覆盆子不同多酚组成及抗氧化、抗糖尿病活性

张 露，王夜寒，梅强根，严玉杰，程鑫鹏，谢作桦，贾晓燕，涂宗财,3,*

（1.江西师范大学生命科学学院，国家淡水鱼加工技术研发专业中心，江西 南昌 330022；2.江西德上制药股份有限公司，江西 赣州 331200；3.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室，江西 南昌 330022）

多酚类化合物是广泛存在于植物体的次生代谢产物，是重要的生物活性物质，能有效预防炎症、高血压、癌症、糖尿病、衰老等。根据多酚类化合物在植物组织中的存在形式，可分为游离多酚（free polyphenols，FP）和结合多酚（bound polyphenols，BP）。FP是指可通过有机溶剂和水溶剂直接从植物中浸提出来的多酚类化合物，根据溶剂类型又可分为水溶性多酚（water-soluble polyphenols，WSP）和醇溶性多酚（ethanol-soluble polyphenols，ESP）；BP是指与细胞壁物质（纤维素、蛋白、木质素等）以共价键、氢键或疏水作用结合的不溶性多酚类化合物，不能通过水或有机溶剂直接提取，须先采用碱、酸或酶水解的方式对原料进行处理，再用有机溶剂萃取。通常，直接溶剂浸提后的固体残渣中仍含有大量的BP，Pérez-Jiménez等比较分析了24 种蔬菜水果中结合态多酚的含量，其中苹果、香蕉、西兰花、牛皮菜、莴苣叶、橙子、梨中BP的含量均超过1 000 mg/100 g干原料，香蕉的BP含量最高，为3 283.4 mg/100 g干原料。Huang Zhiting等对羊栖菜、海带、龙须菜等7 种藻类的BP进行分析，发现藻类中BP的含量和抗氧化活性均高于FP。Reynoso-Camacho等发现橙子、柑橘和葡萄柚中也含有丰富的BP。研究表明，BP具有多种功能活性，如Liu Shuai等发现胡萝卜BP具有抗氧化和促进鼠李糖乳杆菌生长的功能；Zheng Yuting等研究发现，绿豆皮膳食纤维BP具有很好的抗氧化、-淀粉酶和-葡萄糖苷酶活性抑制能力，酚酸为其主要活性成分。

覆盆子（Hu）是蔷薇科悬钩子属多年生灌木，又称悬钩子、覆盆莓、树莓、野莓等，广泛分布于中国东部和东南部。其红色成熟果实可作为浆果直接食用，或加工成果浆等，未成熟绿色果实干燥后可入药。研究表明，覆盆子提取物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗糖尿病、降血脂等功能活性，多酚类化合物，如可水解单宁、酚酸、黄酮类为其主要活性成分。但目前只研究了覆盆子FP的组成和活性，鲜见关于覆盆子BP的相关研究。

本研究采用不同方法分别提取覆盆子中的WSP、ESP、FP和BP，评价不同类型多酚提取物中总酚、总黄酮和可水解单宁的含量，通过体外实验评价不同类型多酚的抗氧化和抗糖尿病活性，并通过超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱（ultra-high performance liquid chromatography-tandem quadrupole time of flight mass spectrometry，UPLC-QTOF-MS/MS）技术对BP的化学组成进行鉴定，为覆盆子的综合利用提供一定理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

覆盆子干燥果实于2019年购自江西省德兴市利秋覆盆子种植专业合作社，粉碎机粉碎后4 ℃保存备用。

2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、对硝基苯---葡萄糖苷（-nitrophenyl---glucopyranoside，NPG）、阿卡波糖、-葡萄糖苷酶（分析纯） 美国Sigma公司；没食子酸、槲皮素（分析纯） 北京索莱宝科技有限公司。

1.2 仪器与设备

KQ5200E型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；RV10旋转蒸发仪 日本EYELA公司；Synergy H1型酶标仪 美国Bio Tek公司；UPLC-TripleTOF 6600-MS/MS美国Sciex公司；FA1104N型电子分析天平 上海丙林电子科技有限公司；F-7000荧光分光光度计 日本日立公司；LGJ-1D-80冷冻干燥机 北京亚泰科隆仪器技术有限公司。

1.3 方法

1.3.1 覆盆子中WSP、ESP、FP和BP的提取

称取一定质量的覆盆子粉末按1∶20（g/mL）的料液比分别与水、40%乙醇溶液混合，50 ℃浸提2 h后抽滤，收集上清液，将残渣在相同条件下再次提取，4 000 r/min离心5 min后合并上清液。

