银杏达莫注射液制备工艺优化研究

马海霞，杨广安，廖大敏，谭琪明，罗杰，2

（1.铜仁职业技术学院，贵州 铜仁 554300;2.铜仁市药膳产业工程技术研究中心，贵州 铜仁 554300）

银杏达莫注射液是临床上用于治疗心脑血管疾病的复方制剂，主要有效成分有银杏叶提取物（GBE）和双嘧达莫两种成分，其中GBE 含有较高的总黄酮醇苷、萜类内酯等有效成分[1]，且总黄酮、总萜内酯含量要符合药典要求，银杏总黄酮对心脑血管疾病有着重要的作用，可以扩张冠脉血管、脑血管，改善脑缺血，改善患者记忆及清除自由基等功能[2-3]。双嘧达莫具有抑制血小板聚集功效，高浓度（50 μg·mL-1）还可抑制血小板释放。银杏达莫临床上用于抗血小板聚集、预防和治疗动脉硬化及高血压引起的冠状动脉供血不足、心绞痛、心肌梗塞，如脑缺血，脑供血不足，脑部栓塞，脑梗，冠心病等疾病，是心脑血管及外周循环障碍的有效治疗药之一[4]。且随着银杏达莫注射液临床应用越来越广泛，数据表明其不良反应较多，尤其是中老年人群比例较高[5-7]。

注射剂是指药物制成的供注入体内的无菌溶液(包括乳浊液和混悬液)以及供临用前配成溶液或混悬液的无菌粉末或浓溶液。注射剂是注射使用，要求相对严格，但注射剂研制过程和生产过程相对比较复杂，安全性及患者机体适应性差，成本较高。目前银杏达莫相关制剂如银杏达莫冻干粉针剂、分散片、注射液等制备工艺研究较少，尤其是注射用的银杏达莫制备工艺更是相对较少，银杏达莫注射液生产厂家不同，则生产工艺并不完全相同[8-10]。本实验中，对注射液溶媒、助溶剂、抗氧化剂、活性炭吸附作用、注射液pH 值选择等进行了工艺优化研究，处方筛选以安全合理、质量稳定可控为原则，为大生产提供可靠理论依据。

1 实验仪器与材料

1.1 实验仪器

岛津高效液相色谱仪（LC-20AT 二元泵、手动进样器、SPD-M20A- 二极管阵列检测器、CTO-10AS-柱温箱、LC solution-工作站，日本岛津公司）；InertsilRODS-3 C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）色谱柱；电子天平（AL204-IC，上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；超声仪（SG1200HE，上海冠特超声仪器有限公司）；旋转蒸发仪（IKAR RV 05 basic）；水浴锅（IKAR HB 05.06 cn）；SZ-93 自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）；pH 计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；澄明度检测仪（天津博宇伟业科技有限公司）；紫外分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司）；一次性针头滤器（0.45 µm）；一次性使用无菌注射器等。

1.2 原料与试剂

色谱纯乙腈（TEDIA company）；分析纯丙二醇、吐温-80、无水乙醇（成都金山化学试剂有限公司）；分析纯硫酸、盐酸、磷酸二氢钠、磷酸、活性炭（天津市富宇精细化工有限公司）；双蒸水（自制）；枸橼酸、焦亚硫酸钠、抗坏血酸（分析纯，成都金山化学试剂有限公司）；银杏叶提取物（水溶性银杏叶提取物由贵州省生化工程中心提供、普通银杏叶提取物为市售）；双嘧达莫（中国药品生物制品检定研究所）；其他试剂均为分析纯。

2 原料药银杏叶提取物的筛选

2.1 原料药

水溶性银杏叶提取物、普通银杏叶提取物。

2.2 筛选结果

称定水溶性银杏叶提取物与普通银杏叶提取物各1.0 g 放到试管中，加10 mL 注射用水，充分振摇均匀，高压灭菌，温度121 ℃，30 min，对比，观察灭菌前后制备的银杏达莫注射液是否澄清，其结果记录如表1。

表1 灭菌前后溶液澄清度观察

结果表明：水溶性银杏叶提取物灭菌前后，溶液均澄清，无混浊；普通银杏叶提取物，灭菌前后均表现不同程度的混浊，除此之外，水溶性银杏叶提取物具有低银杏酸、低残渣，且蛋白质及鞣质去除均符合针剂要求，因此本实验研究选择水溶性银杏叶提取物为原料[11]。

3 处方工艺

本实验中，经多次小试试验试制，优化为以下处方（见表2）：

表2 银杏达莫注射液制备处方优化结果

选择水溶性银杏叶提取物为原料；注射用水为溶媒；1,2-丙二醇为助溶剂；焦亚硫酸钠为抗氧化剂；稀氢氧化钠/盐酸溶液调节溶液pH 值；活性炭吸附热原，脱色助滤。

3.1 注射液溶媒的选择

本实验，对注射用水、5%、10%葡萄糖溶液、0.9%氯化钠溶液为注射液溶媒进行筛选。通过对比注射液外观、pH 值、吸光度A 值等确定最佳溶媒。吸光度测定：以含5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液做空白，于200～400 nm扫描，结果表明银杏达莫注射液在波长为243 nm处有最大吸收，故选择243 nm 为测定波长。于0、1、2、3、4、5 h 时分别对各供试品测定A 值，测3次取平均值，以0 h 各供试品溶液在243 nm 处的吸光度为100%，计算银杏达莫注射液在1、2、3、4、5 h 时的相对吸光度。注射液的外观均为棕黄色、其pH 值及吸光度等变化情况记录如表3。

