摩罗丹(浓缩丸)对胃黏膜损伤保护及镇痛抗炎止血作用研究

郝莉雨 于泽玥 孙建辉 李宗源 陈红映 霍海如 李洪梅

(中国中医科学院中药研究所，北京，100700)

摩罗丹(浓缩丸)是一种中成药丸剂，由百合、茯苓、玄参、乌药、泽泻、麦冬等18味药材制成，具有和胃降逆、健脾消胀、通络定痛功能，用于治疗慢性萎缩性胃炎，症见胃疼、胀满、痞闷、纳呆、嗳气等，临床效果良好1-2]。由于人们快节奏的生活方式以及不良的饮食习惯，各种理化损伤因子(包括长期食用粗纤维食品、烫食、浓茶、咖啡、烟酒，以及长期服用对胃黏膜有损伤的非甾体抗炎药)刺激已成为当前慢性非萎缩性胃炎(Chronic Non-Atrophic Gastritis，CNAG)的主要致病因素，也使CNAG的发病率逐年增加[3]。CNAG若未在早期得到有效控制，随病情加重会逐步形成慢性萎缩性胃炎并存在后续癌变的可能[4]。

本研究以摩罗丹浓缩丸为受试药物，观察其对大鼠胃黏膜损伤的修复作用，以及抗炎镇痛止血作用，探究摩罗丹(浓缩丸)治疗CNAG的作用效果，为增加摩罗丹(浓缩丸)在药效学方面的研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级ICR小鼠，110只，体质量18～22 g；SPF级SD大鼠，120只，体质量180～220 g，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK(京)2016-0006。小鼠和大鼠饲育于屏障环境，实验动物使用许可证号：SYXK(京)2019-0003。本研究所涉及动物实验通过中国中医科学院中药研究所动物福利伦理委员会审批(伦理审批号：2020B025)。

1.1.2 药物 摩罗丹(浓缩丸)(邯郸制药股份有限公司，生产批号：S00518003)；枸橼酸铋钾颗粒(丽珠集团丽珠制药厂，生产批号：1901008)；云南白药胶囊(云南白药集团股份有限公司生产，生产批号：ZLB1914)；布洛芬颗粒(沈阳福宁药业有限公司，生产批号：190101)。

1.1.3 试剂与仪器 无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司，生产批号：20181210)；盐酸(北京化工厂，生产批号：20101106)；冰醋酸(北京化工厂，生产批号：20170401)；甲醛(天津市大茂化学试剂厂，生产批号：20171111)；碳酸氢钠(国药集团化学试剂有限公司，生产批号：20170628)；水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司，生产批号：20130201)；吲哚美辛片(消炎痛)(濮阳市汇元药业有限公司，生产批号：191003)；伊文思蓝(北京索莱宝科技有限公司，生产批号：NO.828J401)；0.9%氯化钠注射液(石家庄四药有限公司，生产批号：1908263201)；数位型游标卡尺(上海市宝工工具有限公司，型号：PD-151)；电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司，德国，型号：Sartorius BSA323S-CW)；电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，美国，型号：PL203 METTLER TOLEDO)；酶标仪(伯腾仪器有限公司，美国，型号：BioTek Epoch)。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备

1.2.1.1 摩罗丹(浓缩丸)对吲哚美辛致大鼠胃黏膜损伤的影响 取健康SD大鼠，体质量180～220 g，按体质量采用分层区组随机化方法(将同一性别大鼠，按体质量从小到大排序，赋予随机数字后，每6只为一区组，区组内按随机数字进行排序，不同区组内同一序号大鼠为一组)进行分组，分别为正常对照组、模型对照组、摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量组、阳性对照药枸橼酸铋钾颗粒组，每组10只，雌雄各半。各组分别灌胃给药，模型对照组灌胃给予等体积的纯净水，1次/d，连续4 d，第3天给药后禁食，自由饮水。第4天给药2次，间隔4 h，第1次药后0.5 h，除正常对照组外，将其余各组大鼠用吲哚美辛混悬液(45 mg/kg)皮下注射制备大鼠胃黏膜损伤模型。