水提物浓缩至1/5～1/6体积后加入5 倍体积的无水乙醇过夜醇沉，除去部分蛋白、糖等杂质，抽滤，收集滤液，浓缩得到WSP提取物。

水提取后的残渣再用70%乙醇溶液按照1∶20（g/mL）的料液比超声波提取2 h，重复提取2 次。合并上清液后浓缩干燥得到ESP提取物。

40%乙醇提取物直接浓缩干燥后得可溶性FP提取物。

向40%乙醇溶液提取后的残渣中加入4 mol/L NaOH溶液，无氧条件下处理90 min。用6 mol/L 盐酸溶液调pH值至2.0，抽滤。收集滤液，浓缩滤液到原体积的1/5后加入等体积的乙酸乙酯进行萃取，重复萃取3 次，合并3 次萃取得到的乙酸乙酯相，浓缩干燥后得到不可溶性BP提取物。

1.3.2 覆盆子多酚提取物中总酚、总黄酮、总可水解单宁含量测定

1.3.2.1 总酚含量测定

参照Huang Zhiting等的方法，采用Folin-Ciocalteau比色法。200 μL适宜浓度的复溶提取物溶液或没食子酸与0.1 mL Folin-Ciocalteau试剂反应5 min，加入0.3 mL 0.2 g/mL NaCO溶液和1.0 mL蒸馏水，避光反应25 min后，采用酶标仪测定反应体系在765 nm处的吸光度，以蒸馏水代替样品作空白。以20～100 μg/mL的没食子酸溶液为标准品绘制标准曲线。结果以每毫克提取物中所含没食子酸当量表示（μg/mg）。

1.3.2.2 总黄酮含量测定

采用AlCl·6HO比色法。100 μL适宜浓度的复溶提取物溶液或槲皮素与100 μL 60 mg/mL AlCl·6HO溶液在室温条件下反应15 min后，测定其在430 nm处的吸光度，用无水乙醇代替样品作空白。以31.25～250 μg/mL槲皮素溶液标准品绘制标准曲线。结果以每毫克提取物中所含槲皮素当量表示（μg/mg）。

1.3.2.3 可水解单宁含量测定

采用Zhang Lu等的方法。100 μL适宜浓度的提取物与150 μL 2.5%（g/mL）碘酸钾溶液室温反应15 min后，于550 nm处测定吸光度，以没食子酸为标准品绘制标准曲线，结果以每毫克提取物中所含没食子酸当量表示（μg/mg）。

1.3.3 抗氧化活性测定

采用DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除能力评价不同提取物的抗氧化能力。取50 μL不同浓度的复溶提取物溶液或槲皮素于96 孔酶标板中，加入150 μL 0.15 mmol/L DPPH自由基乙醇溶液或ABTS阳离子自由基溶液，室温避光反应一定时间后，分别测定其在517 nm和734 nm处的吸光度（）。用70%甲醇溶液代替样品、分别用70%甲醇溶液和无水乙醇代替样品和自由基溶液、用无水乙醇代替自由基溶液的反应体系分别为控制组（）、空白组（）和样品空白组（）。自由基清除率的计算公式如下：

1.3.4 体外抗糖尿病活性测定

1.3.4.1-葡萄糖苷酶抑制活性的测定

参照Chen Yue等的方法。取50 μL适宜浓度的复溶提取物溶液与50 μL 0.1 U/mL的-葡萄糖苷酶于96 孔酶标板上混匀，室温反应6 min后加入50 μL 5.0 mmol/L的NPG，37 ℃反应10 min后加入100 μL 0.2 mol/L NaCO溶液终止反应，在405 nm处测定吸光度（）。以阿卡波糖为阳性对照品，以不含提取物样品的反应体系为控制组，以不含酶的反应体系为样品空白组，以不加酶和提取物样品的反应体系为空白组，最后计算样品的-葡萄糖苷酶抑制率和半抑制浓度（IC值）。

