小而密低密度脂蛋白、Mac-2结合蛋白在急性缺血性脑卒中中的变化及作用研究
2022-09-29李兴韩鹏飞杨挲挲赵乐查江杰李梦真鞠传余
李兴 韩鹏飞 杨挲挲 赵乐 查江杰 李梦真 鞠传余
急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)是发病率及致残率较高的常见脑血管疾病,早期诊断及准确评估病情有助于缩短溶栓时间窗,对AIS 患者提高生存率及康复质量有重要的临床意义[1]。颈动脉粥样硬化性狭窄可以预测AIS 的发生[2],近年来发现小而密低密度脂蛋白(Small dense low-density lipoprotein,sdLDL)是颈动脉内中膜厚度(Carotid intima-media thickness,CIMT)及不稳定斑块的独立危险因素[3,4],Mac-2 结合蛋白(Mac-2 binding protein,M2BP)作为炎性蛋白,通过参与单核-巨噬细胞活化参与动脉粥样硬化过程[5]。虽然动脉粥样硬化作为AIS 的病理基础,sdLDL 与M2BP 参与动脉粥样硬化,但目前临床上sdLDL、M2BP 与AIS 的关系研究较少,尚未确定M2BP 与sdLDL 表达的相关性。本研究通过分析AIS 患者血清sdLDL、M2BP 水平变化及作用,旨在为临床早期诊断提供数据支持。
1 材料与方法
1.1 一般资料 选取2020年9月~2021年10月于牡丹江医学院附属红旗医院(以下简称“该院”)神经内科确诊的100 例合并颈动脉粥样硬化性狭窄的AIS 患者(AIS 组),选取同期于该院体检并经颈动脉超声检查排除颈动脉斑块的100 例健康体检人员作为对照组。AIS 组中男72 例,女28 例,年龄41~70 岁,其中吸烟58 例,饮酒61 例,高血压69例。对照组中男65 例,女35 例,年龄46~70 岁,其中吸烟22 例,饮酒17 例,高血压30 例。两组性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经该院伦理委员会批准,所有患者均知情同意。纳入标准:①符合《2018年中国急性缺血性脑卒中诊治指南》诊断标准,且经计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)等影像学证实;②年龄40~70 岁;③经超声检查显示有颈动脉粥样硬化性狭窄。排除标准:①伴有各种先天或后天性心血管系统疾病,如先天性心脏病、高血压性心脏病、肺源性心脏病等;②伴有严重的器质性疾病,如肝、肾功能不全;③肿瘤、免疫性疾病、近4 周发生感染性疾病;④有其他可能干扰本研究的疾病,或长期使用降血脂药物的患者。
1.2 试剂与仪器 sdLDL 试剂盒购自天津悦和康生物技术有限公司,M2BP 试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司,同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)试剂盒购自上海惠中生物科技有限公司,脂蛋白(a)[Lipoproteina,Lp(a)]、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)、载脂蛋白A1(Apolipoprotein A1,ApoA1)、载脂蛋白B(Apolipoprotein B,ApoB)试剂盒购自广州科方生物技术股份有限公司。NanoQuant型酶标仪和hydroflex 型洗板机产自澳大利亚帝肯公司,全自动生化分析仪AU5800 产自美国贝克曼公司。
1.3 方法
1.3.1 指标检测 AIS 组于治疗前、对照组于体检当日,采集3~5ml 静脉血于分离胶管内,静置15min后以3 000r/min 离心10min,弃去乳糜及溶血样本,分离血清,于-80℃冰箱保存备用,检测当日于室温下自行解冻,待其恢复至室温条件进行检测。用全自动生化分析仪检测Lp(a)、TC、TG、HDL、ApoA1、LDL、ApoB、FFA、Hcy、sdLDL,酶联免疫吸附法检测M2BP。所有检验项目均严格按照试剂盒说明书操作方法进行,并采用同一批号的试剂在室内质控在控的条件下同时检测,排除非特异性干扰因素,以保证检测结果的稳定性和可比性。
1.3.2 颈动脉狭窄与脑卒中分级 根据2003年美国放射年会超声会议公布的标准,将AIS 组按颈动脉内径缩小程度分组:轻度组(0~49%)、中度组(50%~69%)、重度组(70%~100%)。脑卒中严重程度按照NIHSS 评分分组:轻度组(0~5 分)、中度组(6~13 分)、重度组(14~42 分)。
1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0 软件进行统计分析,采用GraphPad Prism 8 软件绘图,计量资料使用均数±标准差(±s)表示,两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用单因素方差分析;计数资料用率表示,两组比较采用χ2检验,Pearson 相关性分析用于评估两参数之间的相关性,Logistic 二元回归分析用于分析AIS 的危险因素,ROC 曲线用于评价各指标诊断效能,P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组一般资料比较 AIS 组与对照组在性别、年龄方面差异无统计学意义(P>0.05),在吸烟、饮酒、高血压等方面差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 两组人群一般资料比较[n(%)]
