SYNM、ALDH1、Galectin–3 在大肠癌中的表达及相关性研究

郑炜智 刘炳辉 盛玲玲 游淑清 潘冰

1.台州市第一人民医院病理科，浙江台州 318020；2.台州市第一人民医院检验科，浙江台州 318020

大肠癌是临床中最常见的恶性肿瘤之一，近年来研究数据显示，我国大肠癌患者人数逐年增加，并且患者越来越年轻化。大肠癌患者手术切除肿瘤后，有40%的患者因为病情恶化、复发导致死亡。因此，对大肠癌做到早期诊断、治疗，患者预后评估、提高生存率已经逐渐成为临床研究的重中之重。联丝蛋白（synemin，SYNM）属于一种中间丝蛋白质，其具有较长的C 末端结构域，可与纽蛋白、α–肌动蛋白等相关蛋白结合，在细胞运动中发挥黏附、收缩功能，参与细胞转移、黏附过程。乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase，ALDH）蛋白主要在细胞质、细胞核、线粒体中大量存在，参与细胞增生、分化等多种生物学过程，ALDH1 是ALDH 家族中的主要组成部分，其表达水平异常，参与多种肿瘤发展过程。β–半乳糖苷结合蛋白属于一种凝集素家族，半乳糖凝集素–3（Galectin–3）是其重要成员，主要在免疫细胞、上皮细胞中表达，在细胞增生、凋亡、分化中均有作用。本研究探讨SYNM、ALDH1、Galectin–3 在大肠癌中的表达及与病理特征的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年8 月至2019 年8 月在台州市第一人民医院病理科保存的大肠癌组织标本74 例，设为大肠癌组，其中男42 例，女32 例；年龄30～78 岁，平均（51.30±20.10）岁；患病部位：直肠39 例，结肠35 例；分化程度：高分化13 例，中分化41 例，低分化20 例；TNM 分期：Ⅰ期12 例，Ⅱ期14 例，Ⅲ期21 例，Ⅳ期27 例；浸润深度：未超过肌层40例，超过肌层或浆膜层34 例；淋巴结转移：有转移49 例，无转移25 例。另选取同期在台州市第一人民医院病理科保存的正常大肠黏膜（距离癌组织>5.0cm）74 例设为对照组。本研究经台州市第一人民医院伦理委员会批准（伦理审批号：2020– KY022–02）。患者及其家属均知情并签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：74 例大肠癌患者均符合大肠癌的相关诊断标准，并且经过病理学确诊。排除标准：①并发其他恶性肿瘤患者；②进行放疗、化疗患者；③精神、意识障碍患者；④心、肺等重要器官损伤患者；⑤合并免疫系统疾病患者；⑥合并感染疾病患者。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化染色 将两组组织标本制成4μm 厚度切片，60℃烘烤50min，进行二甲苯脱蜡处理，使用递减梯度乙醇脱二甲苯；在3%过氧化氢中孵育10min，将组织中内源性过氧化物酶活性清除干净，之后采用蒸馏水清洗干净，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）浸润5min，在微波炉中将0.01mol/L 的枸橼酸钠缓冲液加热至沸腾后将两组组织切片置入其中，给予抗原修复15min，室温静置4min，再次采用PBS 溶液连续冲洗3 次，每次5min，滴加50μl 的一抗（SYNM、ALDH1、Galectin–31∶80工作液），4℃过夜保存。之后采用PBS 溶液冲洗3次，每次5min；滴加二抗（羊抗鼠或羊抗兔IgG 聚合物），温室孵育10min；PBS 溶液再次冲洗，通过DAB 显色5min，采用蒸馏水冲洗干净。最后使用苏木精给予复染，封片进行显微镜下观察。

1.3.2 阳性结果判定 免疫组织化学半定量积分法给予SYNM、ALDH1、Galectin–3 阳性结果判定，阳性细胞是指染色为棕黄色、棕色颗粒细胞。每张切片随机选取10 个视野，计数为100 个细胞，（1）评分标准：0 分表示阳性细胞<5%，1 分表示阳性细胞6%～25%，2 分表示阳性细胞26%～50%，3 分表示阳性细胞51%～75%，4 分表示阳性细胞>75%。（2）阳性强度评估标准：0 分表示细胞无染色，1 分表示细胞呈浅黄色，2 分表示细胞为黄色，3 分表示细胞为棕褐色。最终阳性结果评估是（1）+（2）结果：0分为（–），1～2 分为（+），3～4 分为（++），5～6分为（+++）；（–）为阴性，（+）表示弱阳性，（++）表示中等阳性，（+++）表示强阳性。阴性、弱阳性视为阴性，中等阳性、强阳性视为阳性。SYNM、ALDH1、Galectin–3 染色结果均由2 名以上经验丰富的病理科医师采用双盲法进行评估完成。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件对数据进行处理分析。计数资料以例（百分比）[（%）]表示，组间比较采用χ检验。患者术后总体生存分析采用Kaplan–Meier 法完成。<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者SYNM、ALDH1、Galectin–3 阳性表达情况比较

与对照组比较，大肠癌组SYNM 阳性表达下降，ALDH1、Galectin–3 阳性表达升高，差异均有统计学意义（<0.05），见表1、图1。

图1 SYNM、ALDH1、Galectin-3 在两组组织中的表达（IHC）

表1 两组患者SYNM、ALDH1、Galectin-3 阳性表达情况比较[n（%）]

