的研究鲜见。本研究将生姜多糖应用于雏鸡日粮中，观察对外周血CD4+和CD8+T 淋巴细胞亚群的影响，为其进一步在动物生产中的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

1 日龄海兰蛋雏鸡（公雏）共计300 只，购自易县永合养鸡场。随机分为5 组，每组60 只，组内设6 个重复。对照组雏鸡饲喂基础日粮（组成及营养水平见表1），生姜多糖处理组分别在基础日粮中拌料添加0.05%、0.1%、0.15%和0.2%的生姜多糖。

试验为期42d。全期采用分笼饲养，采用人工光照和自然光照相结合的养殖方式，机械通风加自然通风，自由采食和饮水，日常管理和疫苗免疫按鸡场常规进行。

1.2 试验药物

生姜多糖制备：生姜切片并干燥，粉碎过60 目筛，水提醇沉法提取，柱层析纯化得到生姜粗多糖，蒽酮-硫酸法测定多糖含量为28.57%，冰箱冷藏保存。

1.3 主要试剂和仪器

CD4+和CD8+鼠抗鸡单克隆抗体（购自Southern Biotech 公司）；淋巴细胞分离液（索来宝科技有限公司）；流式细胞仪(EPICS XL 型，美国Bechman 公司)。

1.4 试验方法

试验开始后于7、14、21、28、35 和42 d 每组选择12 只雏鸡（每个重复随机选取2 只）心脏采血，肝素抗凝，分离制备淋巴细胞悬液，用于检测外周血CD4+和CD8+T 淋巴细胞亚群数量。

外周血CD4+和CD8+T 淋巴细胞计数采用流式细胞术[9]。

1.5 数据处理

结果以±SD 表示，应用SPSS19.0 软件进行单因素方差分析，LSD 法进行组间多重比较。P ≤0.05 表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 雏鸡日粮添加GP 外周血CD4+T 淋巴细胞亚群计数

GP 对雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞亚群的计数结果见表2 和图1。与对照组相比，添加GP 7d 后4 个GP 组雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞数量均有增加，但差异不显著（P＞0.05）；14d 后雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞数量增加幅度明显提高。在14d 时，GP 添加量只在超过0.1%时，雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞数量增加差异显著（P ≤0.05）；21d 及之后，GP 添加量降到0.05%也能使雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞数量显著增加（P ≤0.05）。

图1 雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞计数（%）

表2 雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞计数 (%)

对4 个GP 添加剂量雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞数量进行比较，在28d 及以前，随GP 剂量增加，雏鸡外周血CD4+T 淋巴细胞数量有提高趋势但差异不显著（P＞0.05）；而35d 和42d 时，0.15 和0.2% 组 与0.05% 组 雏 鸡 外 周 血CD4+T 淋巴细胞数量差异显著（P ≤0.05），其余差异不显著（P＞0.05）。

2.2 雏鸡日粮添加GP 外周血CD8+T 淋巴细胞亚群计数结果

由表3 和图2 可见，4 个剂量GP 均可明显提高雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞数量，且随添加时间和剂量增加其提高效果逐渐加强。7d 时，仅0.15 和0.2% GP 添加组与对照组相比，雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞数量有显著提高（P ≤0.05）；而14d 时，则是0.1、0.15 和0.2% 3 个GP 剂量组雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞数量与对照组相比有显著提高（P ≤0.05）；21d 及之后，4 个GP 剂量均能使得雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞数量显著增加（P ≤0.05）。

表3 雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞亚群计数(%)

图2 雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞亚群计数（%）

比较4 个剂量GP 作用效果发现，在28d 之前，随GP 剂量增加，雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞数量逐渐增加，但仅0.05与0.2%剂量组之间差异显著（P ≤0.05）；而35d 和42d 时，0.05%与0.15、0.2%组之间以及0.1%与0.2%组之间雏鸡外周血CD8+T 淋巴细胞数量存在显著差异（P ≤0.05），其余各剂量组则差异不显著（P＞0.05）。

2.3 对雏鸡外周血T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值的影响

由表4 可知，与对照组相比，4 个GP 剂量组雏鸡外周血CD4+/CD8+比值均有所降低，但未达到差异显著（P＞0.05），且随GP 添加剂量增加，CD4+/CD8+比值有下降趋势。

表4 雏鸡外周血T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值

3 讨论

当机体遭受外来病原入侵时，会诱导机体功能性T 淋巴细胞的数量及活性发生巨大的变化[10]，在其中CD4+和CD8+T 淋巴细胞是参与对抗原识别的重要细胞[11]，此外，它们还具有刺激B 淋巴细胞活化与增殖、分泌多种免疫活性因子、介导细胞毒杀伤等作用、增强机体特异性免疫应答与抗体产生[12,13]，因此，CD4+和CD8+T 淋巴细胞亚群在血液中的分布，是临床上一个重要的免疫状态检测指标[14]。

本试验中雏鸡饲料添加生姜多糖后，雏鸡外周血CD4+和CD8+T 淋巴细胞亚群数量均有不同程度增加，表明生姜多糖在试验期内可有效提高雏鸡机体的免疫功能，但量效关系不明显，随着GP 添加剂量增加各组雏鸡CD4+和CD8+T 淋巴细胞亚群数量虽有升高趋势，但未达显著程度。

另外，临床上CD4+/CD8+比值往往在一个正常范围变动，偏离此范围常反映机体的免疫机能不正常[15]，尤其CD4+/CD8+比值偏大多预示机体免疫机能可能失调，如比值大于2 时临床上称为CD4+/CD8+值倒置，是机体免疫机能紊乱的重要特征[16]。对照组雏鸡7d 时CD4+/CD8+比值较高，可能与免疫器官发育不健全有关，随日龄增长其CD4+/CD8+比值也逐渐下降，表明雏鸡免疫系统发育速度加快，机体对疾病的抵抗力逐渐增强。而饲料中添加生姜多糖后，在一定程度上降低了雏鸡外周血CD4+/CD8+比值，表明生姜多糖可能减轻因免疫机能不足和紊乱等造成的雏鸡死淘情况。

综上所述，生姜多糖在雏鸡饲料中的使用剂量为0.05%，使用21d 后即可显著上调雏鸡外周血CD4+和CD8+T 淋巴细胞亚群数量，降低了CD4+/CD8+比值，可提高动物机体对抗原的免疫应答，增强机体的免疫力和抵抗力。