1.3.4.2 抗糖基化活性的测定

参照前期实验方法，以抑制晚期糖基化产物（advanced glycation end-products，AGEs）形成的能力为评价指标，采用牛血清白蛋白-丙酮醛（bovine serum albumin-methylglyoxal，BSA-MGO）模型评价样品抗糖基化能力。20 mg/mL BSA、30 mmol/L MGO和氨基胍盐酸盐溶液均由pH 7.4 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液配制，将BSA、MGO和提取物溶液按照体积比10∶10∶1混合。37 ℃避光反应3 d后，采用荧光分光光度计测定反应体系在激发波长370 nm、发射波长440 nm处的荧光强度值（FI），激发和发射的狭缝宽度均为5 nm，扫描速率为1 200 nm/min，电压为400 V。以提取物的溶剂代替提取物溶液的反应体系为控制组（FI）、以磷酸盐缓冲液代替MGO溶液的反应体系为样品空白组（FI）、分别以提取物样品溶剂和磷酸盐缓冲液代替样品和MGO溶液的反应体系为空白组（FI），荧光性AGEs形成抑制率的计算公式如下：

1.3.5 覆盆子多酚提取物化学成分测定

采用UPLC-QTOF-MS/MS对提取物中的主要化学成分进行定性分析。用80%乙醇溶液溶解1.3.1节中制备的提取物，加入-2-氯苯丙氨酸为内标，4 ℃、13 000 r/min离心10 min，取上清液过0.22 μm有机膜后上样分析。

1.3.5.1 色谱条件

ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相A：0.1%甲酸-水；流动相B：0.1%甲酸-乙腈；梯度洗脱：0.01 min，95% A、5% B；2 min，95% A、5% B；4 min，70% A、30% B；8 min，50% A、50% B；10 min，20% A、80% B；14～15 min，0% A、100% B；15.1～16 min，95% A、5% B；柱温：45 ℃；洗脱流速：0.35 mL/min；进样体积：2.0 μL。

1.3.5.2 质谱条件

扫描模式：负离子；离子源：电喷雾离子源；离子源温度：550 ℃；质量扫描范围：/40～2 000；离子喷雾电压：-4 000 V；一级质谱碰撞能：-10 eV；二级质谱碰撞能：-35 eV；雾化气体压力：55 psi；辅助气体压力：55 psi。

1.4 数据处理

所有实验重复3 次，结果用 ±表示。采用SPSS 13.0软件中的单因素方差分析进行统计分析（＜0.05，差异显著），采用Pearson相关性分析法对总酚、总黄酮和总水解单宁含量与生物活性间的相关性进行分析，采用PeakView软件对质谱数据进行处理，所有图形由Origin 8.0软件绘制。

2 结果与分析

2.1 覆盆子多酚提取物中总酚、总黄酮和总可水解单宁含量分析

如表1所示，不同提取物中的总酚、总黄酮和可水解单宁含量有一定差异，不同提取物中总酚含量从高到低的顺序为：ESP＞FP＞BP＞WSP；总黄酮含量为：BP＞ESP＞FP＞WSP；可水解单宁含量为：ESP＞FP＞BP＞WSP。所有提取物中，ESP提取物中的总酚和可水解单宁含量最高，分别为414.95 μg/mg和182.47 μg/mg，其次为FP提取物，而WSP提取物中的总酚、总黄酮和可水解单宁含量均为最低。

总酚和可水解单宁含量在ESP提取物中分别为FP提取物中1.32 倍和1.89 倍。这是因为，覆盆子粉在水浸提过程中，原料中大部分蛋白、多糖、矿物质、维生素等非多酚类化合物溶于水，使70%乙醇溶液二次提取制备的样品中蛋白、多糖等杂质的含量远低于直接使用40%乙醇溶液提取的样品。Zhang Lu等研究发现，藜蒿水提物中多糖含量约为乙醇提取物的6.9 倍。另外，多糖、蛋白等非多酚类化合物在高浓度乙醇中的溶解性往往低于低浓度乙醇，这进一步促使ESP提取物的多酚含量高于40%乙醇提取物。Wu Chunnan等研究表明，啤酒花醇提物的总酚含量高于热水提取物，其提取物中黄酮含量随乙醇浓度的增加而增加。以上结果表明，在实际生产应用中，水提取后的覆盆子残渣，可作为提取覆盆子多酚的优质原料。

所有提取物中，BP提取物的总黄酮含量最高（177.48 μg/mg），其次为ESP提取物，这说明覆盆子中存在丰富的与膳食纤维等细胞壁成分结合的黄酮类物质，乙醇溶液提取后的覆盆子残渣同样具有很好的进一步利用的潜力。目前已发现黑豆、红米、芒果、橙子等谷物、水果的BP提取物含有丰富的黄酮类化合物。