1.2.1.2 摩罗丹(浓缩丸)对盐酸-乙醇致大鼠胃黏膜损伤的影响 取健康SD大鼠，体质量180～220 g，按体质量采用分层区组随机化方法(将同一性别大鼠，按体质量从小到大排序，赋予随机数字后，每6只为一区组，区组内按随机数字进行排序，不同区组内同一序号大鼠为一组)进行分组，分别为正常对照组、模型对照组、摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量组、阳性对照药枸橼酸铋钾颗粒，每组10只，雌雄各半。各组分别灌胃给药，模型对照组灌胃给予等体积的纯净水，1次/d，连续4 d，第3天禁食16 h以上，自由饮水，第4天给药后3 h，灌胃给予盐酸-乙醇溶液(1 L含盐酸150 mmol，无水乙醇600 mL)1.5 mL/只，制备盐酸-乙醇致大鼠胃黏膜损伤模型。

1.2.1.3 摩罗丹(浓缩丸)对小鼠出血时间、凝血时间的影响 取健康SPF级ICR小鼠，体质量18～22 g，按体质量采用分层区组随机化方法(将同一性别小鼠，按体质量从小到大排序，赋予随机数字后，每6只为一区组，区组内按随机数字进行排序，不同区组内同一序号小鼠为一组)进行分组，分别为空白对照组、摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量组、阳性对照药云南白药胶囊组，每组10只，雌雄各半。各组分别灌胃给药，空白对照组灌胃给予等体积的纯净水，1次/d，连续给药3 d。末次给药后1 h，测定出血时间和凝血时间。

1.2.1.4 摩罗丹(浓缩丸)对醋酸致小鼠疼痛反应和腹腔毛细血管通透性增高的影响 取健康SPF级ICR小鼠，体质量18～22 g，按体质量采用分层区组随机化方法(将同一性别小鼠，按体质量从小到大排序，赋予随机数字后，每5只为一区组，区组内按随机数字进行排序，不同区组内同一序号小鼠为一组)进行分组，分别为模型对照组、摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量组、阳性对照药布洛芬颗粒组，每组10只，雌雄各半。各组分别灌胃给药，模型对照组灌胃给予等体积的纯净水，1次/d，连续给药3 d。

1.2.2 给药方法 摩罗丹(浓缩丸)3次/d，每次1袋(16丸，1.84 g)，临床每日拟用量为48丸，按动物与人体表面积比折算，小鼠等效剂量为6.24丸/kg设为中剂量，高剂量、低剂量分别为12.48丸/kg、3.12丸/kg；大鼠等效剂量为4.32丸/kg设为中剂量，高剂量、低剂量分别为8.64丸/kg、2.16丸/kg。枸橼酸铋钾颗粒，临床用量为4.0 g，按动物与人体表面积比折算，大鼠等效剂量的2倍为0.72 g/kg。云南白药胶囊，临床用量为1～2 g，按动物与人体表面积比折算，小鼠等效剂量的2倍为0.52 g/kg。布洛芬颗粒临床用量为0.8 g，按动物与人体表面积比折算，小鼠等效剂量的2倍为0.21 g/kg。大、小鼠均灌胃给药，灌胃量小鼠20 mL/kg体质量，大鼠10 mL/kg体质量。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 摩罗丹(浓缩丸)对吲哚美辛致大鼠胃黏膜损伤的影响 注射吲哚美辛混悬液7 h后将大鼠用10%水合氯醛溶液(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，打开腹腔，结扎幽门和贲门后将全胃取出，向胃内注入10%甲醛10 mL，再将胃浸泡于10%甲醛中，以固定胃内外层。沿胃大弯剪开胃，用自来水轻轻冲洗去掉胃内容物，将胃展平在玻璃板上，测量溃疡长度，以溃疡长度的总和作为溃疡指数。

1.2.3.2 摩罗丹(浓缩丸)对盐酸-乙醇致大鼠胃黏膜损伤的影响 灌胃盐酸-乙醇溶液1 h后将大鼠用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，打开腹腔，结扎幽门和贲门后将全胃取出，向胃内注入10%甲醛10 mL，再将胃浸泡于10%甲醛中，以固定胃内外层。沿胃大弯剪开胃，用自来水轻轻冲洗去掉胃内容物，将胃展平在玻璃板上，测量溃疡长度，以溃疡长度的总和作为溃疡指数。

