海南热带雨林野猪非洲猪瘟主动监测预警结果及分析

冯悦恒，郑全军，王光利，李佳灵，刘辉

1.海南大学林学院，海南海口 570228；

2.海南省野生动植物保护管理局，海南海口 570203；

3.海南大学生态与环境学院，海南海口 570228

非洲猪瘟（African Swine fever）是由非洲猪瘟病毒（African Swine fever virus）感染家猪与各种野猪（如非洲野猪、欧洲野猪等）引起的一种急性、出血性、烈性传染病[1]。由于野猪活动范围广，流动性强，感染病毒后极易散播疫病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病[2]，该病同样也是中国重点防范的一类动物疫情。2018 年8 月，中 国国内暴发了非洲猪瘟疫情，并且迅速蔓延至全国众多地区。相关数据显示，2018～2021 年，国内共发生194起非洲猪瘟疫情，该疫情破坏了市场上生猪的良性供应，影响了城镇居民的日常生活以及社会经济的稳步发展[3]。

海南是中国动物基因资源最丰富的地区之一[4-5]，有全球最为濒危的海南黑冠长臂猿与坡鹿，还有水鹿、山鹧鸪、猕猴等珍贵的野生动物资源[6]，是中国单位面积生物多样性最为丰富的热带岛屿和全球35 个生物多样性热点地区之一[7]。自20 世纪90 年代后，顶级捕食者云豹、黑熊等鲜有发现其痕迹，如今野猪成为了海南省林区内体型最大者之一，对于维持整个海南岛屿型森林生态系统的稳定具有重要意义，一旦群居性的野猪感染该病毒，扩散速度将会非常快，导致野猪大面积死亡。野猪种群的剧烈下降或局部灭绝意味着岛屿型森林生态系统的崩塌，将对整个热带雨林生态系统造成难以估量的重大伤害[8]，及时了解野猪种群感染非洲猪瘟情况及强度，对于海南热带雨林国家公园生态安全及生态功能的发挥至关重要。

为进一步做好野猪非洲猪瘟监测防控各项工作，及时阻断疫情的传播，按照国家林草局相关规定与要求，在海南热带雨林资源丰富，可能存在散养家猪与野猪重叠分布的区域进行野猪的捕捉、取样等工作。旨在分析非洲猪瘟病毒在区域内的传播风险和趋势，以期为防疫科学决策提供依据，同时也能为海南热带雨林国家公园和相关林区的野猪管理工作和疾病防控提供有效建议。

1 材料与方法

1.1 采样区域和猎捕方法

据顾家安等的研究[9-11]以及以往各保护区和林业局野猪资源分布情况，结合海南省非洲猪瘟疫情发生区域，选择了家猪与野猪存在交叉接触、野猪出没频繁和距疫点10km 左右的浅山地区为主要区域。其中黎母山、鹦哥岭、五指山、霸王岭、猴猕岭等林区（及辖区内森林类型自然保护区）为重点采样区域。根据徐飞等人的研究，食物丰度、隐蔽性、坡度和坡度位置四大因素是野猪栖息地选择的决定性因素，野猪喜欢半阴半阳的山坡、下坡、缓坡、适度干扰以及隐蔽性强、食物丰富的生境类型[12-13]，选择以上位置作为样品采集地点。

野猪生性凶猛,攻击性强，野猪的野外捕捉十分困难。目前常用的猎捕方法主要包括猎套法、兽夹法、围猎驱赶法、猎枪射击法、笼捕法等[14]。由于海南省野生动物监管严格，不允许枪打猎，此次捕捉主要采用对野外环境破坏小、非损伤小的猎夹和猎套法，所有猎捕均获得海南省林业局行政许可。野猪的捕捉共分3 次进行，一共布设兽夹250 余个、猎套600余个，在猎捕区域内及周边张贴醒目警示标语，禁止人和家畜进入采样区。

1.2 样品采集和运输

按照操作规程和相应麻醉剂剂量，使用吹管法对捕获野猪进行麻醉，待野猪彻底失去行动力后，再宰杀采集野猪组织、血液等样品。

野猪宰杀时，使用含有EDTA 抗凝剂的采集管采集血液2ml～5ml。组织样品包括淋巴结(颌下淋巴结、肠系膜淋巴结或腹股沟淋巴结)、扁桃体、心、肺、脾、肝、肾等脏器。采取3cm 左右见方的小块，每种样品单独存放[15]。采集的血液、组织样品可置于放有冰袋的采样箱中保存，长时间保存时可冷冻于-80℃冰柜或冰箱冷冻层保存。运输时，保证样品处于低温环境。采集完样品后对野猪尸体进行深埋（无公害处理），并使用生石灰进行消毒[16]。