表3 不同溶媒的相对吸光度随时间变化情况

表4 不同溶媒的pH 值随时间变化情况

由表可知银杏达莫注射液溶媒为水时，注射液pH 值、吸光度5 h 内均无明显变化，而溶媒为5%、10%葡萄糖、0.9%氯化钠溶液时，注射液pH 值、吸光度5 h 内变化较大，注射液稳定性下降。

3.2 注射液助溶剂的选择

本实验中分别考察了常用的三种助溶剂：吐温-80、乙醇、丙二醇，对比银杏达莫注射液总黄酮、双嘧达莫含量、外观形状、稳定性等情况分析，结果如表5。

表5 不同助溶剂对银杏总黄酮和双嘧达莫含量影响

结果发现三者均能使银杏叶提取物在水中澄清，溶解度增加。但由于吐温-80 具有降压与轻微的溶血作用，影响注射液的临床应用；乙醇具有易挥发性特点，对肌肉、血管刺激性大，同时也影响了注射液的再溶解性，综合考虑患者安全性及顺应性[12]，故选择1,2-丙二醇为助溶剂。

3.3 注射液抗氧化剂的优化

查阅文献，筛选亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸三种抗氧化剂。对比发现，注射液灭菌前后，结果如表6。

表6 不同抗氧化剂灭菌前后含量影响

结果表明三种抗氧化剂对注射液棕黄色澄清液体的物理外观无影响，其中焦亚硫酸钠对有效成分双嘧达莫、黄酮和内酯含量变化影响不大，并且注射液稳定性好，故选择焦亚硫酸钠作为注射液的抗氧化剂。

3.4 活性炭吸附试验

生产过程中须采取有效措施，避免热原对注射液的影响，保证产品质量及用药安全。活性炭有吸附热原和有色物质的作用，加入适量活性炭可以脱色助滤、提高产品澄明度，在制药企业中被广泛采用。

3.5 注射液pH 值的研究

按照上述优化处方工艺配制银杏达莫注射液，用稀NaOH/HCl 调节pH 值分别为4.0、4.2、4.3、4.5、5.0、5.5，灭菌（121 ℃、30 min），考察灭菌前后总黄酮、双嘧达莫含量、外观性状的影响，结果如表7。

表7 不同pH 值（4.0～5.5）对制剂影响

由表可知：该制剂在偏酸环境下较稳定，pH 值在5.5 时溶液中有沉淀产生，溶液变浑浊。pH 值为4.2～4.3 时，注射液澄明度良好，同时对总黄酮、双嘧达莫含量影响最小。因此，确定最佳pH 值在

4.2～4 .3。

3.6 优化制备工艺

称定水溶性银杏叶提取物（相当于银杏总黄酮1.0 g），加400 mL 丙二醇加热溶解得银杏叶提取物溶液；另称定双嘧达莫0.4 g，加枸橼酸2.0 g 与适量注射用水加热溶解后，缓慢加入上述银杏叶提取物溶液，搅拌均匀，加入1.0 g 焦亚硫酸钠，搅拌溶解，加入注射用水至足量，稀NaOH/HCl 溶液调溶液pH 值至4.21，加入0.1 g 活性炭粉末，于70 ℃水浴搅拌20 min，过滤脱炭，121 ℃，灭菌30 min，取出，放冷，加入安瓿瓶中，安瓿瓶密封好，121 ℃，灭菌30 min，即得。

4 小结与讨论

1）相对普通银杏叶提取物，水溶性银杏叶提取物水溶性更佳，且经过降鞣质工艺处理的，鞣质杂质更低。水溶性银杏叶提取物总黄酮和萜内酯含量均符合药典要求，尤其是总黄酮含量明显高于普通市售银杏叶提取物[13]。

2）银杏叶提取物易溶于水，但在酸性条件下溶解性差；双嘧达莫难溶于水，易溶于稀酸，但pH值太低，银杏叶提取物易析出。经查文献及多次试验发现，通过加入少量枸橼酸调节pH 值控制在4.0～5.0 内，使两药溶解，且此范围内注射液稳定性良好。

3）多次小试试验发现银杏达莫注射液与5%、10%的葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液配伍后，放置时间超过3 h，配伍液的性状、pH 值、不溶性微粒及吸光度等变化较大，溶液稳定性下降，因此银杏达莫注射液与以上溶液配伍后，需在3 h内使用。

4）吐温-80 为助溶剂，但因其具有降压与轻微的溶血作用，在本实验中应慎用。乙醇易挥发，且对血管具有刺激性。因此该优化处方中选择丙二醇为助溶剂。此外枸橼酸用于调节酸性环境，焦亚硫酸钠作为抗氧化剂，稀氢氧化钠/盐酸溶液调节pH 值。