1.2.3.3 摩罗丹(浓缩丸)对小鼠出血时间、凝血时间的影响 出血时间测定：固定小鼠，以利剪将小鼠尾尖3 mm处剪断，待血液自行流出开始计时，此后每隔30 s用滤纸吸去血滴1次，至血液自然停止为止，即为出血时间。凝血时间测定：小鼠眼眶内侧取血，于载玻片两端各滴1滴血，血滴直径约5～10 mm，立即开始计时，此后每隔30 s用干燥针头自血滴边缘向里轻轻挑动1次，至针头能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间，另一滴血供最后复试。

1.2.3.4 摩罗丹(浓缩丸)对醋酸致小鼠疼痛反应和腹腔毛细血管通透性增高的影响 末次给药后1 h，尾静脉注射0.5%伊文思蓝液0.1 mL/10 g，5 min后腹腔注射0.8%醋酸0.1 mL/10 g，再5 min后观察15 min内小鼠典型的扭体次数(伸展后肢、腹部收缩和扭曲身体)，然后立即腹腔注射5 mL生理盐水注射液，处死小鼠，轻揉腹部50次，剪开皮肤，用吸管吸取腹腔液，离心，取上清在波长590 nm下测吸光度，并计算抑制率。

2 结果

2.1 摩罗丹(浓缩丸)对吲哚美辛致大鼠胃黏膜损伤的影响 与正常对照组比较，模型对照组大鼠溃疡指数明显上升，差异有统计学意义(P<0.01)；与模型对照组比较，摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量组以及阳性药枸橼酸铋钾颗粒组大鼠的溃疡指数明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。其中枸橼酸铋钾颗粒对大鼠胃溃疡的抑制率为62.73%，摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量对吲哚美辛所致胃黏膜损伤大鼠胃溃疡的抑制率分别为60.29%、55.52%以及51.90%。见图1。

图1 摩罗丹(浓缩丸)对吲哚美辛致大鼠胃黏膜损伤的影响

2.2 摩罗丹(浓缩丸)对盐酸-乙醇致大鼠胃黏膜损伤的影响 与正常对照组比较，模型对照组大鼠溃疡指数明显上升，差异有统计学意义(P<0.01)；与模型对照组比较，摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量组以及阳性药枸橼酸铋钾颗粒组大鼠的溃疡指数明显降低，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。其中枸橼酸铋钾颗粒对大鼠胃溃疡的抑制率为89.06%，摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量对盐酸-乙醇所致胃黏膜损伤大鼠胃溃疡的抑制率分别为52.75%、37.22%以及35.00%。见图2。

图2 摩罗丹(浓缩丸)对盐酸-乙醇致大鼠胃黏膜损伤的影响

2.3 摩罗丹(浓缩丸)对小鼠出血时间、凝血时间的影响 与空白对照组比较，阳性药云南白药胶囊组、摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量组小鼠出血时间明显缩短，差异有统计学意义(P<0.05)；与空白对照组比较，阳性药云南白药胶囊组以及摩罗丹(浓缩丸)高剂量组小鼠的凝血时间明显缩短，差异有统计学意义(P<0.05)。见图3。

图3 摩罗丹(浓缩丸)对小鼠出血时间、凝血时间的影响

2.4 摩罗丹(浓缩丸)对醋酸致小鼠疼痛反应和腹腔毛细血管通透性增高的影响 在镇痛实验中，与模型对照组比较，阳性药布洛芬颗粒以及摩罗丹(浓缩丸)高剂量组小鼠的扭体次数明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。其中布洛芬颗粒对醋酸致小鼠疼痛反应的抑制率为53.6%，摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量对醋酸致小鼠疼痛反应的抑制率分别为32.1%、24.9%以及22.9%。见图4。

图4 摩罗丹(浓缩丸)对醋酸致小鼠疼痛反应的影响

在腹腔毛细血管通透性增高实验中，与模型对照组比较，阳性药布洛芬颗粒组、摩罗丹(浓缩丸)高、中剂量组小鼠腹腔液吸光度明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。其中布洛芬颗粒对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的抑制率为43.27%，摩罗丹(浓缩丸)高剂量、中剂量、低剂量对腹腔毛细血管通透性增高的抑制率分别为34.98%、32.23%以及14.95%。见图5。