2.2 两组各指标比较 AIS 组血清Lp(a)、TC、TG、Hcy、sdLDL、M2BP 及sdLDL/LDL 水平均高于对照组,AIS 组血清HDL、ApoA1 水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2 两组人群各指标比较(±s)
表2 两组人群各指标比较(±s)
指标 AIS组(n=100)对照组(n=100) t P Lp(a)(mg/L) 216.73±17.01 190.95±13.24 11.963 0.000 TC(mmol/L) 4.93±0.33 4.61±0.26 7.473 0.000 TG(mmol/L) 1.97±0.14 1.82±0.13 8.395 0.000 HDL(mmol/L) 1.10±0.05 1.19±0.07 -10.870 0.000 ApoA1(g/L) 1.06±0.07 1.19±0.07 -13.167 0.000 LDL(mmol/L) 2.65±0.18 2.63±0.19 0.876 0.382 ApoB(g/L) 0.87±0.11 0.87±0.09 0.121 0.904 FFA(mmol/L) 1.54±0.17 1.57±0.14 -1.344 0.181 Hcy(μmol/L) 17.00±2.09 14.38±1.64 9.885 0.000 sdLDL(mmol/L) 0.66±0.07 0.57±0.07 8.915 0.000 M2BP(ng/ml) 10.74±1.38 8.89±0.87 11.327 0.000 sdLDL/LDL 0.25±0.03 0.22±0.03 7.850 0.000
2.3 颈动脉狭窄轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP比较 将临床常用的脂质项目Hcy 作为内参,比较颈动脉狭窄轻、中、重度组血清Hcy、sdLDL、M2BP水平,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。
表3 颈动脉狭窄轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较(±s)
表3 颈动脉狭窄轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较(±s)
注:与轻度组比较,①P<0.05;与中度组比较,②P<0.05
组别 n Hcy(μmol/L) sdLDL(mmol/L) M2BP(ng/ml)轻度组 50 15.53±1.16 0.61±0.04 9.68±0.56中度组 33 17.45±0.87① 0.68±0.03① 11.15±0.62①重度组 17 20.46±1.17①② 0.78±0.04①② 13.08±0.61①②F 137.270 132.673 224.517 P 0.000 0.000 0.000
2.4 脑卒中轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较 脑卒中轻度组、中度组、重度组间血清Hcy、sd-LDL、M2BP 水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。
表4 脑卒中轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较(±s)
表4 脑卒中轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较(±s)
注:与轻度组比较,①P<0.05;与中度组比较,②P<0.05
组别 n Hcy(μmol/L) sdLDL(mmol/L) M2BP(ng/ml)轻度组 58 15.67±1.14 0.62±0.04 9.84±0.66中度组 27 17.94±0.89① 0.70±0.05① 11.33±0.72①重度组 15 20.47±1.44①② 0.77±0.05①② 13.18±0.57①②F 120.391 71.789 166.063 P 0.000 0.000 0.000
2.5 相关性分析 Pearson 相关性分析结果显示,M2BP与Hcy、sdLDL、NIHSS 评分均呈正相关(r=0.898、0.864和0.824,P<0.05),sdLDL 与Hcy、M2BP、NIHSS 评分均呈正相关(r=0.820、0.864 和0.800,P<0.05)。
2.6 AIS 危险因素分析
