3种植物生长调节剂对洋桔梗离体培养的效应

赵瑞荣,白艳荣,蒋亚莲

(1.昆明市金殿名胜区,云南昆明 650224;2.昆明学院,云南昆明 650213;3.云南农业科学院花卉研究所,云南昆明 650201)

洋桔梗[(Raf) Shinners]为多年生草本植物,属洋桔梗属龙胆科,原产于美国科罗拉多州、内布拉斯加州、得克萨斯州和新墨西哥一带。从20世纪70年代开始,洋桔梗作为切花生产开始在日本和朝鲜等地流行。洋桔梗具有很高观赏价值,不仅能用作插花艺术,还可用作园林绿化。洋桔梗的盆栽用于装饰居室,点缀阳台,显示出高雅温馨的情调。洋桔梗采用种子繁殖,对发芽温度和水分的要求比较严格,发芽适宜温度在22～25 ℃,且生长周期长,繁殖速度慢,出苗率低,国内需求量大,难以满足市场供应,不利于市场开拓。综合上述问题,笔者借鉴相关研究，选用不同6-BA、NAA、IBA浓度组合对外植体洋桔梗进行增殖培养、生根培养,探讨最佳诱导培养条件,建立洋桔梗组培快繁体系,为洋桔梗的种苗快繁、规模化生产及工厂化育苗提供技术参考。

1 材料与方法

供试材料：盆栽洋桔梗小花托。试验地点：昆明学院农学楼组培室。MS培养基：母液 Ⅰ(大量元素)包括NHNO、KNO、CaCl·2HO、MgSO·7HO、KHPO；母液 Ⅱ(微量元素)包括KI、HBO、MnSO·4HO、ZnSO·7HO、NaMoO·2HO、CuSO·5HO、CoCl·6HO；母液Ⅲ(铁盐)包括FeSO·7HO、Na-EDTA·2HO。生长素NAA、IBA、细胞分裂素6-BA。试剂及仪器：高压灭菌锅、镊子、解剖刀、酒精灯、三角瓶、无菌水、70%乙醇、 95%乙醇、2%～5%次氯酸钠、分析天平、pH计、电子天平、玻璃仪器(容量瓶、烧杯、锥形瓶、玻璃棒、量筒等)、移液枪、剪刀、高温灭菌器、烘烤箱等。

以云南省昆明市斗南花卉盆景苗木批发市场的盆栽洋桔梗植株作为试验材料,利用MS为基础培养基,然后向MS培养基中加入不同种类和配比的激素。不同激素的浓度梯度：6-BA mg/L为0.1、0.3、0.6、1.0 mg/L,IBA为0.1、0.2、0.5 mg/L,NAA为0.01、0.10、0.20、0.30、0.50、0.60、1.00 mg/L。设16个处理,每处理接种10瓶,其中设置1个以MS不加任何激素的培养基为空白对照。具体配方如下：

(1)继代培养。对照(CK)：MS；处理①:MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.10 mg/L;处理②:MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.10 mg/L；处理③:MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L；处理④:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.20 mg/L；处理⑤：MS+6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.1 mg/L；处理⑥：MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L；处理⑦：MS+6-BA 0.6 mg/L+IBA 0.2 mg/L；处理⑧：MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L。

每处理重复3次,每处理配置10瓶培养基,在无菌操作台上进行接种,然后移入培养室内,与CK进行比较,在相同温度、相对湿度、光照时间等条件下,通过分析15种不同激素配比组合和CK的影响,选择最佳激素类型和组合。

培养基配置。初代培养基配方为MS+NAA 0.10 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.2 g/L,则继代培养和生根培养中加入上述不同种类和浓度的激素配比,pH调至5.8。

培养基的灭菌与消毒。将配置好的培养基迅速装入玻璃瓶中,然后把装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅的架子上,推入灭菌锅中,在121 ℃条件下,高温灭菌30 min。取出后放置冷却,待培养基凝固后,进行接种。

洋桔梗花托的处理。先选取盆栽洋桔梗中生长健壮的植株,然后选择生长茁壮的小花托，用剪刀剪下未开放的小花托。

接种。在无菌条件下,每个培养瓶中接入2个花托。

将接种后的洋桔梗移入相应的培养室进行培养,培养室要求干净整洁,经常消毒,以防环境污染。培养条件为光照强度2 000～2 500 lx,培养温度为22～25 ℃,光照12 h/d。

每7 d观察1次组培苗植株的生长情况及污染情况,35 d后统计每个处理的增殖率、生根率、根长、根粗、植株长势。

2 结果与分析

从图1可见，洋桔梗丛生芽的增殖率与6-BA、NAA、IBA激素种类和浓度有关,CK与处理③、⑥差异显著；处理③、⑥的增殖率远高于其他处理。处理⑥与处理③间差异显著,CK与处理①、②、④、⑦间差异不显著。由此可知,洋桔梗增殖率的最佳激素浓度配比为MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L和MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

注：不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significant differences between treatments(P<0.05)图1 不同激素配比对洋桔梗增殖率的影响Fig.1 Effects of different hormones on the proliferation rate of Eustoma grandiflorum

注：不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significant differences between treatments(P<0.05)图2 不同激素配比对洋桔梗生根率的影响Fig.2 Effect of different hormone on the rooting rate of Eustoma grandiflorum

表1 不同激素组合对洋桔梗根长的影响

注：不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significant differences between treatments(P<0.05)图3 不同激素配比对洋桔梗根粗的影响Fig.3 Effects of different concentrations of hormones on root coarseness of Eustoma grandiflorum

3 讨论

该研究选择一个空白对照组,以MS为基础培养基,加入不同浓度的植物激素配比,对洋桔梗进行继代培养和生根培养,因为不同植物有其适宜的细胞分裂素和生长素种类,合适的细胞分裂素和生长素浓度在洋桔梗继代培养和生根培养过程中起着不同的作用,同一种激素种类与不同的激素种类搭配影响效果也不同,同一浓度的激素种类配比在不同培养基中对其影响效果不同。对洋桔梗的增殖培养研究结果表明,因洋桔梗品种、采用的外植体不同,初代培养基和继代培养基中 6-BA、IBA和 NAA适宜的浓度及比例有较大差异。对洋桔梗增殖率的影响效果中,MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L和MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L的增殖率较好,适合洋桔梗的生根培养基为1/2MS+NAA 0.60 mg/L+IBA 0.1 mg/L、1/2MS+NAA 0.50 mg/L、1/2MS+NAA 0.01 mg/L。

4 结论

该研究结果表明，洋桔梗继代培养和生根培养过程中,适合洋桔梗增殖率的最佳激素配比为MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L、MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L,在这2个浓度激素的处理下,洋桔梗的增殖率较好,其中NAA浓度为0.2 mg/L,6-BA浓度为0.3和0.6 mg/L,IBA浓度为0.1 mg/L,洋桔梗的增殖率达到较好效果,当6-BA浓度超过0.6时,影响丛生芽的增殖率,增殖率降低。在洋桔梗生根培养中,适合洋桔梗生根率最佳的激素浓度配比：1/2MS+NAA 0.60 mg/L+IBA 0.1 mg/L、1/2MS+NAA 0.50 mg/L、1/2MS+NAA 0.01 mg/L,在这3个激素组合处理下洋桔梗生根率达到较好效果,当NAA浓度超过0.60 mg/L时,种苗出现黄化现象,因此适合洋桔梗生根的NAA浓度为0.01、0.50、0.60 mg/L,IBA浓度为0.1 mg/L。