短柄五加喂养大鼠安全性观察

魏琳琳，刘俊娓，胡 萍

甘肃省疾病预防控制中心毒理科，甘肃 兰州730000

短柄五加（Acanthopanax brachypusHarms）为五加科五加属落叶灌木［1］，始载于《神农本草经》，生长于海拔1000～2100 m 的山谷灌木丛中，在我国的分布范围极其狭窄，主要分布于西北黄土高原，是我国特有的濒危灌木［2-6］。在甘肃主要分布于庆阳、平凉、陇南、天水、临夏、甘南等地［7-8］，《甘肃省中药材标准》将其收载为地方标准［9］，命名为“甘肃刺五加”，其根、根茎和茎是生产“五加片”的原料［10-11］，制剂功效与刺五加相近［12-13］。短柄五加含黄酮［14-17］、挥发油［18-20］、木质素［21-22］、饱和脂肪酸［23］、氨基酸及多种微量元素［7］，有改善家兔血流状态、延长小鼠及家蚕寿命的药理作用［9，23］。目前关于短柄五加的化学成分有较多深入研究，但对其喂养90 天的试验鲜有报道，本研究对短柄五加进行90 天喂养试验，旨在了解较长时间服用短柄五加的安全性，为保护及合理开发利用短柄五加提供评价依据。

1 材料与方法

1.1 短柄五加由陇东学院/甘肃省高校陇东生物资源保护与利用省级重点实验室提供。加工成固体浅棕色粉末。人体日推荐量为2 g/60 kg（体质量）。

1.2 主要试剂与仪器BC-5000 VET 型全自动动物血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；BS-400 型全自动血液生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；TP1020型全自动组织处理器、ST5010 型自动染色机（徕卡公司）等。

1.3 动物SPF 级SD 大鼠购于兰州大学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK（甘）2018-0001。实验动物饲料（北京科奥协力饲料有限公司，质量合格证号：196335）。大鼠饲养环境为SPF 级，室温（22±2）℃，相对湿度40%～55%，实验动物使用许可证号：SYXK（甘）2018-0004。实验动物在试验前均适应性喂养3天。

1.4 方法

1.4.1 受试物配置 恒温水浴锅调节至80～90 ℃，整个提取过程水温保持不变。称取受试物340 g，加入80～90 ℃蒸馏水3400 mL，放入水浴锅中提取30 min。然后将提取液全部倾出，再加入已预热的蒸馏水3400 mL，再提取1 次。将2 次提取液混合，浓缩至340 mL，此时受试物提取液浓度为1.00 g/mL，冰箱保存，每周配制1次。

1.4.2 动物分组及给药 体质量65～80 g 大鼠80 只，随机分为4 组，每组20 只，雌雄各半，单笼喂养。设低、中、高3个剂量组（4.3、8.5、17.0 g/kg（体质量）和一个阴性对照组，低、中、高剂量组分别相当于人群推荐日摄入短柄五加量的129、258、516 倍，阴性对照组予等容量蒸馏水。各剂量组大鼠均按1.0 mL/100 g（体质量）灌胃。

1.5 统计学方法采用SPSS 16 软件分析数据，计量资料以表示，方差齐时采用方差分析；方差不齐，变量转换后仍方差不齐，采用秩和检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般表现试验过程中大鼠毛发正常，无异常行为表现，无死亡。

2.2 大鼠体质量、总进食量及总食物利用率各剂量组大鼠体质量、总进食量、总食物利用率与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠体质量增加及总食物利用率比较（）

2.3 血液学检查

2.3.1 血常规 试验中期低剂量组雌性大鼠的红细胞(red blood cell，RBC)、单核细胞(monocyte，M)计数均高于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），中剂量组雌性动物红细胞(red blood cell，RBC)、白细胞(white blood cell，WBC)、淋巴细胞(lymphocyte，LC)、嗜中性粒细胞（neutrophil，PMN)和M计数均高于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；末期低、中剂量组雌性动物WBC、LC、PMN、嗜酸性粒细胞（eosinophil，EOS)高于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），中剂量组雌性动物M 高于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），但均在正常值范围内，故无生物学意义。其余各项指标与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。试验中、末期雄性大鼠各剂量组各指标与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2—3。

表2 各组大鼠试验中期血常规（）

表2 各组大鼠试验中期血常规（）

注：与阴性对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均无生物学意义

表3 各组大鼠试验末期血常规（）

表3 各组大鼠试验末期血常规（）

注：与阴性对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均无生物学意义

2.3.2 血液生化指标 雌性大鼠高剂量组谷草转氨酶(glutamic-oxalacetic transaminease，AST)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、甘油三酯(triglyceride，TG)水平低于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），雄性大鼠低剂量组BUN、肌酐（creatinine，Cr）、中剂量组TG、总蛋白（total protein，TP）、高剂量组TP 值低于阴性对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），但均在正常值范围内，故无生物学意义。其余各项指标与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 各组大鼠血液生化指标（）

表4 各组大鼠血液生化指标（）

注：与阴性对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均无生物学意义

2.4 脏器系数及病理组织检查经口连续给予不同剂量受试物90 天后经大体解剖，各剂量组大鼠肝、脾、肾、睾丸的质量和脏/体比值与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），且均在正常值范围内。经肉眼观察与显微镜下观察，各剂量组与阴性对照组大鼠主要脏器的外观形态、表面色泽、轮廓体积、位置、脏器结构与细胞内容物等均未见异常病理改变。

3 讨论

按4.3、8.5、17.0 g/kg（体质量）连续灌胃大鼠短柄五加90 天，大鼠一般状况未见明显异常；体质量、总摄食及总食物利用率比较差异均无统计学意义；血液学某些指标高于或低于阴性对照组，但均在实验室正常值参考范围内，并且无剂量反应关系；动物解剖后脏/体比值各组间比较差异无统计学意义，病理组织学未见病变。

综上所述，短柄五加喂养大鼠90 天，观察到的无害作用剂量最大为17.0 g/kg（体质量），本研究可为短柄五加长期服用及推广应用提供实验依据。