表1 覆盆子中WSP、FP、ESP和BP提取物的总酚、总黄酮和可水解单宁含量及其清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性的IC50Table 1 Contents of total phenols, total flavonoids and hydrolyzable tannins in WSP, FP, ESP and BP-rich extracts of R. chingii Hu, and IC50 for radical scavenging and α-glucosidase inhibitory activity

2.2 覆盆子多酚提取物的抗氧化活性分析

2.2.1 DPPH自由基清除能力分析

DPPH是一种比较稳定的自由基，被广泛用于评价天然产物的抗氧化活性，样品清除自由基的IC值越低，说明其抗氧化活性越高。如表1和图1A所示，所有提取物均具有较好的DPPH自由基清除能力，在质量浓度低于250 μg/mL时呈很好的量效关系，ESP提取物的DPPH自由基清除能力最强，其IC值为40.68 μg/mL，略低于阳性对照品槲皮素的DPPH自由基清除能力（IC＝15.20 μg/mL），其次是BP提取物，IC值为44.57 μg/mL，自由基清除能力最弱的是WSP，IC值为128.12 μg/mL。可能是因为ESP提取物含有最高的总酚和可水解单宁含量。相关性分析发现，提取物的DPPH自由基清除能力与可水解单宁含量极显著相关，相关系数为0.773；与总酚和总黄酮含量显著相关，相关系数分别为0.667和0.697。另外，BP提取物的DPPH自由基清除能力大约为FP的1.7 倍，进一步说明提取FP后的覆盆子残渣具有很好的抗氧化开发潜力。

图1 覆盆子不同多酚提取物DPPH自由基（A）和ABTS阳离子自由基清除能力（B）Fig. 1 DPPH radical (A) and ABTS cation radical scavenging capacity (B) of different polyphenol-rich extracts of R. chingii Hu

2.2.2 ABTS阳离子自由基清除能力分析

如表1和图1B所示，4 个提取物均具有很强的ABTS阳离子自由基清除能力，其变化趋势总体与其DPPH自由基清除能力（图1A）相似。ESP提取物具有最高的ABTS阳离子自由基清除能力，其IC值为23.90 μg/mL，优于阳性对照品槲皮素的ABTS阳离子自由基清除能力（IC＝28.66 μg/mL）。BP与FP的ABTS阳离子自由基清除能力相差不大（＞0.05），而WSP清除ABTS阳离子自由基的能力相对较低，其IC值为72.10 μg/mL。相关性分析结果显示，可水解单宁和总酚含量与ABTS阳离子自由基清除能力极显著相关，相关系数分别为0.950和0.915，而总黄酮含量与ABTS阳离子自由基清除能力无相关性（相关系数为0.344），说明可水解单宁和酚酸为覆盆子多酚中的主要抗氧化活性成分。目前已从覆盆子中分离鉴定出个25 个单宁和23 个酚酸类化合物。

2.3 覆盆子多酚提取物的体外抗糖尿病活性分析

2.3.1-葡萄糖苷酶的抑制活性分析

-葡萄糖苷酶的活性被抑制时，能有效缓解碳水化合物的水解，降低人肠道对葡萄糖的吸收，从而降低餐后和空腹血糖水平，对于治疗和预防II型糖尿病具有重要意义。如表1和图2A所示，所有提取物均具有很强的-葡萄糖苷酶活性抑制能力，IC值均低于25.0 μg/mL，远低于阳性对照品阿卡波糖的813.33 μg/mL，说明覆盆子多酚提取物具有很好的降血糖应用潜力。ESP具有最强的-葡萄糖苷酶活性抑制能力（IC1.65 μg/mL），约为阿卡波糖的493 倍，FP提取物次之，WSP的抑制能力最弱。相关性分析表明，-葡萄糖苷酶活性抑制能力与提取物样品中总酚与可水解单宁含量极显著相关，相关系数分别为0.926和0.892，而与黄酮含量的相关性仅为0.172，说明酚酸和单宁是覆盆子提取物抑制-葡萄糖苷酶活性的主要贡献者。Chen Yue等研究也表明，覆盆子多酚提取物能有效抑制-葡萄糖苷酶和-淀粉酶活性，鞣花单宁为其主要活性成分。

图2 覆盆子不同多酚提取物的α-葡萄糖苷酶活性抑制（A）和抗糖基化能力（B）Fig. 2 α-Glucosidase inhibitory (A) and antiglycation (B)capacity of different polyphenol-rich extracts of R. chingii Hu