2.2 不同因素患者SYNM、ALDH1、Galectin-3 的阳性表达情况比较

男性、女性患者，≤60 岁、>60 岁患者，浸润深度未超过肌层、超过肌层或浆膜层患者SYNM、ALDH1、Galectin–3 阳性表达比较，差异均无统计学意义（>0.05）。与无淋巴结转移患者相比，有淋巴结转移患者 SYNM 阳性表达较低，ALDH1、Galectin–3 阳性表达较高，差异均有统计学意义（<0.05）。与肿瘤最大径<2.0cm 患者相比，2.0～5.0cm、>5.0cm 患者ALDH1、Galectin–3 阳性表达较高，差异均有统计学意义（<0.05）。直肠、结肠患病部位患者SYNM、ALDH1、Galectin–3 阳性表达比较，差异均无统计学意义（>0.05）。与高分化程度患者相比，低、中分化程度患者SYNM 阳性表达较低，ALDH1、Galectin–3 阳性表达较高；且中分化程度患者ALDH1、Galectin–3 阳性表达高于低分化程度患者，差异均有统计学意义（<0.05）。TNM 分期Ⅲ、Ⅳ期患者SYNM 阳性表达低于Ⅰ、Ⅱ期患者，ALDH1、Galectin–3 阳性表达高于Ⅰ、Ⅱ期患者，差异均有统计学意义（<0.05），见表2。

表2 不同因素患者SYNM、ALDH1、Galectin-3 阳性表达情况比较[n（%）]

2.3 大肠癌患者生存率比较

通过手机、微信、QQ 等形式对患者进行随访，随访至2020 年8 月，统计SYNM ALDH1、Galectin–3阳性、阴性患者存活状况。SYNM 阴性表达和ALDH1、Galectin–3 阳性表达患者生存率分别低于SYNM 阳性表达和ALDH1、Galectin–3 阴性表达患者，差异均有统计学意义（<0.05），见图2。

图2 大肠癌患者Kaplan-Meier 生存曲线

3 讨论

目前临床中对大肠癌主要采用手术治疗，以全身、局部放疗、化疗为辅，但大多数患者手术后仍然容易复发，引起肝转移。也有研究认为，对大肠癌患者做到早发现、早诊断、早治疗，是提高大肠癌患者术后存活率的关键，分析大肠癌相关蛋白、基因表达，有利于对疾病机制研究，为患者的综合治疗提供理论依据。大肠癌发病过程需要多种基因参与，多种步骤相互协同，属于一种渐进性过程。

SYNM 属于一种Ⅳ型中间丝蛋白，在哺乳动物心、骨骼肌中广泛存在，并且在一些神经胶质细胞中也有表达。因自身结构的特殊性，不能自我聚合产生细丝，通过与结蛋白、Ⅲ型波形蛋白结合，发挥共聚作用，通过与LIM 域蛋白相互影响，对细胞黏附运动有明显的调节作用。本研究结果显示，在大肠癌患者中SYNM 阳性表达较低，孙伯尧等研究通过二维色谱-质谱联用及免疫印迹技术也发现，SYNM 在大肠癌患者组织中表达下降。本研究中，SYNM 阳性表达的高低受大肠癌患者肿瘤最大径、分化程度、TNM 分期的影响，提示SYNM 表达与大肠癌患者病理特征有关。Deville等研究认为，SYNM 表达异常会引起宫颈癌转移。在本研究中，SYNM 阳性表达高低与大肠癌患者有无淋巴结转移有关。

ALDH1 属于一种肿瘤干细胞标志物，在乳腺癌、肝癌、肺癌等多种癌症组织中均有表达，并且对其浸润、转移具有一定的促进作用。有研究显示，ALDH1 表达水平的高低与口腔鳞癌患者预后以及治疗耐受状况有关，当患者放弃放疗后，ALDH1 表达下降，说明ALDH1 在肿瘤发展中有明显的参与作用。本研究中，大肠癌患者ALDH1 阳性表达较高，提示ALDH1 可能参与大肠癌患者病情发展以及大肠癌转移、浸润过程。田静等的研究也证实这一观点。

Galectin–3 是一种基质金属蛋白酶2 的底物，参与肿瘤转移、浸润过程，Galectin–3 具有糖亲和性的特点，能抑制细胞凋亡。Matsuda等研究指出，Galectin–3 表达升高会增加内皮细胞的亲和性，增强癌细胞与内皮细胞的黏附，参与肿瘤转移、侵袭过程。导致大肠癌患者病死率较高的原因是癌细胞的不断转移和浸润，基底膜完整性被破坏。在本研究中，ALDH1、Galectin–3 阳性表达和SYNM 阴性表达患者存活率较低，提示SYNM、ALDH1、Galectin–3 表达水平的高低与患者的预后有关。

综上所述，SYNM 在大肠癌组织中低表达，ALDH1、Galectin–3 在大肠癌组织中高表达，三者阳性表达高低与患者肿瘤直径、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移有关，三者联合检测在大肠癌患者预后中具有重要意义。但因本文所纳入样本量较少，所以其具体临床效果还需要进一步分析研究，才能更好地为临床所用。