荧光染色法与KOH湿片法在不同类型足癣诊断中的应用价值比较

林泳婷，罗思琦

（惠州市皮肤病医院 检验科，广东 惠州 516000）

浅部真菌病属于常见的一种疾病类型，其中足癣是较常见的类型，尤其是生活在南方湿润潮湿环境中的群体，在春季、夏季发病率较高［1］。真菌病会影响患者美观度，对肢体活动造成巨大影响，降低患者生活质量，故早期检出疾病有重要意义，且也亟需寻找一种安全便捷及准确的检查方法［2］。KOH湿片法是常用的一种真菌检查方式，其准确率十分突出，但检查操作繁琐，此外部分复杂病变也难辨别，继而容易出现假阴性与漏诊问题［3］。近年来随着医学检验技术的不断发展，荧光染色法得到越来越多的应用，对疾病早期检出有积极作用［4］。本研究探讨荧光染色法与KOH湿片法对不同类型足癣诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2020年9月至2020年12月我院收治的拟诊足癣患者158例，其中男性67例，女性91例；年龄2～84岁，平均（51.25±2.25）岁；拟诊足癣类型：水疱鳞屑型足癣86例，角化过度型足癣50例，浸渍糜烂型足癣22例。

1.2 方法设备与试剂：日本奥林巴斯生产的CX23显微镜；皮肤真菌图文报告系统、10%KOH溶液；南京汉瑞生物科技有限公司生产的真菌荧光染色液。检测方法：每例患者均取两份标本待检，一份标本使用荧光染色法，另一份使用KOH湿片法进行镜检。①取材。采用浓度75%的酒精进行消毒处理，在钝刀帮助下取鳞屑或疱疹作为观察标本。但需注意不同足癣类型的取材也不同，其中水疱鳞屑型足癣取鳞屑、疱液、疱底部；角化过度型足癣刮除表面皮屑后取皮损底部皮屑；浸渍糜烂型足癣刮除白色浸渍表皮后取皮损边缘。②检测。荧光染色法：待检标本加入1滴荧光液后静置10 s在上方覆盖玻片，应用轻微压力让标本中染色液散开，置于显微镜下进行检查。KOH湿片法：待检标本滴1滴10% KOH后盖上玻片并用镊子钳夹置于酒精灯上加热10 s，轻压玻片置于显微镜下观察。

1.3 观察指标统计荧光染色法与KOH湿片法检测不同类型足癣获得的阳性与阴性例数，统计阅片时间，统计上仅记录阳性例数阅片时间。在阳性的判定上，主要是安排两名检验人员进行阅片，若均见菌丝或菌丝、孢子即可判定为阳性；若同一份标本在检查结果上不一致，需重新检查或让第三人观察；阴性标本观察整个玻片的基本情况。

1.4 统计学方法采用SPSS 21.0统计软件处理数据。计量资料以±s表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方法对不同类型足癣阳性率比较荧光染色法对水疱鳞屑型足癣、角化过度型足癣的阳性检出率分别为91.86%（79／86）、83.33%（50／60），高于KOH湿片法的81.40%（70／86）、53.33%（32／60），差异均具有统计学意义（χ2=4.065、12.478，P=0.044、0.000）；荧光染色法对浸渍糜烂型足癣的检出阳性率为95.45%（21／22），与对照组的90.91%（20／22）比较差异无统计学意义（χ2=0.358，P=0.550）。见表1。

表1 荧光染色法、KOH湿片法检出阳性情况比较（例）

2.2阅片时间荧光染色法对水疱鳞屑型足癣、角化过度型足癣、浸渍糜烂型足癣的阅片时间明显短于KOH湿片法（P＜0.05）。见表2。

表2 两种检测方法对不同类型足癣检查的阅片时间比较（±s，s）

表2 两种检测方法对不同类型足癣检查的阅片时间比较（±s，s）

浸渍糜烂型足癣（n＝22）免疫荧光法 66.25±8.15 92.23±11.42 37.86±5.12 KOH湿片法 90.12±11.45 145.25±15.23 48.12±7.33 t检测方法 水疱鳞屑型足癣（n＝86）角化过度型足癣（n＝60）19.332 32.284 12.980 P 0.000 0.000 0.000

2.3镜检结构特征经免疫荧光法，经直接镜检下，发现菌丝与孢子可见亮绿色荧光存在，这与周边呈现淡蓝色背景的对比突出，部分见菌丝及孢子构造情况，能够区别周围角质细胞。一些真菌形态清晰，能够初步依据形态对致病菌予以提示性诊断，少量菌丝情况可区分，断裂菌丝片段分隔清晰，能够区别污染的杂质，经荧光染色观察植物纤维素被荧光标记，纤维大小及形态上不一，未见菌丝及横隔，与片段化的菌丝无明显差异。KOH湿片法的镜检可见杂乱无章背景，菌丝同杂质及气泡未见明显差异。

3 讨论

足癣属于一种真菌性感染疾病，在人群中发生率较高，常见的疾病类型主要包括以下3种：水疱鳞屑型、角化过度型、浸渍糜烂型［5］。足癣患者的症状往往比较轻微，多数以瘙痒为主，因此其重视度往往不高，经常自行随意购买药物，因而常使足癣发生变化或出现难以辨认的足癣疾病。对足癣常用的检查方式为KOH湿片法，其主要特点是操作简单、快捷等，而应用这一检查方式针对真菌未见染色强化表现，在观察上要求操作者有丰富经验，若经验不足容易出现误诊，并且经常出现假阳性或假阴性问题，为此也提倡应用更合理的检查方式［6］。荧光染色技术是借助特殊荧光染料检查，检查方式同组织的真菌细胞壁中部分物质有效区分，经荧光下的检测方式可清楚观察到真菌的形态，明显提高镜检敏感性。免疫荧光法检测根据镜下的形态学特征，也可进一步检出真菌菌种情况，对致病真菌菌种予以提示性诊断［7］。免疫荧光法操作简单，无需加热且耗时较短，结果较为直观，优势突出。

本研究结果显示，免疫荧光法对水疱鳞屑型足癣、角化过度型足癣的阳性检出率显著高于KOH湿片法，而对浸渍糜烂型足癣阳性的阳性检出率与KOH湿片法比较无明显差异。分析原因为，浸渍糜烂型足癣在其真菌生长上较为活跃，含有较多量的真菌，采取不同的方式检查均能显示，极少出现误诊问题［8］。本研究结果亦显示，荧光染色法阅片时间短于KOH湿片法。进一步对镜检下的形态特征进行分析，通过荧光进行染色，菌丝的颜色能区别周围杂质，获得准确结果。

综上所述，荧光染色法对水疱鳞屑型足癣、角化过度型足癣的阳性检出率高于KOH湿片法，且阅片时间也明显较短，值得临床推广应用。