2.3.2 抗糖基化活性分析

抑制蛋白糖基化和AGEs的积累被认为是延缓衰老和缓解糖尿病并发症的潜在有效方法之一。如图2B所示，BP具有最高的AGEs形成抑制活性，当样品质量浓度为95 μg/mL时，其抑制率高达64.94%，远高于ESP提取物（AGEs形成抑制率32.61%），并且是WSP和FP的4.5 倍和3.8 倍，表明覆盆子BP具有较好的抗糖基化潜力。

2.4 覆盆子多酚提取物化学组成分析

由于覆盆子ESP提取物中具有最高的总酚和可水解单宁含量，以及最强的抗氧化能力和-葡萄糖苷酶活性抑制能力，因此，采用UPLC-QTOF-MS/MS技术对其主要化学组成进行定性分析。覆盆子BP提取物的总离子流图如图3所示。根据化合物的保留时间、母离子、分子式、二级质谱碎片等信息，结合参考数据库和相关文献，对主要化学成分进行初步鉴定。如表2所示，共鉴定出31 个化合物，包括11 个单宁类化合物、6 个黄酮类化合物、5 个脂肪酸类化合物、3 个酚酸类化合物、3 个萜类化合物和3 个其他类型化合物。

图3 覆盆子ESP提取物总离子流图Fig. 3 Total ion current chromatogram of ESP-rich extract from R. chingii Hu

2.4.1 覆盆子多酚提取物的黄酮类化合物

峰15的母离子为449.109 7[M-H]，特征苷元离子287.055 8由母离子丢失一分子六碳糖（-162 Da），碎片离子269.046 2和259.061 5由苷元离子分别丢失一分子的HO和CO所产生，因此鉴定为二氢山柰酚-己糖苷。峰19和20的母离子均为593.151 9[M-H]，相同的MS/MS产物离子285.04[M-308-H]和284.03[M-308-2H]表明其苷元均为山柰酚，由母离子丢失鼠李糖己糖苷部分所产生，通过文献查阅确定峰19和20为山柰酚-3--鼠李糖己糖苷，其中山柰酚-3--芸香糖苷已被Li Kuangyu等从覆盆子中鉴定。相似地，化合物11（[M-H]，289.072 1，CHO）鉴定为(表)儿茶素。化合物21（[M-H]，447.094 1，CHO）和24（[M-H]，593.131 5，CHO）分别被鉴定为山柰酚-3--己糖苷和银锻苷，化合物银锻苷已被Li Kuangyu等从覆盆子中鉴定。

2.4.2 盆子多酚提取物的单宁类化合物

可水解单宁是覆盆子中已知的主要单宁类化合物，在负离子模式下，通常具有以下特征丢失片段：葡萄糖基（162 Da）、葡萄糖醛酸基（176 Da）、五碳糖基（132 Da）、没食子酰基（152 Da）、没食子酸（170 Da）、六羟基联苯二甲酰基（HHDP）或鞣花酸（302 Da）和没食子酸酰基-葡萄糖（332 Da）。总共从ESP提取物中鉴定出11 个可水解单宁类化合物，包括1 个鞣花酸（峰18）、4 个鞣花酸衍生物（峰7、14、16、17）、5 个鞣花单宁（峰2、5、8、9、10）和1 个没食子单宁（峰13）。

峰2的母离子为481.063 9[M-H]，特征碎片离子300.999 1表明结构中存在HHDP部分结构，由母离子丢失一分子葡萄糖（-180 Da）所产生，因此鉴定为HHDP-葡萄糖。峰5和8具有相同的母离子783.07[M-H]和MS/MS产物离子301.00[HHDP-H]、275.01[HHDPHO-H]，由母离子依次丢失HHDP和葡萄糖部分所产生，根据化合物保留时间差，分别鉴定为木麻黄素和赤芍素。峰9和峰10的特征碎片离子463.066 9[M-170-H]和300.999 6[HHDP-H]表明化合物中存在没食子酸和HHDP结构，因此鉴定为没食子酰-HHDP-葡萄糖，同理，化合物13鉴定为没食子酰-HHDP-己糖苷。通过与文献对比化合物的母离子和MS/MS裂解方式，化合物18（301.000 1，CHO）鉴定为鞣花酸，化合物16和17分别鉴定为鞣花酸-戊糖苷，碎片离子301.00由母离子丢失一分子戊糖基所产生（-132 Da），根据表留时间差异，化合物7和14分别被鉴定为血脂酸双内酯和戊酸双内酯，MS/MS离子由母离子依次丢失羧基（-CO）和羟基（-HO）部分所产生，300.999 1对应鞣花酸部分。