2.6.1 Logistic 二元回归单因素分析 Logistic 二元回归单因素分析结果显示:吸烟、饮酒、高血压、Lp(a)、TC、TG、Hcy、sdLDL、M2BP、sdLDL/LDL 是AIS 发生的危险因素(P<0.05),HDL、ApoA1 是AIS 的保护因素(P<0.05)。见表5。
2.6.2 Logistic 二元回归多因素分析 Logistic 二元回归多因素分析结果显示:Lp(a)、TG、M2BP 是AIS发生的独立危险因素(P<0.05),HDL 是AIS 的独立保护因素(P<0.05)。见表6。
2.7 Hcy、sdLDL、M2BP 对AIS 的诊断效能 Hcy、sdLDL、M2BP 的AUC 分别为0.855、0.867、0.918,截断值分别为15.050μmol/L、0.595mmol/L、9.215ng/ml,灵敏度分别为84.0%、92.0%、93.0%,特异度分别为74.0%、76.0%、79.0%;联合检测Hcy、sdLDL、M2BP的AUC 为0.937(见表7、图1)。
表5 AIS 危险因素的Logistic 二元回归单因素分析
表6 AIS 危险因素的Logistic 二元回归多因素分析
表7 Hcy、sdLDL、M2BP 对AIS 的诊断效能
图1 Hcy、sdLDL、M2BP 对AIS 诊断的ROC 曲线
3 讨论
根据《中国心血管健康与疾病报告2020》[6]显示,AIS 患者出院人数、次数的年均增速居中国心血管病前三位,随着中国人口老龄化的进展,AIS 的发病率逐年上升。《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[7]指出,对于AIS 患者发病6h 内进行静脉溶栓、超过6h 进行血管内取栓仍是疗效更好的治疗手段。有研究显示[8],溶栓时间窗在3h 及以上是AIS 静脉溶栓患者发生早期神经功能恶化的独立危险因素,因此及时在溶栓窗内治疗是减少患者出现不良结局的关键因素,寻找能够用于AIS 早期快速诊断的生物标志物成为国内外学者的研究热点。
sdLDL 具有颗粒小、易被氧化修饰、半衰期长、易粘附等特点[9],对于脑血管疾病,sdLDL 较LDL体现出更好的预测价值[10],sdLDL 与AIS 的发生及病情程度有一定的关系。本研究发现,AIS 组血清sdLDL 水平、sdLDL/LDL 显著高于对照组(P<0.05),sdLDL 在作为AIS 生物标志物方面表现出更高的潜能,与有关研究[11]相符,但本研究中sdLDL、sdLDL/LDL 并不是AIS 的独立危险因素(P>0.05),与此前研究结果不符[12],可能与样本量过少及纳入的影响因素过多有关。此外,sdLDL 可通过提示CIMT[13]来反映颈动脉狭窄程度,本研究结果显示,颈动脉狭窄程度越高、脑卒中程度越严重,血清sdLDL 的含量越高(P<0.05),且sdLDL 与Hcy、NIHSS 评分呈正相关,表明sdLDL 在一定程度上可以反映AIS患者颈动脉狭窄程度。颈动脉粥样硬化性狭窄是导致AIS 常见危险因素之一[2],由于AIS 复发率较高,sdLDL 是否可以通过提示颈动脉狭窄来提示AIS 复发的风险,还需要进一步的研究。
M2BP 又称为人可溶性半乳糖凝集素3 结合蛋白,是一种致炎性蛋白,存在于人体多种体液中,被认为是肝纤维化的生物标志物,而肝纤维化有助于识别心血管疾病高风险患者,因此M2BP 与心血管疾病间存在某种关联[14,15]。根据以往研究[16]报道,M2BP 与颈动脉斑块易损性相关,在脑卒中或短暂性脑缺血患者外周血中高表达。本研究发现,AIS 组血清M2BP 含量显著高于对照组(P<0.05),提示M2BP 与AIS 发生有关。Logistic 二元回归分析显示,M2BP 是AIS 的独立危险因素(OR=7.039,P<0.05),表明高水平的M2BP 可以预测AIS 的发生。近年来发现M2BP 与冠状动脉管腔狭窄有关,M2BP 可以提示术后患者易发生血管管腔狭窄[17]。本研究结果显示,随着颈动脉狭窄程度升高、脑卒中病情程度加重,血清M2BP 的含量越高(P<0.05),同时血清M2BP 含量与NIHSS 评分呈正相关,表明M2BP 一定程度上可以反映颈动脉狭窄程度及AIS病情程度。
M2BP 除参与炎症反应外,还可能影响脂质代谢。有研究发现,M2BP 与HDL 呈负相关,与LDL 呈正相关,可能与γ 干扰素刺激有关[18,19]。但是M2BP与sdLDL、Hcy 的表达相关性尚未明确。本研究发现,M2BP 与Hcy、sdLDL 均呈正相关,提示M2BP 可能通过影响脂质代谢参与AIS 发生,但具体机制还需进一步研究。由于检测方法的差异,目前临床上sdLDL、M2BP 仍缺乏合适的参考区间[20]。基于临床常用的AIS 脂质生物标记物Hcy[21],本研究结果显示,sdLDL、M2BP 对AIS 的诊断效能优于Hcy,相比于单一指标,三项指标联合检测能够提高对AIS 的诊断效能,sdLDL>0.595mmol/L、M2BP>9.215ng/ml 可能预测AIS 的发生。
综上所述,sdLDL、M2BP 与AIS 发生有关,且与颈动脉狭窄程度及脑卒中严重程度有关,对于诊断AIS 较Hcy 有更高的诊断效能。检测AIS 患者血清中sdLDL、M2BP 含量有助于判断是否发生颈动脉狭窄及脑卒中严重程度,sdLDL、M2BP 或可作为AIS 的辅助诊断指标。