1.3 PCR 处理

采集的血液与组织等样品使用世界动物卫生组织（OIE）推荐的PCR 检测方法。使用灭菌的剪刀与镊子取野猪组织样品约米粒大小，加入10mL PBS 或生理盐水混合，混合后的样品放入离心管内，管中加入研磨珠后使用组织研磨机进行研磨(可根据不同的样品调节研磨时长)。将研磨充分的组织样品或血液样品进行金属浴60℃灭火处理30min，处理后取出使用瞬时离心机离心3 次。准备30μL 处理液A加入15mL 离心管，每管分别加入已处理的样品3μL后摇匀，室温条件下放置5min，漩涡震荡30 s，每管再加入30μL 处理液B (同时作为阴性与阳性对照)，充分摇匀。取待检样品，阴阳对照每孔5uL 加入到非洲猪瘟病毒荧光PCR 检测试剂管中，漩涡震荡，再次瞬时离心3 次，移至扩增检测区。将PCR 管放入PCR 仪，按照既定循环和温度进行扩增，并进行凝胶电泳检测，通过确定目标条带是否出现判断样品是否感染非洲猪瘟[17]。

2 采集结果与分析

2.1 样品采集信息

2019 年9 月到2021 年12 月，在海南省霸王岭、鹦哥岭、五指山、黎母山、大田、白沙县细水乡等区域共完成20 头野猪的样品采集（样品采集点见图1）。整体采样较为顺利，除一头野猪为自然灾害台风致死外，其余所有个体均为活体处死后采集样品（样品采集现场见图2），经检验，新鲜内脏及血液样品完全能满足检测要求，所有样品储藏至-80℃超低温冰箱。

图1 海南省野猪样品采样点Fig.1 Sampling Sites of Wild Boar in Hainan Province

图2 野猪屠宰及样品采集Fig.2 Wild Boar Execution and Sample Collection

2.2 非洲猪瘟病毒检测

野猪样品于2020 年12 月13 日至2022 年1 月10 日分批次进行核酸检测，于2022 年1 月17 日完成全部20 只野猪样品的核酸检测工作。结果显示，所有样品的非洲猪瘟病毒核酸皆为阴性，表明20 头野猪均未感染非洲猪瘟病毒。

部分电泳图见图3。

图3 海南省野猪样品PCR 部分检测结果Fig.3 Partial Results of Electrophoresis Detection of Wild Boar Samples in Hainan Province

3 讨论

3.1 非洲猪瘟的传播和预警

非洲猪瘟在中国第一次暴发是在2018 年8 月，截止到2021 年，共发生非洲猪瘟疫情194 起，暴发的地区包含辽宁省、黑龙江省、云南省、内蒙古自治区、北京市等多个省（市）[18]。在此期间，多地采用宰杀与焚烧等措施来预防和阻止疫情的扩散[19]。而对于已确诊疫情的生猪，通常采用快速扑杀及高温处理尸体的方式，以免病菌继续传播感染[20]。一般情况下，非洲猪瘟只在家猪中暴发严重，但个别地区也存在野猪感染的情况。特别是近些年来，多数养殖户为适应生态市场需求，将家猪散放到野外养殖，这种散养或混养模式极易使疫情在家猪与野猪中传播[21]。除了避免因散养而导致的疫情传播以外，应该加强非洲猪瘟疫情防控知识的推广与普及力度。通过定期走访和宣传，尤其是一些交通和经济比较落后，讯息传达不及时的偏远地区。科普疫情的有关知识内容，指导养殖户进行家猪的疫苗接种以及卫生管理等工作。