图5 摩罗丹(浓缩丸)对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响

3 讨论

CNAG是临床常见病，常伴有胃溃疡、穿孔、出血等发生[5]，“正常胃黏膜→非萎缩性胃炎→萎缩性胃炎→肠上皮化生→异型增生→胃癌”的演变规律也得到众多学者的认可[5-6]。因此，有效控制非萎缩性胃炎的发生对控制后续病情加重有十分重要的意义。现代西医学对于CNAG的治疗方式主要以药物为主，包括抗幽门螺杆菌治疗、胃黏膜保护药、制酸/抑酸药、促胃肠动力药以及抗焦虑抑郁药等，虽有一定疗效但远期疗效并不十分理想[7-8]。

根据临床正常，CNAG属于中医“胃脘痛”“痞满”“反酸”等范畴[9]。中成药干预是我国慢性胃炎治疗的重要组成部分[10]。摩罗丹(浓缩丸)可单独用于治疗胃癌前病变和胃癌前疾病(主要指萎缩、肠化生、异型增生)，临床效果显著且具有较好的安全性[11-12]。在其主要成分中，百合清热透邪，甘润微寒，经现代药理学研究表明，百合中含有的果胶及磷脂类物质，服用后可保护胃黏膜，治疗胃黏膜损伤，并具有一定的抑制幽门螺杆菌作用[13-14]；乌药辛开温散，能顺气畅中，散寒止痛，且善于疏通气机，用于治疗寒凝气滞胸腹诸症，经现代药理学研究表明，乌药具有较强的镇痛、抗炎作用，并能影响某些胃肠激素的分泌，从而兴奋胃平滑肌，刺激幽门运动，以增强胃窦运动[15]。百合与乌药配伍使用出现在大量治疗胃病的经典方剂中，二者相配一寒一温，一升一降，润而不滞，辛而不燥，具有行气和胃、健脾止痛之功效[16]。其他主要成分如茯苓、白术，为健脾药，茯苓健脾燥湿、利水消肿，白术健脾益气、燥湿利尿，被前人誉为“补气健脾第一要药”，可主要针对慢性胃炎脾气虚的病机特点[17-18]。不同成分配伍使用，使摩罗丹(浓缩丸)从多种角度针对CNAG的病机产生疗效。

本研究模拟CNAG常见的症状表现进行造模，在相应症状上采用对症西药作为阳性对照药，为确保阳性对照药结果可靠，阳性对照药均采用2倍临床等效剂量进行对照。研究中，以吲哚美辛模拟非甾体抗炎药，以盐酸-乙醇所致大鼠胃黏膜损伤实验模拟生活中饮酒导致的CNAG、胃溃疡等疾病状态；以小鼠出血凝血实验模拟临床常见的CNAG伴糜烂；以小鼠毛细血管通透性实验、小鼠扭体实验来模拟CNAG可能出现的炎症、疼痛状态，在上述模型基础上给予摩罗丹(浓缩丸)进行治疗，评价摩罗丹(浓缩丸)在治疗CNAG中的药效作用。

结果显示，摩罗丹(浓缩丸)对吲哚美辛、盐酸-乙醇致大鼠胃黏膜损伤有保护和治疗作用，对醋酸致小鼠疼痛反应具有抑制作用，对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高具有抑制作用，并能明显缩短小鼠出血以及凝血时间，具有良好的止血效果，且其作用效果均非劣于阳性对照药组，表明摩罗丹(浓缩丸)各剂量组对CNAG中的胃黏膜损伤、出血、疼痛、炎症均具有治疗作用。

综上所述，摩罗丹(浓缩丸)对吲哚美辛等非甾体抗炎药、乙醇刺激引起的胃黏膜破损、溃疡具有治疗作用，对CNAG中常见的糜烂出血、疼痛、炎症也同样具有治疗作用，并能有效保护胃黏膜。本研究为摩罗丹(浓缩丸)药效学作用提供新的实验依据，后期可针对CNAG其他临床表现开展实验，以进一步完善摩罗丹(浓缩丸)对CNAG的临床疗效评价。