2.4.3 覆盆子多酚提取物的脂肪酸类化合物

总共从ESP提取物中鉴定出了5 个脂肪酸类化合物，峰32被鉴定为9,12,13-三羟基十八烯酸，碎片离子293.213 2由母离子丢失两分子水产生，表明化合物中存在两个羟基，离子229.145 1和211.144 6由C～C键断裂和产物离子脱水作用所产生，碎片离子171.103由C～C键断裂所产生。峰36的母离子为311.224 4（[MH]，CHO），碎片离子275.205 2[M-2HO-H]由母离子丢失2 分子水产生，离子223.172 5（CHO）和201.115 0（CHO）分别由C～C和C～C键断裂所产生，离子183.103 7（CHO）由201.115 0脱水所产生，表明所有氧原子在C～C之间，因此鉴定为9,10-二羟基十八烷-12,15-二烯酸。同理，峰33鉴定为二羟基紫杉酸，峰39（277.218 3，CHO）和40（279.234 0，CHO）分别被鉴定为亚麻酸和亚油酸，这两种化合物已在覆盆子果实中鉴定。

2.4.4 覆盆子多酚提取物的其他类型化合物

通过分析化合物的一级和二级裂解规律，并与文献报道和覆盆子中已知化合物的数据进行比对，从覆盆子ESP提取物中鉴定出了3 个酚酸：没食子酸（峰4）、短叶苏木酚酸（峰12）和肉桂酸（峰23）；3 个萜类化合物：2,19,24-三羟基乌苏-12-烯-3-氧-28-酸（峰35）、蔷薇酸A（峰37）和蔷薇酸B（峰38）；2 个有机酸：柠檬酸（峰1）、黄尿酸（峰6），以及1 个核苷类化合物：鸟嘌呤核苷（峰3）。18、28、44、46 Da的质量损失分别对应着母离子羟基、醛基、羧基的断裂。没食子酸、短叶苏木酚酸、柠檬酸和3 个萜类化合物均已在覆盆子中鉴定。峰22的母离子为723.504 2[M-H]，只有一个/为677.500 4[M-HCO-H]的碎片离子，无法鉴定化合物的初步结构。峰25～31存在相似的碎片离子615.34、483.30和161.04，以及相同的裂解规律，说明为同类型化合物；连续的46、162 Da或132 Da的丢失，表明分子结构中存在羧基/酯键和六碳糖结构，但不能确定碎片离子321.24的结构，后续需要通过核磁技术才能确定其结构。

表2 覆盆子ESP提取物中主要化学成分鉴定质谱信息Table 2 Mass spectral identification of the major chemical constituents in the ESP-rich extract of R. chingii Hu

续表2

3 结 论

研究了覆盆子WSP、FP、ESP和BP提取物中总酚、总黄酮和可水解单宁的含量，并通过自由基清除能力、酶抑制活性和抗糖基化能力评价其抗氧化和抗糖尿病活性。结果发现，所有提取物中，ESP提取物的总酚（414.95 μg/mg）和可水解单宁含量（182.47 μg/mg）最高，其次为FP提取物；BP提取物的总黄酮含量最高，达177.48 μg/mg，约为含量第二的ESP提取物的1.8 倍。不同提取物的抗氧化、-葡萄糖苷酶活性抑制和抗糖基化能力呈不同的变化趋势，但ESP提取物具有最高的抗氧化和-葡萄糖苷酶抑制能力，且清除ABTS阳离子自由基和抑制-葡萄糖苷酶的能力均优于对应的阳性对照品槲皮素和阿卡波糖；BP提取物具有最强的抗糖基化能力，抑制率达64.94%；WSP提取物的活性最弱。共从ESP提取物中初步鉴定出31 个化合物，包括11 个单宁类化合物、6 个黄酮类化合物、5 个脂肪酸类化合物、3 个酚酸类化合物、3 个萜类化合物和3 个其他类型化合物，单宁和黄酮类化合物为其主要活性成分。因此，覆盆子ESP和BP具有良好的抗氧化和抗糖尿病潜力，提取多糖和FP后的覆盆子残渣具有很好的进一步高值化利用的价值。