2019 年4 月，非洲猪瘟疫情在海南省万宁市和儋州市暴发，随后在海口市秀英区、澄迈县、保亭县和陵水县也接连发生疫情，当地生猪依照海南省的要求采取无害化扑杀和消毒，并严格禁止所有生猪及其产品进出封锁区域[22]。非洲猪瘟在海南省的暴发及传播都极为的迅速，其中部分原因来自于当地的传统习俗。如今，海南仍有居民保留着食用野生动物的习惯，所以诸多地区还存在着打猎与盗猎的现象，也一直有人将野猪驯化后圈养起来，或将家猪大面积的散养在野外，导致家猪与野猪的活动更加密切。比如，海南的“五脚猪”则是家猪与野猪杂交而来[23]。因此海南野猪面临着更高的感染风险，切断家猪与野猪之间的交流成为控制疫情在野外传播最关键的一环。相关部门应加强宣传和管控力度，严格禁止偷猎、盗猎等行为。反对家猪散养，提倡家猪标准化规模养殖，避免家猪与野猪混养的情况出现，并引导养殖户改善动物防疫条件[24]。完善畜禽养殖用地政策，保障规模养猪场户发展用地，以支持生猪企业区域化全产业链发展。

3.2 非洲猪瘟主动监测预警注意事项

海南省开展野猪非洲猪瘟主动预警难度较大，在五指山、霸王岭、黎母山等地虽曾报告过野猪出现信息（内部通信），但近些年海南未开展过野猪种群的有效科学监测，也未发生过大面积的野猪灾害，导致对野猪资源情况把握不定，这在一定程度上限制了主动预警工作的准确性。海南省严格禁猎，没有专业的打猎队，只能采用一些陷阱来抓捕野猪，使得工作效率大大降低的同时，还增加了捕捉工作的难度。陷阱布设处都设置了醒目标语，但仍存在伤及人畜的事件，也可能伤害到其他野生动物，因此存在一定的安全隐患。海南极端气候频发，夏季时台风暴雨较多，剧烈的气候变化在一定程度上阻碍了主动预警监测工作。另外，尽管海南省林业局对野猪猪瘟的预警工作项目进行了行政审批，但实际执行过程中仍然存在一定的法律风险，希望国家有关部门出台有关规定，推动主动预警工作合法开展。

3.3 非洲猪瘟主动监测预警建议

基于2019 年以来开展野猪非洲猪瘟主动预警工作，该文建议相关部门定期开展林地周边社区居民（尤其进入林区的护林员等）生态安全培训，提高人群对猪瘟防控知识的学习和掌握[25]，坚决杜绝非洲猪瘟以任何形式进入野猪栖息地。积极开展野生动物监测，尤其是居民区周边10 公里范围内的野猪种群动态监测，掌握全域可能存在野猪感染非洲猪瘟的关键区域，加大排查力度，加强管控措施[26-27]。建立固定主动预警监测站点群和信息收集网络，在海南省建立30 个以上固定监测站点[28]，每月定期收集野猪、虫媒、土壤等样品进行检验，各乡镇及村屯及时汇报区域内野猪出现和健康信息。

4 趋势预测

2022 年伊始，非洲猪瘟疫情继续肆虐全球各地，匈牙利、南非、意大利、波兰、俄罗斯、乌克兰、泰国、塞尔维亚、保加利亚等各处均出现了家猪或野猪感染非洲猪瘟的情况，多地同时出现家猪和野猪感染致死病例。另外，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家非洲猪瘟专业实验室研究发现，基因I 型非洲猪瘟病毒已入侵中国田间猪群，并将导致慢性感染[29]。如果发现症状和非洲猪瘟感染个体相似的个体样本缺未检测出的情况，应该及时对其进行进一步研究。当然，对于有类似症状的野猪也不能直接断定为感染了非洲猪瘟[30]，要采取科学的方法确认病情，对病毒的变异进行研究。全球各地从疫情流行趋势来说，2022 年非洲猪瘟防控的总体形势“依然复杂严峻”。

从海南野猪主要分布区的五指山、霸王岭、鹦哥岭、黎母山等地区采集的20 份野猪样品经过检验后，均未发现感染非洲猪瘟病毒，一定程度上表明目前海南省的非洲猪瘟疫情尚未波及到野外野猪种群。未来数年海南省圈养家猪暴发非洲猪瘟疫情的可能性仍较大。考虑到目前散养野猪已捕杀殆尽，基本切断了非洲猪瘟由家猪向野猪传播的渠道，海南省野猪暴发非洲猪瘟疫情的风险较低，只存在零星区域野猪小范围感染的可能性。